В первых картинах никитина была некоторая упрощенность: Подготовка к ЕГЭ по русскому языку и ГИА

Подготовка к ЕГЭ по русскому языку и ГИА

Мы думаем, что каждый, кто сдаёт единый государственный экзамен, хочет получить за него максимальное количество баллов. С хорошими результатами будет легче поступить в любой вуз. Данный раздел поможет вам приблизиться к этой цели. Здесь есть всё необходимое для успешной подготовки. Также данный раздел нередко используется учащимися вузов и ссузов.

Проверить орфографию онлайн

Математика

• Часть A:
• Согласные звонкие и глухие
• Ударение в словах
• Паронимы. Лексическое значение слов
• Склонение имен существительных, падежи русского языка
• Деепричастный оборот, примеры
• Нормы согласования и управления
• Последовательная связь предложений в тексте
• Сочетание слов. ЕГЭ по русскому языку
• Грамматическая основа предложений
• Подчинительная, сочинительная, бессоюзная связь
• Правописание причастий, разряды местоимений, предлоги, частицы
• Лексическое значение слов
• Суффиксы. Приставки. Виды, примеры, правописание
• Правописание суффиксов прилагательных, Н, НН
• Проверочные слова, безударные гласные в корне
• Правописание приставок
• Правописание безударных личных окончаний глагола
• Правописание суффиксов глаголов
• Правописание не или ни
• Правописание предлогов
• Однородные члены предложения
• Знаки препинания при обособленных согласованных определениях
• Вводные слова в предложении
• Знаки препинания при однородных членах
• Знаки препинания в предложениях
• A26
• A27
• Действительные и страдательные причастия
• Микротема, основная мысль текста
• Типы речи: описание, повествование, рассуждение
• Синонимы к словам
  
• Часть B:
• Бессуффиксный способ словообразования
• Определение части речи
• Типы подчинительной связи
• Безличные, определенно-личные, односоставные предложения
• Обособленные приложения, обстоятельства и примеры
• СПП с придаточными
• Средства связи частей текста
• Что такое эпитет метафора, сравнение
  
• Часть C:
• Сочинение ЕГЭ по русскому языку

Обществознание

За последние несколько лет тема единого государственного экзамена стала особенно актуальной. Изначально эта программа вводилась как эксперимент и уже в первые месяцы тестирования зарекомендовала себя как объективную систему тестирования выпускников. Так что же все-таки представляет из себя этот ЕГЭ?

Например, ЕГЭ по русскому языку состоит из трех частей (А, B, C). В первой части (A) 30 вопросов с одним вариантом ответа, а в части В, более сложной, чем А, всего 8 вопросов с написанием правильного ответа или выбором нескольких ответов. Каждому выпускнику одиннадцатых классов в обязательном порядке следует сдавать только 2 предмета: русский язык и математика, остальные по выбору. Допускаются к экзамену только ученики, имеющие оценки не ниже удовлетворительных, то есть без двоек в аттестате. Проверка работ производится другими преподавателями в другом районе, дабы исключить всякую возможность коррупции.

В школах многие учителя буквально наводят ужас на своих учеников, рассказывая о беспощадности ЕГЭ, в большинство ВУЗов принимают только с определенным количеством баллов, а различные организации твердят о ЕГЭ, чтобы привлечь к себе клиентов, желающих получить достойную подготовку к экзамену. Должен сказать, что квалифицированная подготовка дает свои, далеко не плохие, результаты. Но те, кто уже прошел через это «страшное» испытание, утверждают, что для учеников даже со средними оценками экзамен не должен показаться слишком уж сложным, по крайней мере невыполнимым. Нужно лишь приложить немного усилий, а именно выучить хотя бы самые важные правила, пройденные за весь учебный период, ведь если вы не ленились и хотя бы иногда открывали учебники, то что-то вы должны знать. Очень хорошо помогают различные книжки, предлагающие собственные примеры заданий, примеры их решений и дающие различные рекомендации по сдаче экзамена. Подобной литературой буквально завалены все книжные магазины, причем стоят они очень дешево. Для кого-то, естественно, и этого будет недостаточно. В таких случаях я бы рекомендовал обращаться к своим учителям, большинство из которых готовы помогать бесплатно. Я знаю, что во многих школах учителя предлагают организовывать собственные школьные подготовительные курсы за небольшую плату, а то и вовсе бесплатно.

Что же касается ГИА, то тут тоже ничего особо сложного нет, разница лишь в том, что задания в работах немного легче и сам экзамен не так важен как ЕГЭ, ведь ГИА проводится только среди девятых классов.

В заключение хотелось бы сказать, что сдать экзамен не так сложно, как пугают учителя, но нельзя преуменьшать важность и серьезность ЕГЭ, а также степень легкости экзамена, ведь, как ни крути, а на раз плюнуть никакие экзамены не даются: всё требует подготовки и старания.

Объяснить по какому правилу в слове НЕОПРЕДЕЛЕННО пишется 2 буквы Н. В первых картинах И.Н

1. В каком случае между однородными членами предложения не ставится запятая? а) Если однородные члены связаны союзами а, но. б) Если однородные члены … связаны союзом и.

7 9.2 Анализ средств выразительности. Укажите варианты ответов, в которых средством выразительности речи являетсе фразеологизм. 1) Неизменный адъютант … Тузик, виляя косматым хвостом, подбежал к девочкам. 2) Жилин бы только презрительно посмотрел на них и сказал: «Русские офицеры великодушны… Марш! На все четыре стороны…» 3) Валя слетала домой и принесла в корзинке плюшевого слона, резинового верблюда и матрёшку — всё, что на скорую руку в детской собрала. 4) Ты будто Жилин, русский офицер, из крепости к своей маме верхом едешь. 5) Идут домой, к матери с двух сторон, как котята, жмутся. Ответ: 0 2021 ООО «Издательство «Национальное образование Копирование, распространение и спользование в коммерческих целях беа исьменного разрешения правообладател не опускается

корень слова разрывная​

Глагол Род пишите Спасибо вам большое

Существует ли слово “пылитеть”?

Спиши, вставив пропущенные буквы. (За) ревел медве..ь (со) сна, И в густом л..су, Bздрогнув, стукнула с..сна Ш..шкою л..су.​

и 3. Составь запиши словосочетания, изменяя форму слов в скобках. Укажи падеж имён существительных. отъехал (пристань), показали (дядя Петя), живёт (г … ород Казань), работает (завод), идёт (площадь)

Произведите синтаксический разбор двусоставного предложения. Укажите типы сказуемых и второстепенных членов предложения1. Как светел мир! Как воздух с … ладок! (М. Дудин.) 2. Земля вокруг них окопана, разрыхлена и, наверное, удобрена (И. Шкапа). 3. Костер перед нами расцвел (М. Горький). 4. Он был красив, этот вольный дикарь (Г. Троепольский). 5. Как и в прошлую ночь, она тревожилась малейшего шума… (А. Чехов.) 6. Мимо него с грохотом промчалась повозка (А. Чехов).​

Спишите предложение, раскрывая скобки, расставляя недостающие знаки препинания. В конце предложения не забудьте поставить точку. Холодные брызги на с … олнце искрят а в порту корабли(большегрузы) стоят.

Укажите предложение, в котором есть косвенное дополнение. 1) Пойду выпью воды. 2) Горные хребты пересекали приморскую страну. 3) Чистое зло никогда … не будет править миром. 4) Нужно добавить чуть-чуть горчицы. 5) Мне жалко радости былой. 6) Мария Петровна предложила чаю.

Живопись Петровского периода, история русского портрета 18 века

 

 А. Вахрамеева

В живописи петровского времени особенно заметен резкий скачок от старого к новому, проявившийся в изучении за минимальные сроки европейских традиций и ознакомлении с накопленным столетиями опытом иноземных художественных стилей.
С началом XVIII века важную роль в живописи начинает играть картина маслом и светский сюжет. «В старину князья и бояре изредка позволяли заезжему «немчину» списывать свое «обличье», но начиная с конца XVII века и особенно XVIII портрет входит в настоящую моду, и кто только может заказывает «персонному мастеру» списать себя и своих близких».[1]  Среди многочисленных станковых картин, панно и миниатюр главное место отводится портрету во всех разновидностях: парадному и камерному, погрудному и в рост.

При этом проявлялся особый интерес к самой личности портретируемого. Уже в «Преображенской серии» портретов, считавшихся долгое время изображениями царских шутов по причине участия представленных на них персонажей в таком «совете», как «Всепьянейший сумасбродный собор всешутейшего князь-папы», заметно внимание художника к «обличью» героев и даже дополнительным атрибутам (трезубец у Нептуна, натюрморт у Алексея Васильева). Однако в этих портретах еще очень много от парсун. «Это последний, заключительный аккорд древнерусской живописи».[2]
 
Неизвестный художник, Портрет Преображенской серии

Портрет И.А.Щепотева (Конец XVII — начало XVIII века)
 

На портрете с подписью «IВАНЪ ЩЕПОТЕВЪ» персонаж помещен в трехчетвертном развороте, взгляд направлен вправо. Изображение вписано в овал. Перед нами поясное изображение портретируемого. Художник, следующий традициям школы Оружейной палаты,  неплохо передает характер своего персонажа. Стоит отметить, довольно реалистичную манеру в подаче лица и отсутствие приукрашивания персонажа. По  данным сопроводительной аннотации к портрету ГТГ, перед нами стряпчий, ближайший сподвижник Петра I. Портретируемый обряжен в краснавато-коричневый кафтан. Судя по наличию бороды у персонажа, можно сделать вывод, что портрет относится к первому циклу «Преображенской серии», т.е. выполнен до Петровского указа «брить бороду на европейский манер».
Среди живописных недоработок портрета «Преображенской серии» хорошо  заметно неумение показать глубину пространства, моделировать  объемность формы, а также отсутствие анатомической правильности в изображении человеческого тела и затруднение в решении светотеневой задачи.

«Преображенская серия» — попытка оторваться от протопортретной ситуации в форме парсуны и перейти к решению портретных задач.
Поражает воображение, насколько много русским художникам нужно будет освоить, какой невероятный рывок сделать в совершенствовании своего мастерства, чтобы от «Преображенской серии» последнего десятилетия XVII века прийти к никитинскому портрету наподобие портрета  цесаревны Анны Петровны (1716 г.). Такой качественный подъем лишь за  двадцать лет!
 

 

 

Художник Никитин Иван Никитич 

Портрет цесаревны Анны Петровны (не позднее 1716 г.)

Посмотреть полный размерИ.Н. Никитина называют одним из первых русских портретистов. О нем можно говорить как о величайшем художнике петровской эпохи, одном из основоположников новой русской живописи. Перед нами произведение, относящееся к раннему творчеству живописца, портрет написан до его четырехлетней пенсионерской  поездки в Италию. С несвойственным своему времени мастерством художник передает объем и естественную позу девочки. Портрет овального  формата помещен в соответствующую раму. Изображенная девочка стоит почти в анфас, взгляд направлен слегка в сторону. Перед нами поясной парадный портрет, в представлении модели есть все атрибуты официальной символики венценосной особы: от прически и костюма до выражения лица. На портере не ребенок, а маленькая взрослая, что продиктовано выбранным форматом изображения.

Перейдем к недостаткам, на этом полотне проглядывает некоторая упрощенность фигуры модели: силуэт словно выхвачен из мрака неопределенного пространства прожектором яркого света и находится вне связи с окружающей средой. Живописец еще непрофессионально изображает анатомическое строение фигуры девочки и неумело передает фактуру материала – алого бархата, парчи и кружев платья, меха горностаевой мантии. Ломкие складки мантии  чем-то напоминают древнерусские пробела.
Руки девочки полностью сокрыты пресловутой драпировкой  тяжелого одеяния. По Випперу, отсутствие одной руки противоречит классической ясности. «Барокко избегает <…> максимальной отчетливости. Он не хочет высказываться до конца в тех случаях, когда частность может быть угадана. Больше того: красота вообще не связывается теперь с предельной ясностью, но переносится на формы, заключающие в себе известный элемент непостижимости и всегда как бы ускользающие от зрителя. Интерес к отчеканенной форме сменяется интересом к неограниченной, исполненной движения видимости».[3] Стилем продиктована  подчеркнутая декоративность полотна, сказавшаяся в плоскостности фона и насыщенности цвета.
В навыках работы со светом здесь еще много от традиционной русской «парсунной»  живописи и портретов «Преображенской серии»: неудачная светотеневая моделировка (высветление от темного к светлому),  отсутствие  рефлексов, ровный, рассеянный свет.

 

ЧИТАТЬ ДАЛЕЕ ОБ ИСТОРИИ РУССКОЙ ЖИВОПИСИ И РУССКОГО ПОРТРЕТА 18 века

АННЕНСКИЙ-ЕЛИЗАВЕТИНСКИЙ ПЕРИОД >>>>

ЕКАТЕРИНИНСКИЙ ПЕРИОД>>>>>

ПАВЛОВСКИЙ ПЕРИОД>>>>

АЛЕКСАНДРОВСКИЙ ПЕРИОД>>>>

 

ЛИТЕРАТУРА

[1] Грабарь И.Э. Восемнадцатый век и расцвет портретного искусства. Введение в «Историю русского искусства»// Игорь Грабарь о русской архитектуре: Исследования. Охрана памятников М., 1969. С. 63
[2] Ильина Т.В. На переломе: Русское искусство середины XVIII в. – СПб., 2010. – С.62.
[3] Г.Вельфлин. Основные понятия истории искусств. М., 2009. С. 233-234.

[4] Н. Преснова. Все Аргуновы. // Журнал «Наше Наследие» № 77. 2006.

 

 

 

Сложное предложение Практикум.

Сложное предложение Практикум.

А-1 Леонардо да Винчи в «Споре живописца с поэтом» утверждал преимущество живописи перед поэзией ( ) и многие современники разделяли его точку зрения.

1) Простое предложение с однородными членами, перед союзом И запятая не нужна.

2) Сложное предложение, перед союзом И запятая не нужна.

3) Сложное предложение, перед союзом И нужна запятая.

• Простое предложение с однородными членами, перед союзом И нужна запятая.

А-2 В каком варианте ответа правильно указаны все цифры, на месте которых должны стоять запятые?

Эпоха (1) начавшаяся (2) после открытий Галилео Галилея (3) и завершившаяся работами Исаака Ньютона (4) обозначала новый этап в развитии науки и техники.

1) 1 2) 2, 4 3) 1, 4 4) 1,3

  А-3 Определите соответствие и укажите вид придаточного

• Солнце светило так ярко, что все кругом сверкало и искрилось.
• Известно, что слоны в диковинку у нас.
• Отдаленный гул вдруг проник в тенистое ущелье, где ехали путники.

4)Как цыганский табор, расположились у

дороги гости фестиваля.

• 1) СПП изъяснительное
• 2) СПП обстоятельственное
• 3) ПП
• 4) СПП определительное

Записать так:

А-3 1 – 4, придаточное причины

Характеристика предложения:

Предложение простое, осложнённое (распространённым определением, определением, выраженным причастным оборотом, обстоятельством, выраженным деепричастным оборотом, соднородными членами предложения…)

Предложение СС, союз –

Предложение СП, вид придаточного, союз (союзное слово) –

Записать так:

А-4 – СП, придаточное времени, союз когда;

А-4 В первых картинах И.Н.Никитина есть некоторая упрощённость потому что фигуры выхвачены из темноты неопределённого пространства лучом яркого света и существуют вне связи со средой.

А-5

Государственная Третьяковская галерея основателем которой был московский купец Павел Михайлович Третьяков в наши дни признана музеем русского искусства с мировым значением.

А-6

1/Дверь подъезда внезапно распахнулась/ и 2 /на улицу выскочил крепкий молодой человек 3 / который 4 /если бы Алексей не успел в последний момент посторониться/ наверняка налетел бы прямо на него/.

А-7

• Мышление человека обеспечивает способность правильно реагировать на новую ситуацию для разрешения которой нет готового рецепта.
• А-8
• Язык — это основа национальной памяти и его надо беречь.
• А-9
• Почти не отступая от сюжета гоголевской повести и по возможности сохраняя характерный гоголевский язык Н.А. Римский-Корсаков создал либретто оперы «Вечера на хуторе близ Диканьки».

А-10 Расставьте знаки препинания и дайте характеристику каждому предложению.

• 1) В Средневековье появились термометр и барометр телескоп и микроскоп первая печатная книга и газета.
• 2) Одинокие рыцари либо присоединялись к сложившимся группам либо образовывали свою собственную.
• 3) У византийских мастеров учились архитекторы и художники европейских и азиатских стран.

А-11 В каком предложении запятая не нужна? Почему?

1. Вопрос о происхождении жизни на Земле во все времена имел как познавательное так и мировоззренческое значение.

2 . Сама жизнь диктует художнику и сюжет и композицию картины и выбор красок.

3. В состав фразеологизма могут входить устаревшие слова или слова в переносном значении.

4 Своими пьесами и рассказами Чехов создал самобытный и совершенно автономный мир.

А-12. Укажите правильную характеристику предложения.

Для метода голландских художников определяющее значение имеет опыт непосредственного созерцания ( ) и реализации его в художественном образе.

1. Простое предложение с однородными членами, перед союзом И нужна запятая.

2 . Сложносочинённое предложение, перед союзом И нужна запятая.

3 Простое предложение с однородными членами, перед союзом И запятая не нужна.

4 . Сложносочинённое предложение, перед союзом И запятая не нужна.

Записать так:

А-12 – 5

Самопроверка.

А- 1 – 3

А- 2 — 3

А- 3 – 1 -2, с придаточным степени; 2 – 1; 3 -4; 4 — 3

А- 4 – СП, причины, потому что

А- 5 – СП, определительное

А- 6 — с разными видами связи; между 1 и 2 связь сочинительная, 3 – придаточное определительное; 4 — условия

А- 7 СП, определительное

А- 8 — СС

А- 9 — ПП

А- 10 1 – простое, осложнённое однородн. чл.; 2 — простое, осложнённое однородн. чл.; 3 — простое, осложнённое однородн. чл.;

А- 11 — 4 союз И соединяет разные группы однородных членов предложения

А- 12 — 3

Оценивание.

Верно решено:

6 – 7 заданий – оценка «3»

8 — 10 заданий – оценка «4»

10 -11 заданий – оценка «5»

Памятник Петру I («Медный всадник»).

Гг.

Санкт-Петербург.

сходство. В духе классицизма он создал обобщённый, идеальный об­раз, в котором соединяются сила и изящество.

Феодосий Фёдорович Щедрин (1751 — 1825) являлся представите­лем династии художников: его стар­ший брат Семён и сын Сильвестр были пейзажистами.

Щедрин — один из немногих рус­ских скульпторов того времени, умевших изображать обнажённое те­ло в мраморе. Статуи «Венера» (1792 г.), «Диана» (не позднее 1798 г.), а также исполненные для петергоф­ских фонтанов «Нева» (1804 г.) и «Си­рены» (1805 г.) воплощают античный идеал женской красоты.

Мастер прославился благодаря скульптурным украшениям на зда­нии Адмиралтейства в Петербурге, перестроенном по проекту А. Д. За­харова. Но этот ансамбль относит­ся уже к XIX в. — не только по вре­мени создания, но и по стилю.

ЖИВОПИСЬ

ЖИВОПИСЬ ПЕРВОЙ ПОЛОВИНЫ XVIII ВЕКА

До начала XVIII столетия в русской живописи развивались преимуще­ственно иконописные традиции,

184

По воспоминаниям современников, в России в то время любые изобра­жения принимали за иконы: неред­ко, приходя в дом чужеземца, рус­ские по обычаю кланялись первой попавшейся им на глаза картине. Однако в XVIII в. живопись посте­пенно стала приобретать европей­ские черты: художники осваивали линейную перспективу, позволяю­щую передать глубину пространст­ва, стремились правильно изобра­жать объём предметов с помощью светотени, изучали анатомию, что­бы точно воспроизводить человече­ское тело. Распространялась техни­ка живописи маслом, возникали новые жанры.

Особое место в русской живопи­си XVIII в. занял портрет. Наиболее ранние произведения этого жанра близки к парсуне XVII в. Персонажи торжественны и статичны.

Иван Никитич Никитин (1680 — около 1742) был одним из первых русских портретистов. Уже в его ранних портретах — старшей сест­ры Петра I Натальи Алексеевны (1715—1716 гг.) и его дочери Анны Петровны (до 1716 г.) — с редким для того времени мастерством пере­даны объём и естественная поза модели. Однако в этих работах оче­видна некоторая упрощённость: фи­гуры выхвачены из темноты не­определённого пространства лучом яркого света и существуют вне свя­зи со средой; художник ещё неуме­ло изображает строение фигуры и фактуру материалов — бархата, меха, драгоценностей.

Вернувшись в Петербург после четырёхлетней поездки по Италии, Никитин создал лучшие свои произ­ведения, в которых проявилось воз­росшее мастерство художника. Это портрет канцлера Г. И. Головкина и портрет, известный под названием «Напольный гетман» (оба — 20-е гг.).

В Петровскую эпоху в России обосновалось немало иностранных мастеров, работавших в разных стилях и жанрах. Иоганн Готфрид Таннауэр (1680—1737), приехав­ший из Германии, писал портреты членов императорской семьи и

приближённых Петра I, а также ба­тальные полотна. Его знаменитая картина «Пётр I в Полтавской бит­ве» (10-е гг.) представляет собой распространённый в Европе тип портрета полководца на фоне сра­жения.

Луи Каравакк (1684—1754), французский мастер, приглашён­ный в Россию, вскоре достиг боль­шой славы и положения придворно­го живописца. Он работал в России много лет и писал портреты всех русских монархов от Петра до Ели­заветы. Его кисти принадлежит зна­менитый парадный портрет Анны Иоанновны в коронационном платье (1730 г.), который послужил образцом для остальных произведе­ний этого жанра. В портрете пере­дан не только внешний облик импе­ратрицы — женщины могучего телосложения, изображённой в тор­жественной и величественной позе, но и её натура, суеверная и подозри­тельная. Из мастерской Каравакка вышли многие русские живописцы середины XVIII в.

К концу 20-х — 30-м гг. XVIII в. относится недолгое, но яркое твор­чество живописца Андрея Матвееви­ча Матвеева (1701 — 1739). Проведя более десяти лет в Голландии и

Иван Никитин.

Портрет Г. И. Головкина. 20-е гг. XVIII в.

Портрет мариниста — К ретроспективе Владимира Брауна – Журнал «Сеанс»

С 21 января по 2 февраля в московском «Иллюзионе» пройдет полная ретроспектива советского классика Владимира Брауна (куратор — Александра Лаврова). Это отличная возможность познакомиться с замечательным, но не особенно известным режиссером. Чтобы подготовить зрителя, «Сеанс» републикует статью, написанную о Брауне Петром Багровым. Текст с разрешения автора приводится по книге «Кино России. Режиссерская энциклопедия. Том I» (Автор идеи и составитель — Лев Рошаль, издательство Научно-исследовательского института киноискусства, 2009).

В истории советского кино Браун занимает уникальную нишу «режиссера-мариниста». Статьи и заметки, посвященные творчеству Брауна (весьма немногочисленные), ограничиваются этой характеристикой. Но хотя начиная с 1934 г. все фильмы Брауна действительно в той или иной степени связаны с морем, звание «кинематографического Айвазовского» мало говорит о своеобразной манере одного из лидеров «кассового» кино в Советском Союзе.

«В дальнем плавании». Реж. Владимир Браун. 1945. Фото: Госфильмофонд

Докинематографическая биография Брауна практически неизвестна. Родился в семье банковского служащего. Получил блестящее образование — большая редкость для советских кинорежиссеров «первого призыва» — в 1918 г. одновременно окончил экономическое отделение Киевского коммерческого института и юридический факультет Киевского университета. До 1923 г. служил в Красной армии. Там он руководил дивизионным гарнизонным театром. Демобилизовавшись, в 1924 г. поступил на Одесскую кинофабрику ВУФКУ, откуда вскоре перевелся в Ленинград. Здесь он некоторое время занимался в киномастерской А. В. Ивановского, а в 1925 г. стал ассистентом режиссера на кинофабрике «Севзапкино» (ныне «Ленфильм»).

Он блестяще знал законы советского и зарубежного военно-морского флота, ходил в морской фуражке, и в памяти снимавшихся у него актеров остался «добрым боцманом» и «морским волком».

Кинематографическую школу Браун проходил у «традиционалистов»: учился у режиссера Александра Ивановского, затем четыре года работал ассистентом у Владимира Фейнберга и Чеслава Сабинского, одного из старейших режиссеров русского кино, специализировавшегося на мелодрамах. И Сабинский, и Ивановский неизменно служили объектами всевозможных нападок со стороны молодых «новаторов» (творчество Фейнберга критиками и коллегами попросту игнорировалось). Но в промежутке между картинами Фейнберга и Сабинского Браун успел поработать ассистентом у одного из лидеров ленинградского авангарда — родоначальника «лирического» кинематографа Евгения Червякова.

Из четырех работ Брауна в немом кино сохранилась только самая первая — «Наши девушки» (1930). Фильм, посвященный злободневной теме о выдвижении женщин на производстве, сочетал элементы жанра бытовой драмы с эстетикой пришедшего ей на смену агитпропфильма. В этой непритязательной картине не было ни эффектного жонглирования средствами киновыразительности, ни изощренного взгляда на мир — словом, ничего, что обычно отличает дебютные работы молодых режиссеров, дорвавшихся до самостоятельной постановки. Но в то же время картина удивляет зрелостью и профессионализмом: современники отмечали умение режиссера работать с актерами и «монтировать лаконично, с отчетливой простотой» (это достоинство всех без исключения работ Брауна). Агитпроповская концовка, губящая не одно талантливое произведение начала 30-х, звучала неожиданно сильно: кадры жизнерадостных комсомолок на спортивном параде, внезапно облачающихся в противогазы, вносили ноту тревожную и зловещую.

«Наши девушки». Реж. Владимир Браун, А. Галай. 1930. Фото: Госфильмофонд

Сведения о следующих двух картинах Брауна — «Парень с берегов Миссури» (1931) и «Блестящая карьера» (1932, авт. сц. Браун и М. Казаков) — крайне скудны. Первая из них поднимала тему участия иностранных рабочих в социалистическом строительстве, вторая — тему участия советских рабочих в строительстве капиталистическом. По всей видимости, оба фильма были в большой степени дидактичными, но столкновение двух миров давало материал для интересных актерских работ, которые и были отмечены критикой. В «Парне с берегов Миссури» главную положительную роль итальянского рабочего исполнял острохарактерный и нескладный Эмиль Галь, в «Блестящей карьере» циничного американского инженера играл знаменитый чтец Всеволод Аксенов, а в роли разоблачающей его женщины-инженера снялась жена Брауна, актриса немого кино Елена Егорова. Характерно, что в обоих случаях откровенно публицистическая тема решалась чисто жанровыми средствами. «Парень с берегов Миссури», по сути, являлся приключенческой картиной о группе «робинзонов», борющихся за существование в степной глуши, «Блестящая карьера» на поверку оказывалась классической мелодрамой.

В какой-то степени море было для Брауна убежищем — таким, как заграница для Михаила Ромма, Шекспир для Козинцева или, в будущем, научная фантастика для Тарковского.

Следующий фильм Брауна «Королевские матросы» (1934) снова был построен на иностранном материале и рассказывал о недавних реальных событиях: восстании английского королевского флота в Инвергордоне. Предполагалось, что картина будет звуковой, но по техническим причинам фильм снимался немым. Это обстоятельство, вкупе со слабым сценарием, обрекло фильм на неудачу. Положение спасали актеры: на одну из основных ролей режиссер пригласил немецкого артиста Ганса Клеринга, только что снявшегося у Б. Барнета в «Окраине», на другую — знаменитого ленинградского баса Павла Журавленко, главная роль матроса О’Бриена стала последней работой в немом кино Федора Никитина. Никитин в целом остался недоволен картиной, но о работе с Брауном писал с симпатией и благодарностью: вместе они пытались как-то «вытянуть» посредственный сценарий.

«Сокровище погибшего корабля». Реж. Владимир Браун. 1935. Фото: Госфильмофонд

Браун был профессионалом высокого класса, он не только безошибочно чувствовал колебания политического климата, но и тонко ощущал смену эстетик.

«Королевские матросы» — первая «морская» картина Брауна. «Много лет я был с ним дружен, — вспоминал критик Н. Коварский, — и, честно говоря, до сих пор не понимаю, откуда в этом человеке возникла странная, непонятная, неизвестно как зародившаяся любовь к морю. Между… Ораниенбаумом и Кронштадтом ходили в ту пору маленькие пароходики. Так вот его подташнивало даже во время поездок на этих пароходиках. Очевидно, любовь к морю была результатом детских увлечений, сохранившихся потом на всю жизнь». Нет оснований не верить Коварскому, но Браун не просто любил море: он блестяще знал законы советского и зарубежного военно-морского флота, ходил в морской фуражке, и в памяти снимавшихся у него актеров остался «добрым боцманом» и «морским волком». Самое удивительное при этом, что море в фильмах Брауна не полноправный герой картины (как, скажем, земля у Довженко или река в фильмах Донского), а лишь среда обитания, порою просто фон. «Морские» фильмы Брауна адресованы разной аудитории, они различаются по жанру, стилистике и тематике. Иногда море лишь косвенно участвует в картине (как в фильме «Матрос Чижик», где главный герой — бывший моряк, а все действие происходит на суше). В какой-то степени море было для Брауна убежищем — таким, как заграница для Михаила Ромма, Шекспир для Козинцева или, в будущем, научная фантастика для Тарковского. Определение «режиссер-маринист» настолько срослось с именем Брауна, что никому и в голову не приходило рассматривать его картины вне «морского» жанра (хотя кто сказал, что это жанр?). Так, в военные годы, когда самостоятельные постановки поручались исключительно «лауреатам» и «орденоносцам», само собой разумеющимся казалось назначение его вторым режиссером именно на картину «Я — черноморец» (1944), хотя режиссерская манера Александра Мачерета была абсолютно чужда Брауну. А в период малокартинья, когда весь «второй эшелон» режиссеров переключился на постановку «политико-географических» документальных лент, Брауну, естественно, досталось «Советское Черноморье» (1949). Критики воспринимали его фильмы благосклонно, коллеги-режиссеры относились к нему добродушно-снисходительно: никто не претендовал на место Брауна в советском кинематографе.

Пожалуй, «своей темы», как таковой, у Брауна не было. Наоборот, почти все фильмы его с большой степенью точности отражают политико-кинематографические веяния эпохи, в которую они создавались. Браун был профессионалом высокого класса, он не только безошибочно чувствовал колебания политического климата, но и тонко ощущал смену эстетик. Поэтому фильмы Брауна — это всегда фильмы своего времени. А в краткие периоды «оттепели» (не только большой «оттепели» середины 50-х, но и кратковременных проблесков свободы в начале 30-х или в военные годы) он создавал фильмы живые и неоднозначные.

Первый серьезный успех к нему пришел в 1935 г., после выхода на экраны картины «Сокровище погибшего корабля» — о бывшем взломщике сейфов, ставшем знаменитым водолазом. Типичные для ранних звуковых фильмов жанровая эклектика и неровный темп были главными недостатками и одновременно достоинствами этой ленты. Благодаря четкой установке режиссера на психологически тонкую разработку образа главного героя, в центре авантюрного, почти детективного сюжета — тут и покоящаяся на дне моря несгораемая касса с золотыми монетами, и колоритный буфетчик-рецидивист, и мотив «ложного подозреваемого» — оказывался внутренний конфликт героя (замечательная роль смертельно больного Николая Баталова, ставшая его последней актерской работой). Безусловно, успех фильма определялся и виртуозными подводными съемками, впервые проведенными в таком масштабе.

«Сокровище погибшего корабля». Реж. Владимир Браун. 1935. Фото: Госфильмофонд

После «Сокровища погибшего корабля» Браун занимал на «Ленфильме» заметное положение. И тем не менее почти четыре года он находился в простое. Героическая комедия «Музыкантская команда», к съемкам которой Браун и его соавтор, известный театральный режиссер Борис Зон, приступили в 1936 г., была законсервирована уже на начальной стадии. О других его замыслах неизвестно ничего.

В фильме особенно сильны чисто «хичкоковские» детали, не несущие смысловой нагрузки и служащие лишь для нагнетания атмосферы.

Отчаявшись получить постановку на «Ленфильме», в 1939 г. Браун вернулся на Украину, где и проработал до конца жизни (в 1939-1942 гг. — на Одесской киностудии, с 1945 г. — на Киевской). Уже первая его постановка на Одесской студии, «Моряки» (1939), заняла одно из первых мест в прокате. С этого времени (а по некоторым данным, и начиная с «Сокровища погибшего корабля») фильмы Брауна регулярно оказывались в первой десятке лидеров проката: «Моряки» заняли десятое место в 1940 г., «Максимка» — пятое в 1953 г., «Командир корабля» — восьмое в 1954 г., а картина «В мирные дни» и вовсе оказалась в 1951 г. на первом месте (статистические данные по многим фильмам отсутствуют, но и «Морской ястреб», и «Матрос Чижик», и «Мальва» пользовались исключительной зрительской популярностью).

Жанрово «Моряки» примыкали к серии оборонных фильмов, рекомендованных агитпропом и составлявших значительную часть кинорепертуара второй половины 30-х гг. Сюжет картины соответствовал канонам «оборонки»: вероломное нападение врага, недолгая растерянность и легкие потери с советской стороны, затем хитроумный прием (в данном случае командир инсценировал гибель подлодки) и, наконец, сокрушительная победа над супостатом. Но отнюдь не только стремительный темп, динамичный монтаж и комбинированные съемки определили успех картины. «Мирной», бытовой экспозиции, обычно занимавшей в оборонных фильмах не более пяти минут, Браун отвел две части, то есть почти треть фильма. Эти две части состояли из забавных, «необязательных» разговоров, вечеринок, флирта, поездок на автомобиле по улицам приморского городка — здесь было где развернуться и актерам (прежде всего Е. Егоровой и совсем еще молодой Антонине Максимовой), и признанному «актерскому» оператору Михаилу Каплану. Это автоматически вносило в обычную схему оборонных фильмов некоторый градус подлинности, так как «объектами» военных действий оказывались уже не условные фигуранты, но живые люди.

«Моряки». Реж. Владимир Браун. 1939. Фото: Госфильмофонд

Ситуация повторится 12 лет спустя, при создании фильма «В мирные дни» (1951). Здесь тоже формально сюжет закручен вокруг судна, ушедшего в учебное плавание и неожиданно наскочившего на мину, которую оставил недремлющий враг. Но добрая половина картины посвящена именно «мирным дням». Здесь уже опытный Браун собрал подлинный актерский ансамбль (Сергей Гурзо, Вячеслав Тихонов, Николай Тимофеев, Аркадий Толбузин, Леонид Кмит, дебютантка Элина Быстрицкая, Лидия Драновская и др.), и катастрофа настигала героев, находящихся в самом разгаре сложных и разнообразных взаимоотношений — максимально сложных для фильма периода малокартинья. Эта картина принесла режиссеру его единственную Сталинскую премию III степени (1952).

В отдельных своих картинах Браун ближе чем кто бы то ни было подошел к модели американского приключенческого фильма (и сюжетно, и стилистически).

Психологические проблемы, ставившиеся в картинах Брауна, глубиной не отличались. «Моральный» урок сводился к тому, что на флоте устав превыше всего, что необходима дисциплина и что даже самый отважный и талантливый командир может добиться успеха, только опираясь на личный состав. В фильме «Командир корабля» (1954) жена храброго, но самоуверенного командира в педагогических целях уходила от него к более дисциплинированному товарищу и возвращалась, лишь когда муж понимал свою ошибку. В результате характеры в картинах подобного рода были достаточно примитивными. Браун создавал «галерею образов» — в данном случае этот штамп абсолютно уместен. Две-три характерных черты, своеобразная внешность или запоминающаяся речевая характеристика — этого вполне хватало, чтобы персонаж занял свое скромное место в крепкой сюжетной схеме (начиная с 1945 г. основным сценаристом Брауна был мастер жанрового кино Григорий Колтунов).

«Командир корабля». Реж. Владимир Браун. 1954. Фото: Госфильмофонд

В отдельных своих картинах Браун ближе чем кто бы то ни было подошел к модели американского приключенческого фильма (и сюжетно, и стилистически). Особенно показателен в этом смысле фильм «Морской ястреб», запущенный в производство незадолго до начала войны и вышедший на экран в январе 1942 г. Советский военный корабль, замаскированный под торговое судно, рыщет по морю в поисках немецкой подводной лодки, которая, в свою очередь замаскировавшись под мирный парусник, топит иностранные корабли, заходящие в советские порты, а капитанов берет в плен. Несколько «идеологических» вкраплений в начале и в финале картины практически не влияли на восприятие этой динамичной остросюжетной ленты. А особую, «несоветскую» атмосферу задавала именно «галерея образов»: советский матрос, для маскировки вынужденный часами прогуливаться по палубе в дамском платье и парике, два американских офицера, спокойно обсуждающие перспективы собственной гибели, и прежде всего пленные капитаны, которые, изнывая от скуки, при виде каждого нового судна держат пари, носом или кормой оно отправится ко дну.

И тут уже становилось очевидным, что жизнь приблудной собаки важнее устава.

Картина «Голубые дороги» (1947) и вовсе была поставлена по мотивам нескольких американских повестей, — разумеется, об этом не говорилось вслух. В фильме особенно сильны чисто «хичкоковские» детали, не несущие смысловой нагрузки и служащие лишь для нагнетания атмосферы. Так, легендарный изобретатель страшной ультрасовременной мины, немецкий инженер с характерным перекрестным шрамом на щеке, появляется в кадре лишь однажды в проходном эпизоде в самый неожиданный момент и так же неожиданно исчезает, не замеченный никем (кроме, разумеется, зрителя).

«Голубые дороги». Реж. Владимир Браун. 1947. Фото: Госфильмофонд

Особняком стоят в творчестве Брауна экранизации морских рассказов К. Станюковича, составляющие своего рода трилогию. Наибольший интерес из них представляет «В дальнем плавании» (1945). Картина свободна от условностей — как жанровых, так и идеологических. Жизнь корвета, отправившегося в трехлетнее кругосветное плавание и, таким образом, на годы изолированного от окружающего мира, протекала по законам общечеловеческим, а не классово-социальным. Это прямо артикулировалось одним из героев: «Корабль — это не берег. Там поссорились и разошлись в разные стороны. А в море куда уйдете друг от друга?» Оказалось, что в фильмах Брауна возможны полноценные, противоречивые характеры (Борис Дмоховский, Михаил Романов и даже великий украинский актер Амвросий Бучма сыграли в картине едва ли не лучшие свои роли в кино, популярный комик украинского театра Михаил Высоцкий впервые исполнил роль драматическую). И тут уже становилось очевидным, что жизнь приблудной собаки важнее устава и что вовсе не дисциплина, а прежде всего нормальные человеческие отношения позволяют выжить в условиях чрезвычайных. В картине из жизни XIX в. сказывался психологический опыт военных лет.

Абсолютно новый женский тип с его стихийным, бунтарским эротизмом — принципиальный вклад Брауна в кинематограф «оттепели».

Созданного семь лет спустя «Максимку» (1952) можно считать адаптацией «В дальнем плавании» для детей. Многие сюжетные положения прямо перекочевали из первой картины во вторую (с той только разницей, что теперь причиной конфликта между матросами и командованием была не собака, а подобранный на тонущем корабле мальчик-негритенок). Фильм был рассчитан на взрослую аудиторию, но требования новой эстетики привели к значительному упрощению характеров и общей проблематики фильма. И все равно в 1953 г. картина, построенная на качественной литературной основе, лишенная дидактики и пафоса, безусловно выигрывала на фоне не только «производственно-педагогических» драм Н. Лебедева, но и вполне взрослых и «проблемных» картин вроде «Серебристой пыли» или «Любови Яровой».

«Максимка». Реж. Владимир Браун. 1952. Фото: Госфильмофонд

Третья экранизация Станюковича, «Матрос Чижик» (1955), была откровенно мелодраматичной — что абсолютно соответствовало общему направлению советского кино начала «оттепели». На этот раз «морской рассказ» Станюковича трактовался как история о «чужих детях». Здесь особенно пригодилось присущее Брауну чувство жанра: исключительно просто выстроенный сюжет, намеренно, до условности упрощенные характеры (Браун был одновременно и автором сценария картины) — все это делало фильм максимально внятным и доходчивым. Своим успехом картина во многом обязана Михаилу Кузнецову, исполнившему главную роль.

Нежданный триумф «режиссера-мариниста» произвел на родине сенсацию, но сам режиссер этого не увидел: он скоропостижно умер за четыре дня до начала фестиваля.

В отличие от многих мастеров «зрительского» кино, Браун не впал в растерянность с приходом «оттепели». Еще более показателен его следующий фильм — «Море зовет» (1956). Картина прошла незамеченной, но особенности нового киноязыка режиссер уловил очень точно: черно-белый фильм (все предыдущие его работы начиная с 1951 г. снимались в цвете), лишенный четкой фабулы и рассказывающий о повседневной жизни обыкновенных людей, — все это было типично для работ молодых кинематографистов середины 50-х гг.

«Мальва». Реж. Владимир Браун. 1956. Фото: Госфильмофонд

В конце того же 1956 г. Браун экранизировал рассказ М. Горького «Мальва», о чем мечтал уже много лет. Кто-то из критиков упрекал режиссера в том, что социальный протест Мальвы заменен протестом чисто женским. Упрек справедлив — в этом главное достоинство картины. Свободная от социальных и даже нравственных рамок героиня сама выбирала свою судьбу, причиняя страдания себе самой и тем, кого любила. Абсолютно новый женский тип с его стихийным, бунтарским эротизмом — принципиальный вклад Брауна в кинематограф «оттепели». Роль Мальвы принесла латышской актрисе Дзидре Ритенбергс кубок Вольпи (1956) за лучшую женскую роль на Венецианском фестивале (из советских актрис 50-х только Ритенбергс и Татьяна Самойлова «прозвучали» на Западе). А сама картина, попавшая в конкурсную программу наряду с фильмами Куросавы, Висконти, Циннемана, Кайята и Рея, была реальным кандидатом на «Золотого льва». Нежданный триумф «режиссера-мариниста» произвел на родине сенсацию, но сам режиссер этого не увидел: он скоропостижно умер за четыре дня до начала фестиваля. Задуманная им постановка остросюжетной картины «Чрезвычайное происшествие» была осуществлена Виктором Ивченко и стала в 1959 г. абсолютным лидером проката.

---

(01.01.1896, Елисаветград, ныне Кировоград [c 2016 — Кропивницкий — прим. ред.] — 21.08.1957, Киев), режиссер, сценарист. Заслуженный деятель искусств УССР (1954).

Другие фильмы:

«Инженер Елагин» (1928, асс. реж., авт. сцен. совм. с. А. Морозовым), «Синие скалы» (1942, новелла в БКС № 9, фильм начинал Н. Экк), «Сто второй километр» (1942, новелла в БКС № 11), «Пропавший без вести» (1943, новелла в к/а «Родные берега»), «Волшебная ночь» (1958, худ. рук.).

Краткая библиография:

Коварский Н. Владимир Браун // 20 режиссерских биографий. М., 1978;
Чухрай Г. Мое кино. М., 2002.

Читайте также

Школа № 43 Нижнего Новгорода

Предыдущая Следующая

Этьен Морис Фальконе, Мари Анн Колло.

Памятник Петру I («Медный всадник»).

1766—1782 гг.

Санкт-Петербург.

сходство. В духе классицизма он создал обобщённый, идеальный об­раз, в котором соединяются сила и изящество.

Феодосий Фёдорович Щедрин (1751 — 1825) являлся представите­лем династии художников: его стар­ший брат Семён и сын Сильвестр были пейзажистами.

Щедрин — один из немногих рус­ских скульпторов того времени, умевших изображать обнажённое те­ло в мраморе. Статуи «Венера» (1792 г.), «Диана» (не позднее 1798 г.), а также исполненные для петергоф­ских фонтанов «Нева» (1804 г.) и «Си­рены» (1805 г.) воплощают античный идеал женской красоты.

Мастер прославился благодаря скульптурным украшениям на зда­нии Адмиралтейства в Петербурге, перестроенном по проекту А. Д. За­харова. Но этот ансамбль относит­ся уже к XIX в. — не только по вре­мени создания, но и по стилю.

ЖИВОПИСЬ

ЖИВОПИСЬ ПЕРВОЙ ПОЛОВИНЫ XVIII ВЕКА

До начала XVIII столетия в русской живописи развивались преимуще­ственно иконописные традиции,

184

 

 

 

 

По воспоминаниям современников, в России в то время любые изобра­жения принимали за иконы: неред­ко, приходя в дом чужеземца, рус­ские по обычаю кланялись первой попавшейся им на глаза картине. Однако в XVIII в. живопись посте­пенно стала приобретать европей­ские черты: художники осваивали линейную перспективу, позволяю­щую передать глубину пространст­ва, стремились правильно изобра­жать объём предметов с помощью светотени, изучали анатомию, что­бы точно воспроизводить человече­ское тело. Распространялась техни­ка живописи маслом, возникали новые жанры.

Особое место в русской живопи­си XVIII в. занял портрет. Наиболее ранние произведения этого жанра близки к парсуне XVII в. Персонажи торжественны и статичны.

Иван Никитич Никитин (1680 — около 1742) был одним из первых русских портретистов. Уже в его ранних портретах — старшей сест­ры Петра I Натальи Алексеевны (1715—1716 гг.) и его дочери Анны Петровны (до 1716 г.) — с редким для того времени мастерством пере­даны объём и естественная поза модели. Однако в этих работах оче­видна некоторая упрощённость: фи­гуры выхвачены из темноты не­определённого пространства лучом яркого света и существуют вне свя­зи со средой; художник ещё неуме­ло изображает строение фигуры и фактуру материалов — бархата, меха, драгоценностей.

Вернувшись в Петербург после четырёхлетней поездки по Италии, Никитин создал лучшие свои произ­ведения, в которых проявилось воз­росшее мастерство художника. Это портрет канцлера Г. И. Головкина и портрет, известный под названием «Напольный гетман» (оба — 20-е гг.).

В Петровскую эпоху в России обосновалось немало иностранных мастеров, работавших в разных стилях и жанрах. Иоганн Готфрид Таннауэр (1680—1737), приехав­ший из Германии, писал портреты членов императорской семьи и

приближённых Петра I, а также ба­тальные полотна. Его знаменитая картина «Пётр I в Полтавской бит­ве» (10-е гг.) представляет собой распространённый в Европе тип портрета полководца на фоне сра­жения.

Предыдущая Следующая

Красивая свадебная история Никитина Деера и актрисы телевидения Кратика Сенгар

Он высокий, красивый и лихой. Она поистине элегантная и шикарная индийская красавица. И когда они сошлись вместе, фраза «идеальная пара» никогда не звучала лучше! Хотите знать, о ком мы говорим? Итак, чтобы перейти к делу, определение большой толстой индийской свадьбы было оправдано, когда 3 сентября Никитин Дхир, сын опытного актера Панкаджа Дира, связал себя узами брака со своей возлюбленной, которая также является актрисой телевидения Кратика Сенгар. 2014 г.

Хотя «свет, камера и действие» — это три слова, которые эти двое чаще всего слышат, это была та же самая установка, где они встречаются. Как спросите вы? Что ж, вот все, что вам нужно знать о прекрасном свадебном путешествии этой потрясающе горячей пары.

Рекомендуем прочитать: 11 самых горячих индийских телевизионных пар, которые полюбили друг друга, работая вместе

Когда Тангабали влюбилась в Джханси Ки Рани

Все началось, когда Кратика Сенгар, широко известная своим знаменитым ежедневным мылом Джханси Ки Рани и Punar Vivah , снимался для фильма My Father GodFather .Фильм — режиссерский дебют отца Никитина Панкаджа Дира. Она была постоянным гостем в доме Панкадж Дхира, и именно там она познакомилась с Никитиным. Именно тогда они впервые встретились. Все началось с очень случайного «Привет, как дела», поначалу своего рода встречи.

Изображение предоставлено: TVGupShup

Изображение предоставлено: Никитин Дхир (Instagram)

Сияющий Кратика делится: «Это брак по договоренности и любви. Отец Крестный .Тогда отец Никитина решил подойти к моим родителям, и так мы с Никитиным познакомились. Я очень хорошо познакомился с дядей Панкаджа и Никитиным, и в конце концов мы начали любить друг друга ».

Не пропустите: сказочное свадебное видео знаменитого модельера Нишки Луллы и Дхрува Мехры

Расцветает любовь

Кратика и У Никитина был очень короткий период ухаживания. Но, несмотря на плотный рабочий график, они старались проводить как можно больше времени вместе, чтобы лучше узнать друг друга.Кратика также был замечен сопровождающим ее кавалера на съемках его телешоу Khatron Ke Khiladi . Их любовь расцвела по мере их сближения и, в конце концов, вступила в узы священного супружества.

История продолжается

Обязательно к прочтению: 6 удивительных способов, которыми период ухаживания может сделать ваш брак вечным

Предсвадебные торжества

И Никитин, и Кратика хотели откровенно фотографировать для всех трех функций, поэтому решили присоединиться. Свадебный салат.Некоторые из их изображений заставят вас прийти в упадок!

Также читайте: 7 шагов, чтобы получить максимум удовольствия от вашего свадебного фотографа

Церемония мехенди

Пара провела отдельные церемонии мехенди, в своих местах. Кратика сиял в короткой розовой курте для спагетти и оранжевой пижаме. А Никитин был одет в повседневную светло-серую пижаму курта. Но приятным шоком стал неожиданный визит Никитина на церемонию мехенди своей невесты Кратика.Эти двое выглядели очень счастливыми и с нетерпением ждали наступления дня «Д».

Коктейль и сангит

За мехенди последовала церемония коктейля и сангит , которая проводилась в отеле Hyatt Regency, Мумбаи. Пара, которая вскоре должна была пожениться, выглядела элегантно и сногсшибательно в нарядах пастельных тонов.

Отъезд: 10 самых ярких цветов для помолвки и коктейльных платьев в этом свадебном сезоне

В то время как Кратика надел красивую одежду lehenga , Никитин выбрал одежду в индо-западном стиле.Влюбленная пара исполнила мелодичные и романтические танцевальные номера со своими друзьями и членами семьи.

Среди выступавших были друзья Никитина из телешоу Хатрон Ке Хилади — Каранвир Бора и его жена Тиджай Синдху, Гауахар Хан, Кушал Тандон, Гурмит Чоудхари и его жена Дебина Боннерджи. Никитин поблагодарил всех своих гостей, друзей и семью этим твитом:

«Особое спасибо моим друзьям и семье, особенно актерскому сообществу, которые нашли время для танцев и репетиций.Они действительно сделали этот день незабываемым для нас обоих! »

Рекомендуем прочитать: самые стильные свадебные образы красивых женихов Болливуда в 2014 году

Грандиозная свадьба

Свадебная церемония прошла в ITC Maratha, Мумбаи.

Невеста Кратика выглядела не иначе как королевская особа в ярко расшитом красно-розово-оранжевом цвете lehenga . И Никитин выбрал стильную и шикарную мерцающую не совсем белую одежду sherwani поверх красно-белой пижамы курта.

Их свадьба была семейным мероприятием с участием нескольких близких друзей, родственников и членов семьи. Атмосфера была совершенно величественной с цветочным декором. Мандап был установлен с огромной Ганпати мурти (статуя) на заднем плане.

Взгляните: 12 супер-крутых индийских теледив в реальных свадебных аватарах

Послесвадебная вечеринка

Вскоре после частной свадебной церемонии пара устроила грандиозную вечеринку для своих друзей из шоу-бизнеса.По этому случаю Кратика сняла с себя свадебную фату и предпочла остаться на ее свадьбе lehenga , в то время как Никитин переоделся в черную формальную бандхгалу бандхгала .

Свадебные и послесвадебные наряды пары были выполнены дизайнером Кунал Анил Танна. На свадьбе присутствовали знаменитости Болливуда, в том числе Хема Малини, Конкана Сен Шарма и Ранвир Шори.

Среди знаменитостей телевидения были Гаухар Хан и Кушал Тандон, Гурмит Чоудхари и Дебина Боннерджи, Пунит Иссар и его жена, актер Шахбааз Хан со своей семьей, Ронит Рой и жена Манаси Джоши.Свадьба Кратики и Никитина была событием «большим, чем жизнь». Обе семьи очень обрадовались этому союзу, и мероприятие имело огромный успех.

Обязательно к прочтению: 8 лучших дизайнеров свадебных украшений в Индии, за которыми стоит проследить свадьбу

Блаженный медовый месяц

Вскоре после свадьбы пара отправилась в медовый месяц в захватывающее дух место, в Швейцарию. И хотя их очень загруженный график делает их очень занятыми, они никогда не упускают возможности провести время друг с другом.

Что супруги говорят друг о друге

Kratika На Никитине:

Никитин чистая душа. В нем очень видна прозрачность. Я всегда хотел такую ​​семью, как семья Никитина, и мне повезло, что он присутствует в моей жизни. Я слишком взволнован. Punar Vivah ke baad ab sach mein mera pehla vivah hoga …

Никитин был довольно активен в социальных сетях во время своей свадьбы и держал своих поклонников и друзей в курсе свадебных событий.Он также опубликовал такие комментарии, как: «Ночь, которую сделали особенной для друзей и семьи — почувствуйте себя счастливыми и благословенными — завтра новая глава — новое путешествие начинается с огня в качестве свидетеля — чистого и сильного». Другой был: «Спасибо всем за любовь и благословения. Наш особенный день запомнился нашими друзьями, семьей и всеми вами, которые были частью путешествия .. :)»

И молодожены Никитин, и Кратика были в восторге от этого. как их свадебные моменты были запечатлены в «Свадебном салате», и мы тоже.На этих эксклюзивных изображениях, которые мы получили от них, были некоторые удивительные снимки жениха и невесты, их свадебных приготовлений, церемоний и моментов, от которых мы просто не можем насытиться, и мы были рады поделиться ими со всеми нашими читателями.

Рекомендуем прочитать: 10 самых романтичных круизных направлений для молодоженов

BollywoodShaadis желает этой сладкой паре жизни, полной счастья и процветания. Пусть их любовь и связь крепнут с каждым годом. Ваше здоровье!

Кредит изображения: Свадебный салат

5 простых советов по упрощению фотографии

В фотографии, как и в жизни, часто лучше всего простое.Итак, позвольте мне помочь вам упростить фотографию с помощью этих пяти простых советов. Я обещаю, что после того, как вы включите их в свою фотографию, ваши изображения значительно улучшатся.

Когда я только начинал фотографировать, я помню, как думал о том, как трудно запомнить всю информацию о том, как создавать великолепные изображения, которые я слышал. Установите здесь свою камеру, используйте этот объектив, никогда не делайте этого, всегда делайте это; бла, бла, бла…

Да, я полностью понимаю, что для создания отличных снимков требуются знания и навыки, но как фотографы мы склонны слишком усложнять вещи.В этой статье я помогу вам сосредоточиться на самом важном в фотографии. Держите в голове весь беспорядок, который может заставить вас переосмыслить отличные изображения и испортить потрясающие изображения!

Следуйте этим пяти простым советам, и ваши изображения станут лучше. Обещаю.

Приступим:

1) Упростите фотографию, упростив свое устройство

Если вы когда-либо пытались учиться у некоторых из прошлых мастеров фотографии, вы начнете замечать простоту их фотографии.Не только простота изображений, но и простота их подхода. Например, Анри Картье-Брессон в основном использовал небольшую камеру Leica и объектив 50 мм.

Упростив свое оборудование, он меньше сосредоточился на своем снаряжении и был менее заметен для тех, кого фотографировал. Затем он смог сосредоточить свое внимание на поиске и захвате красивых изображений, а не возиться с оборудованием.

© Анри Картье-Брессон

Ансель Адамс сказал: «… любой достойный фотограф может сделать красивые вещи с помощью камер-обскур.”

Изображение ниже, «Восход луны над Эрнандесом», было сделано очень быстро после того, как Ансель Адамс остановил машину на обочине дороги. Он знал свое оборудование и интуитивно знал настройки, необходимые для этого изображения. Вот в чем суть упрощения. Вы готовы к съемке в любой момент.

© Ансель Адамс

Понимая, что снаряжение — это еще не все, фотография в целом поможет вам упростить и упростить то, о чем вам нужно подумать, прежде чем вы даже сделаете снимок.

Я использую объектив 85 мм 1,8 90% времени. Почему? Потому что я знаю, что увижу с объективом, еще до того, как надену его на камеру. Я настроен на объектив и знаю, как использовать его для создания красивых портретов каждый раз.

Я знаю многих фотографов, которые любят 50 мм 1.8 и используют его исключительно.

Мой вам совет: перестаньте так сильно беспокоиться об оборудовании и найдите объектив, который позволит вам видеть через камеру то, что вы видите мысленным взором. Я бы порекомендовал объектив с малым значением диафрагмы, обеспечивающим малую глубину резкости, 2.8 или ниже. Это даст вам больше возможностей для творчества в ваших изображениях.

2) Упростите фотографию, упростив настройки камеры

Это большой. Многие современные фотографы считают, что если они не снимают в ручном режиме, они на самом деле не фотографы. Ерунда. Опять же, доказательство заключается в изображениях, а не в выбранном режиме камеры.

Если вы будете меньше думать о настройках камеры, а больше о композиции или освещении, не думаете ли вы, что ваши изображения улучшатся? Я знаю, что они будут!

Чтобы упростить настройку камеры, я бы предложил использовать режим приоритета диафрагмы для портретных фотографов и режим приоритета выдержки для спортивных или активных фотографов.Снимая в этих режимах, вы позволяете камере выбирать некоторые настройки, в то время как вы выбираете наиболее важные настройки. Чтобы узнать об этих режимах камеры, ознакомьтесь с этой статьей о них.

Когда я снимаю помолвку, моя цель — создать кадры, на которых пара выглядит и чувствует себя влюбленной.

Понимая это, я понимаю, что фон менее важен, и поэтому я хочу снимать с малой глубиной резкости для большинства моих изображений.

Вы управляете глубиной резкости с помощью диафрагмы, поэтому съемка в режиме приоритета диафрагмы — хороший способ упростить ваши настройки.

Опять же, некоторые люди считают съемку в ручном режиме святым Граалем фотографии, но меня это не интересует. Я заинтересован только в том, чтобы мои клиенты получали отличные изображения.

Снимая в режиме приоритета диафрагмы, я упрощаю, избавляя от необходимости думать о выдержке и ISO. Я могу сосредоточиться исключительно на диафрагме, которую планирую использовать для каждого снимка.Это упрощение позволяет мне сосредоточиться на самом важном, а именно: на свете, предмете и композиции.

На этом изображении из сеанса взаимодействия я был в режиме приоритета диафрагмы с установкой диафрагмы f2.0. Как только я выберу и настрою диафрагму, мне больше не нужно беспокоиться о настройках камеры. Теперь я могу сосредоточиться на самом важном.

Если положить их спиной к солнцу, они всегда будут получать мягкий свет за счет подсветки их лиц сзади. Аааа, мягкий свет.

Затем мне просто нужно подождать, пока эмоции уловят, и рассмотреть композицию при ее захвате.Это так просто.

Если вы включите это в свою рутину подготовки, думая о своих целях изображения перед тем, как отправиться на съемку, это значительно упростит то, о чем вы беспокоитесь при съемке.

При съемке велогонки у вас может быть две цели изображения. Один, чтобы заморозить движение, и два, чтобы показать размытие движения, чтобы создать ощущение движения. Достигайте обеих целей, регулируя выдержку, поэтому съемка в режиме приоритета выдержки значительно упростит настройки, о которых вам нужно беспокоиться в этом сеансе.

Во время гонки учитывайте только выдержку при съемке и вместо этого сосредоточьтесь на свете и композиции.

По мере того, как вы упрощаете настройки камеры, вы начинаете упрощать фотосъемку. Уменьшение отвлекающих факторов из-за слишком большого количества настроек камеры, действительно позволяет вам сосредоточиться на получении отличных фотографий.

3) Упростите фотографию, убрав отвлекающие факторы на изображениях

Удаление отвлекающих элементов с изображений — простой способ упростить их.На изображении ниже чистая минималистичная сцена помогает сосредоточить внимание зрителя именно там, где я хочу. На изображении суккулентов ниже чистый белый фон и мягкий направленный свет создают визуально приятное изображение и фокусируют внимание зрителя на объекте.

Сама суть этого типа фотографии — удалить из изображения все, что отвлекает. Как фотограф-портретист, я часто делаю это, чтобы привлечь внимание к объекту.

Возможно, вы думаете, что у вас нет студии, и вы не можете добиться такого эффекта.

Ну, первое изображение было сделано в доме клиентов. Я часто нахожу небольшой уголок с однотонной стеной и использую его для съемки. Не позволяйте фальшивым ограничениям стоять у вас на пути!

Вы можете создавать изображения такого типа как дома, так и в студии. На изображении ниже я снизился, чтобы изолировать пару с облаками и цветками сакуры.

Взгляните на эту миску черники. На этом изображении ничто не отвлекает от черники. Стол и миска белые, а свет мягкий и направленный. Этот мягкий направленный свет служит и другой цели. Он создает свет в воде на самих ягодах, помогая выделить эту деталь и придать образу ощущение свежести.

Помните, для такой съемки не обязательно, чтобы все было белым.У вас может быть контраст, но он должен быть тонким и ровным. При съемке в этом стиле фон не обязательно должен быть белым, чтобы передать то же ощущение. Изоляция, мягкий направленный свет и нейтральный оттенок — вот что приносит это ощущение дома.

Этот минималистичный стиль в настоящее время является модным стилем фотографии и может помочь вам создавать красивые изображения, не беспокоясь о фоне.

4) Упростите вашу фотографию, снимая с малой глубиной резкости

Использование малой глубины резкости — отличный способ убрать отвлекающие факторы с изображения, размывая их и привлекая внимание зрителя к вашему объекту.Использование небольшой глубины резкости также придает вашим изображениям более современный и профессиональный вид.

Обратите внимание на следующие два изображения цветов, как использование глубины резкости фокусирует ваше внимание на объекте. На первом изображении вы можете подумать, что это просто изображение цветов, но на втором изображении вы знаете, какой тюльпан был в центре моего изображения.

Первое изображение не является неправильным, но второе изображение устраняет беспорядок и отвлекает внимание зрителя.

Малая глубина резкости — мощный способ упростить задачу.Часто, особенно при съемке детей, у вас нет времени выбрать идеальный фон. На обоих этих изображениях фон не улучшал изображение, его легко удалить, используя небольшую глубину резкости.

С обоими этими изображениями представьте, что фон такой же резкий, как и объект. Насколько это отвлекает?

Он превратит эти изображения в моментальные снимки, создав гораздо менее привлекательные изображения, на которых зрителя легко отвлечет то, что происходит на заднем плане.

Для достижения такого типа глубины резкости вам понадобится очень светосильный объектив, который может достигать значения диафрагмы ниже f2.0. Я рекомендую каждому фотографу начать с объектива 50 мм f1,8 или объектива 85 мм 1,8. Оба недорогие и дадут отличные результаты.

На этой фотографии фон становится просто цветным пятном, помогая моему сыну, который случайно заболел, выскочить из изображения. Нет никаких сомнений в том, что мой объект на этой фотографии.

Если у вас нет объектива с диафрагмой менее 2.0, затем используйте объектив с большим фокусным расстоянием для создания глубины резкости. Используя объектив 200-300 мм, вы также сможете создать глубину резкости.

5) Упростите фотографию, приблизившись к предмету

Подойдите ближе и заполните кадр объектом — отличный способ избавиться от отвлекающих факторов.

Роберт Капа, известный фотограф сказал: «Если ваши снимки недостаточно хороши, значит, вы недостаточно близки».

Эта цитата относится к совету по устранению отвлекающих факторов приближением.Поэтому, когда вы приближаетесь, вы намеренно обрезаете большую часть фона и привлекаете внимание зрителя непосредственно к вашему объекту. Это не сработает во всех ситуациях, но при правильном использовании может помочь вашим изображениям выделиться.

На этом снимке городского пожилого человека груды мусора не могут быть настолько размыты, чтобы создать красивую картинку. Это оставило мне возможность подойти поближе, чтобы удалить мусор с изображения. Текстура кирпичей осталась, но мусора нет.

Подходя ближе, позволяет убрать отвлекающие факторы и удерживать взгляд зрителя именно там, где вы хотите. На семейных сессиях люди, наклоняющиеся и выглядящие уютно, — отличный способ сделать снимки, передающие любовь.

В результате при такой съемке не только удаляется отвлекающий фон, но и возникает чувство любви между членами семьи.

Заключение

Фотография может быть трудной в освоении, но по мере того, как вы научитесь упрощать, ее станет легче понимать, и вы сможете больше сосредоточиться на простой съемке отличных изображений.Начните использовать эти пять простых советов в своей фотографии, и вы увидите значительное улучшение своих изображений.

Супер-классный бесплатный курс по освещению.

Готовы узнать об освещении?

Независимо от того, снимаете ли вы в помещении, мой бесплатный онлайн-курс по освещению для вас. Просто нажмите «Зарегистрируйтесь» ниже и введите свое имя и адрес электронной почты.

Поднимите свои навыки освещения на новый уровень!

Успех !! Я так рада, что ты здесь! Вы найдете ссылку на курс в своем электронном письме.

5 способов упростить и улучшить пейзажную фотографию | автор: Адам Карнач

Возьмите изображение выше, которое выходит с материковой части Шотландии на остров Скай. Есть несколько элементов, которые заставляют изображение работать. Во-первых, ведущие линии пристани направляют зрителя от нижней части изображения к озеру к далекой горе. Заснеженная гора также обрамлена двумя сторонами, на которых больше камней, чем снега.

Затем я использовал длинную выдержку, чтобы удалить детали с воды и облаков; это буквально упрощает изображение. В гладкой воде больше отражений, больше внимания уделяется пристани и горам, а небо не отвлекает.

Причал находится в небольшой деревне под названием Гленелг в отдаленном районе западного побережья Шотландии. Люди, живущие там, должны быть находчивыми и делать что-то самостоятельно, чтобы выжить. Это создает функциональную индустриальную атмосферу в деревне.Причал, явно старый и не предназначенный для отдыха, намекает на это наследие. Причал также находится в поистине красивом месте, и это сопоставление проявляется в озере и далеких горах.

Дальнейшее упрощение может произойти при постобработке. На втором изображении показана тестовая экспозиция, которая является неотредактированной стандартной экспозицией.

Преобразование в черно-белое было запланировано в то время, потому что цвет отвлекает и не особенно привлекателен. Однако мягкий утренний свет был прекрасен и там, где он ударяется о металл причала, создает действительно интересные тона.Наконец, был добавлен синий тонер, чтобы усилить металлический индустриальный вид фотографии.

Негативное пространство

Другой способ упростить изображение — привлечь внимание к объекту с помощью негативного пространства. Изображение выше показывает, где это может работать в пейзажном изображении и дает ощущение, которое часто называют изящным искусством. Белые участки неба и яркая морская гладь привлекают все внимание к старинным пахам. Снимок был сделан на унылом пляже в отдаленном и заброшенном месте Спёрн-Пойнт в Восточной Англии.На самом деле это цветное изображение, но естественное отсутствие цвета и акцент на паху поддерживают мрачность и одиночество истории.

Изолировать объект

Выделение объекта на фотографии — очень распространенный способ упростить изображение и улучшить рассказ. Это основа большинства портретных фотографий, когда все фокусируются на модели, либо размывая фон с помощью больших диафрагм, либо используя простой фон в студийной обстановке.

То же самое относится к пейзажной фотографии, где изображение часто можно охарактеризовать как интимное или «портрет пейзажа». Есть бесчисленное множество способов добиться этого, включая использование более длинного объектива, съемку дерева в туманном лесу или использование сверхширокоугольного объектива очень близко к объекту.

Байройтский певец Никитин: Я никогда не носил свастику | Музыка | DW

Бас-баритон Евгений Никитин разорвал контракт и покинул Байройтский фестиваль за четыре дня до запланированной премьеры в заглавной партии оперы Рихарда Вагнера «Летучий голландец».«Российский певец говорит, что в основе разногласий лежит недоразумение.

DW: Ваша татуировка вызвала большой скандал, потому что она связывает вас с правоэкстремистской идеологией. Были ли у вас или были такие контакты?

Евгений Никитин: Никогда в жизни я не был членом какой-либо политической партии или группы, ни правой, ни левой. Я нахожу национал-социализм в любой форме глубоко отвратительным. В конце концов, оба моих деда погибли на фронте в Мировой войне. II.

Какое значение имеет татуировка?

Это никогда не имело ничего общего со свастикой. Предполагалось, что это будет звезда с восемью точками и гербом посередине. Мотив придумал сам. Тату мы делали в несколько этапов: сначала накидка, потом звезда, которая его окружала. Звезда состоит из двух перекрывающихся квадратов. Они занимают столько места на коже, что делать все за один сеанс слишком больно. Таким образом, мотив татуировался в течение более длительного периода времени, полоса за полосой.И в какой-то момент, проявив большую фантазию, вы могли бы интерпретировать незавершенные лучи звезды как части свастики. Но, как я уже сказал, это было только на определенном этапе. Это никогда не было свастикой. Это станет ясно, если взглянуть на более свежие фотографии.

Вы никогда не наносили свастику на кожу?

Абсолютно нет. Я никогда этого не хотела, а уж тем более никогда бы не позировала на камеру со свастикой. Я также ненавижу более поздний русский фашизм.Я артист, оперный певец, а не неонацист.

Здесь изображен Никитин в постановке 2008 года «Летучий голландец»

В своем последнем опубликованном заявлении вы упоминаете «юношеские проступки» и «глупые ошибки». Какие ошибки вы имеете в виду, если не в отношении татуировки?

Под «юношескими проступками» я имел в виду, прежде всего, когда-либо делали татуировки. Это было совершенно глупо, и сегодня я сожалею об этом. Я хотел бы удалить их все.

Но если вы не сделали ничего плохого, зачем извинения? Почему вы расторгли контракт и уехали из Байройта?

Все произошло так быстро. Одно быстро привело к другому. Я думаю, что решение, которое мы приняли в тот момент, было правильным на тот момент. Я написал свое заявление по согласованию с офисом фестиваля.

Кто был заинтересован в этом деле?

Люди, которые хотят навредить Байройтскому фестивалю и его дирекции. Может быть, еще кто-нибудь, я не знаю.

Были ли проблемы художественного характера на репетиционном этапе — разногласия с режиссером и его командой?

Никаких проблем. Я думаю, что с режиссером Яном Филиппом Глогером мы все разработали прекрасную сценическую постановку, и я желаю всем коллегам, в том числе Катарине и Еве Вагнер, а также дирижеру Кристиану Тилеманну больших успехов!

Режиссеры фестиваля заранее видели фотографии ваших татуировок? Вы обсуждали с ними этот вопрос?

По просьбе фестиваля у меня был весь «живописный материал» на моем теле — а их довольно много — сфотографировал и отправил им.Они хотели учесть это при создании костюма и макияжа. Конечно, ничего криминального в этом не обнаружили.

После всего, что случилось, вы бы хотели снова работать в Байройте?

Даст Бог — да.

Интервью: Анастасия Баутско / RF
Редактор: Грег Уайзер

Обнаружены подробные сведения о роли стволовых клеток в смертельном раке желудка

Корнельское исследование дает новые важные сведения о распространенном и смертельном типе рака желудка.

Заболеваемость этим раком, называемым раком плоскоклеточного столбчатого соединения желудка (SCJ), также известным как гастроэзофагеальный рак, выросла в 2,5 раза в Соединенных Штатах между 1970-ми и 2000-ми годами, в то время как случаи всех видов рака желудка снизились более чем на 80% с тех пор. 1950-е годы. Тем не менее, рак желудка в целом занимает пятое место среди самых распространенных опухолей и третье место среди причин смерти от рака во всем мире.

На изображении показаны органоиды (миниатюрные, упрощенные версии органа), используемые для изучения рака ПКС желудка.Мутантный органоид с неактивными генами-супрессорами опухолей, верно, растет быстрее, чем нормальный органоид.

Исследование, опубликованное 3 января в журнале Nature Communications, определяет ключевой путь развития рака SCJ желудка, который представляет собой многообещающую цель для будущих исследований и лечения.

Исследователи обнаружили, что потомство одного типа стволовых клеток (Lgr5 +) накапливается в больших количествах и способствует развитию рака в областях, где встречаются два типа тканей желудка.

«На глобальном уровне рак желудка, особенно рак плоскоклеточного столбчатого перехода желудка, является очень частым заболеванием и очень неблагоприятным с точки зрения прогноза, поэтому любые новые изменения в том, как формируется рак и как мы можем его лечить, очень захватывающе », — сказал Александр Никитин, профессор патологии и руководитель Корнельской программы стволовых клеток.Дах-Цзюн Фу, докторант лаборатории Никитина, является первым автором статьи.

Для исследования Никитин и его коллеги разработали экспериментальную модель мыши с двумя генами-супрессорами опухоли, которые при определенных условиях инактивируются. Модель соответствует нескольким параметрам, которые необходимы для точного исследования этого рака. Предыдущие модели мышей, используемые другими исследовательскими группами, имели ограничения, когда у мышей развивались только определенные типы опухолей или они умирали преждевременно, что мешало исследованию.Но у всех мышей Cornell развились соответствующие формы метастатического рака желудочно-кишечного тракта.

Предыдущие исследования лаборатории Никитина и других университетов показали, что стволовые клетки Lgr5 + могут быть причиной ряда видов рака.

«Наши исследования показывают, что это не обязательно верно для всех типов рака», — сказал Никитин. Его группа не нашла доказательств того, что стволовые клетки Lgr5 + сами способствуют развитию рака SCJ желудка.

В данной статье использовалась модель мыши и органоиды (миниатюрные, упрощенные версии органа), чтобы показать, что вместо стволовых клеток Lgr5 + в эти соединения заселяются большие пулы клеток-потомков, называемые клетками Lgr5-CD44 +.Стволовые клетки делятся, и когда они это делают, они дифференцируются в более специализированные клетки. Но на ранних этапах деления клетки незрелые и еще не дифференцировались, и это потомство было обнаружено в самых ранних различимых поражениях и в запущенных карциномах. Также было обнаружено, что они очень чувствительны к трансформации в тестах с использованием органоидов.

«Эти данные открывают захватывающую возможность того, что склонность к раку других переходных зон также может быть объяснена наличием большой доли незрелых клеток», — сказал Никитин.

Исследование также пролило свет на белок под названием остеопонтин, который связывается с рецептором CD44 +, вызывая ряд последующих эффектов. Комплекс остеопонтин-CD44 + контролирует баланс между стволовыми и дифференцированными клетками и инициирует создание большего количества стволовых клеток и клеток со свойствами стволовых клеток, таких как клетки Lgr5-CD44 +.

«В нашем случае это присутствие передачи сигналов остеопонтина удерживает [недавно дифференцированное потомство] клетки в незрелом состоянии», — сказал Никитин.«Вероятно, это один из механизмов того, что у вас есть довольно большие пулы незрелых [Lgr5-CD44 +] клеток».

Исследователи изучили две популяции пациентов-людей и показали, что, в соответствии с моделями на мышах, более низкие уровни остеопонтина и CD44 сильно коррелировали с лучшей выживаемостью пациентов, сказал Никитин, в то время как избыточная экспрессия коррелировала с худшим прогнозом рака SCJ человека.

В будущем исследовании будет изучаться тестирование ингибиторов остеопонтина и антител к CD44 + для возможного предотвращения накопления клеток Lgr5-CD44 + для лечения этих видов рака.

Исследование финансировалось Национальным институтом здоровья, Национальным институтом рака и наукой о стволовых клетках штата Нью-Йорк.

стратегий для визуализации эпителиального рака яичников с высоким разрешением с помощью лапароскопической нелинейной микроскопии

Abstract

Рак яичников остается наиболее часто смертельным из гинекологических видов рака из-за позднего выявления этого заболевания. Здесь, используя человеческие образцы и три мышиные модели рака яичников, мы проверили возможность применения нелинейных методов визуализации, многофотонной микроскопии (MPM) и генерации второй гармоники (SHG), которые служат дополнительными инструментами для диагностики рака яичников.Мы демонстрируем, что MPM / SHG собственных выбросов ткани позволяет визуализировать незафиксированные, несекционированные и неокрашенные ткани с разрешением, сопоставимым с разрешением обычно обрабатываемых гистологических срезов. Помимо возможности различать нормальные и опухолевые ткани в соответствии с патологическими критериями, этот метод облегчает морфометрическую оценку образцов и обнаружение очень ранних клеточных изменений в поверхностном эпителии яичников. Красный сдвиг в собственной флуоресценции клеток и структурные изменения коллагена были идентифицированы как дополнительные связанные с раком изменения, которые невозможно различить с помощью обычных патологических методов.Важно отметить, что возможность лапароскопического MPM / SHG in vivo продемонстрирована с помощью линзы объектива типа «палочка». Прижизненное обнаружение неопластических поражений было дополнительно облегчено идентификацией при малом увеличении индикатора активности катепсина с последующей лапароскопической визуализацией MPM. Взятые вместе, эти результаты демонстрируют, что MPM может применяться в клинических условиях как эндоскопический подход, подходящий для оптической биопсии с высоким разрешением, а также как инструмент патологии для быстрой первоначальной оценки образцов рака яичников.

Введение

Рак яичников — это самый смертоносный гинекологический рак и пятое место по смертности от рака у женщин в Соединенных Штатах. На него будет приходиться примерно 21 550 (3% от общего числа) новых случаев рака и 14 600 (5% от общего числа) смертей от рака в 2009 г. [1]. Когда болезнь диагностируется на ранних стадиях, выживаемость может быть выше 90%. Однако, поскольку ранние стадии относительно бессимптомны, большинство случаев карциномы яичников не выявляются до поздних, редко излечимых стадий, когда почти 70% опухолей уже распространились за пределы яичника [2].Циторедуктивная хирургия метастатического рака яичников может продлить выживаемость пациента, но ее успех во многом зависит от эффективного обнаружения и устранения основной части опухоли [3–5].

Ожидается, что разработка новых методов диагностики с помощью изображений значительно продвинет вперед обнаружение рака яичников. В нескольких недавних исследованиях сообщалось об улучшенном обнаружении метастатического рака яичников с помощью многоцелевого оптического изображения in vivo [6] и визуализации флуоресцентной протеазы у мышей с ослабленным иммунитетом [7].К сожалению, разрешение этих подходов не позволило оценить новообразования на клеточном уровне. Кроме того, не была продемонстрирована возможность прижизненного выявления более ранних стадий рака яичников.

Возможный подход к решению обеих проблем — получение нелинейных изображений с помощью многофотонной микроскопии (MPM) и генерации второй гармоники (SHG). MPM — это тип некогерентной нелинейной лазерной сканирующей микроскопии, в которой используется одновременное поглощение двух фотонов ближнего инфракрасного диапазона (NIR) для возбуждения электронного перехода, эквивалентного поглощению одного более высокого энергетического, «голубого» фотона [8,9].Использование (NIR) света вместо УФ или более высоких энергетических диапазонов, которые требуются для возбуждения большинства собственных излучателей в биологических тканях [10–12], снижает связанные с УФ-светом фотоповреждения, оптические аберрации и ослабление возбуждающего света. Эти преимущества, вместе с отсутствием возбуждения вне фокальной плоскости, позволяют MPM проникать примерно в два раза глубже в оптически рассеивающие ткани с гораздо более чистыми субклеточными изображениями по сравнению с конфокальной микроскопией (см. Обзоры Zipfel et al.[9] и Хельмхен и Денк [13]). MPM часто используется одновременно с SHG, стратегией визуализации, основанной на нелинейном когерентном рассеянии освещающего света асимметричными макромолекулярными компонентами ткани, такими как коллаген. ГВГ всегда излучает ровно половину длины волны освещения и легко отделяется от широкого спектра излучения синей флуоресценции, характерного для неокрашенной ткани, что позволяет одновременно визуализировать коллаген на уровне отдельных фибрилл [12].

Благодаря особенностям MPM, таким как глубина проникновения, сниженная фототоксичность и собственное оптическое сечение, а также оценка с высоким разрешением фибриллярной структуры коллагена, которую SHG не видела на стандартных срезах, окрашенных гематоксилином и эозином (H&E), эти нелинейные методы визуализации имеют признаны перспективными подходами к диагностике рака [12].Оптические биомаркеры рака яичников специально оценивали с помощью нелинейной микроскопии [14]. Однако остается неясным, в какой степени визуализация MPM / SHG позволит надежно идентифицировать стандартные диагностические патологические признаки. Более того, применимость MPM / SHG к характеристике различных стадий канцерогенеза яичников на моделях рака у мышей не проверялась. Что наиболее важно, неизвестно, имеется ли адекватная чувствительность для идентификации признаков in vivo , что делает сомнительной возможность практического применения эндоскопических MPM / SHG высокого разрешения.

В этой статье мы оцениваем применимость подхода MPM / SHG к патологической оценке эпителиальной карциномы яичников (EOC) в образцах человека и трех сингенных моделях мышей, созданных нами. Мы демонстрируем, что MPM собственной тканевой флуоресценции в тканях яичников позволяет воспроизводимо идентифицировать неопластические особенности, такие как клеточная атипия и архитектурные изменения на разных стадиях канцерогенеза. Эта информация дополнительно дополняется характеристиками MPM / SHG, такими как связанные с раком изменения во внутренней флуоресценции и структуре коллагена.Наконец, мы демонстрируем экспериментальным доказательством того, что оптическая биопсия MPM / SHG с высоким разрешением может быть выполнена с помощью лапароскопии in vivo с миниатюрной линзой объектива. Этот подход может быть дополнительно объединен с предварительным скринингом на опухолевые изменения с помощью активируемого катепсином флуоресцентного зонда NIR.

Материалы и методы

Мышиные модели рака яичников

Развитие EOC у мышей, экспрессирующих 40Т антиген обезьяньего вируса (SV) под контролем промотора рецептора 2 мюллерова ингибирующего вещества (Tg MISIIR-TAg ) было описано ранее [ 15].

Индукция EOC путем однократного трансинфундибулярного интрабурсального введения рекомбинантного аденовируса, экспрессирующего Cre (AdCre), мышам, несущим скопированные копии генов p53 и Rb , также описана в другом месте [16].

Для получения сингенной мышиной модели диссеминированного перитонеального EOC- a p53 — и Rb -дефицитного FVB / N клеточного эпителия яичника (OSE) клеточная линия OSN1 [17] была трансдуцирована ретровирусом LNCX2, содержащим мышиный c-Myc. (любезный подарок от доктора Эндрю Йена).Вкратце, ретровирус продуцировали с помощью EcoPack2-293 (протокол PT3132-1; Clontech Laboratories, Пало-Альто, Калифорния), и экспоненциально растущие клетки подвергали воздействию среды, содержащей 50% ретровирусного супернатанта и 8 мкг / мл полибрена (S2667; Sigma, St Луис, Миссури) в течение 24 часов. Среду заменяли на полную среду для выращивания, и через 48 часов добавляли 500 мкг / мл G418 (сульфат гентамицина; Cellgro, Sigma). Полученную клеточную линию OSN3 внутрибрюшинно инокулировали инбредным мышам FVB / N в возрасте 5-6 недель (Taconic, Hudson, NY) в концентрации 1 × 10 ⁷ клеток / 0.5 мл PBS. Мышей, которым вводили только 0,5 мл PBS, использовали для контроля.

В запланированные моменты времени или по признакам болезни животных либо анестезировали, либо умерщвляли, а их ткани обрабатывали для визуализации in vivo, или ex vivo, , соответственно, с последующей гистологической обработкой и патологической оценкой, как описано ниже. В качестве контроля морфологических изменений во время визуализации часть некоторых образцов была непосредственно обработана для гистологического анализа.Кроме того, параллельная идентично обработанная группа животных была умерщвлена ​​в те же моменты времени и подвергнута стандартным процедурам вскрытия и обработки. Все мыши содержались одинаково, следуя рекомендациям Институционального комитета по использованию и уходу за лабораторными животными.

Культура клеток

Приготовление первичных нормальных и мутантных p53 / Rb клеток OSE выполняли, как описано ранее [16–18]. Вкратце, клетки OSE были выделены путем переваривания коллагеназой-диспазой яичников мышей, несущих скопированные копии генов p53 и Rb [16].Клетки увеличивали в течение трех пассажей, подвергали воздействию AdCre и использовали после трех пассажей. Полное удаление гена, опосредованного Cre- LoxP , было подтверждено с помощью полимеразной цепной реакции [16]. Для контрольных экспериментов клетки OSE подвергали воздействию β-галактозидазы, экспрессирующей аденовирус (AdLacZ).

Человеческие материалы

Используя анонимный свежий хирургический материал, помеченный для удаления, образцы морфологически нормальных яичников и серозного EOC были собраны в Медицинском колледже Weill при Корнельском университете.Готовили срезы материала толщиной от одного до трех миллиметров, немедленно помещали либо в раствор Рингера, либо в RPMI, забуференный HEPES и не содержащий сыворотки и фенола, и держали на льду. Материал транспортировали в оборудование для визуализации и использовали для получения изображений с помощью многофотонного микроскопа в течение 6-20 часов после резекции. Все процедуры были одобрены институциональным наблюдательным советом.

Нелинейная (MPM и SHG) визуализация собственной флуоресценции

Многофотонная визуализация выполнялась, как описано ранее [12,19,20].Вкратце, нескомпенсированный луч 780 нм от Ti: сапфирового лазера с синхронизацией режима (накачка цунами с помощью Millennium Xs; Spectra Physics, Маунтин-Вью, Калифорния) был направлен через ячейку Поккельса (350-80LA; Conoptics, Данбери, Коннектикут) с лабораторией. — встроенная электроника для модуляции луча и гашения при обратном сканировании. Затем луч направляли в модифицированный сканер BioRad (MRC-600, Hercules, CA), сопряженный с модифицированным (фиксированный столик) вертикальным микроскопом Olympus AX-70 (Center Valley, PA). Образцы получали либо с помощью стандартного объектива (20x / 0.95 Вт XLUNPlanFl; Olympus) или с эндоскопическим стержневым объективом (27x / 0,7 Вт IV-OB35F22W20; Olympus). Тканевые излучения отделялись от возбуждающего луча с использованием длиннопроходного дихроичного фильтра 670DCXRU (Chroma Technology, Inc, Rockingham, VT), размещенного непосредственно у задней апертуры объектива микроскопа. Впоследствии излучение было разделено на два канала с помощью длиннопроходного дихроичного фильтра 440DCXRU и фильтров излучения HQ390 / 702-2P и BGG22 (Chroma Technology, Inc.). Первый канал (355–425 нм, псевдоцветный синий на рисунках) предназначен для сбора второй гармоники от фибриллярного коллагена, а второй канал (∼450–550 нм, псевдоцветный желтый) собирает выбросы от собственной флуоресценции ткани, такой как клеточный NAD (P ) H и ретиноидные соединения.Оба сигнала были обнаружены с помощью сборок ФЭУ с синим биалкалифокатодом (HC125-02; Hamamatsu, Bridgewater, NJ). Для определения собственного цвета флуоресценции — длинноволновое (LW) по сравнению с коротковолновым (SW) излучением — вместо этого сигналы разделяли с помощью дихроичного делителя 500DCXRU на фильтры излучения BGG22 (SW) и 580DF150MP (LW) (Chroma Technology, Inc). . Все изображения только что вырезанных образцов мышей проводились в течение 15 минут после удаления.

Анализ выравнивания коллагеновых фибрилл в брюшине был проанализирован путем расчета двухмерных быстрых преобразований Фурье (БПФ) стеков изображений ГВГ высокого разрешения (164 x 110 x 10 мкм ³ ).Полученные в результате изображения Фурье соответствовали двумерным гауссовым поверхностям, а их асимметрия определялась как отношение большой оси к малой. Стеки изображений были собраны из брюшины вокруг опухолей двух мышей EOC ( n = 4 стека) и у двух контрольных мышей ( n = 4 стека).

Количественная оценка собственной флуоресценции: интенсивность, цвет и анизотропия

Для количественной оценки интенсивности, цвета и стационарной анизотропии излучения собственной флуоресценции в культурах клеток области клеток автоматически определялись по интенсивности пикселей, превышающей измеренное изображение фон плюс изображение SD.В тканевых эксплантатах интересующие клетки маскировались вручную с помощью инструмента рисования и дополнительного канала в Adobe Photoshop (Сан-Хосе, Калифорния). Все процедуры табуляции пикселей были написаны на заказ с использованием среды анализа данных IDL (ITT Visual Information Solutions, White Plains, NY).

Для измерений анизотропии поляризация возбуждения регулировалась по линейной поляризации (эллиптичность ∼50 / 1) непосредственно после объектива с помощью компенсатора Берека (5540; New Focus, Сан-Хосе, Калифорния), помещенного перед сканирующим боксом.Испускаемая флуоресценция была разделена на параллельные и перпендикулярные компоненты после собирающего объектива с помощью широкополосного поляризационного светоделителя (10FC16PB.3; Ньюпорт, Ирвин, Калифорния) и двух поляризаторов (5511; New Focus), размещенных непосредственно перед фильтрами излучения (BGG22; Chroma). Technology, Inc.). Анизотропия флуоресценции A определялась как нормированная разница между интенсивностями излучения, параллельными ( I _‖ ) и перпендикулярными ( I _⟂ ) возбуждающей поляризации:

Калибровка относительных обнаруженных эффективностей ( I ^′ _∥ и I ^′ _⊥ ) была выполнена путем поворота поляризации возбуждения так, чтобы параллельный канал стал перпендикулярным каналом, а наоборот .Для изотропного образца измеренная анизотропия одинакова для обеих поляризаций возбуждения, так что:

A = I′∥ − gI′⊥I′∥ + 2I′⊥ = Arot = I′∥rot− (1 / g) I′⊥rotI′∥rot + 2I′⊥rot

Это соотношение использовалось для определить g , относительный коэффициент масштабирования между двумя каналами, учитывающий дифференциальную эффективность трактов излучения и вариации усиления PMT. Средние значения анизотропии для замаскированных областей были рассчитаны с помощью алгоритма, написанного в IDL.

Количественное определение красного сдвига в клеточной собственной флуоресценции тканей было выполнено путем маскировки нормальных OSE или областей опухоли на изображениях из модели мыши с диссеминированными метастазами.Средние значения пикселей из LW по сравнению с SW каналов из этих регионов были сведены в таблицу с использованием специально написанного алгоритма в IDL.

In vivo Imaging

Мышь, которую нужно было визуализировать, побрили и анестезировали в индукционной камере с 3,5% изофлурановым газом. Через 1-2 минуты его перевели на этап визуализации, где газ подавали через трубку диаметром 0,5 дюйма с небольшим отверстием для ввода морды мыши, а нагревание осуществлялось с помощью грелки с обратной связью от ректально введенного зонда. мониторинг внутренней температуры (модель FHC 40-90-8C A720D).Процентное содержание газа было скорректировано с 1% до 2%, поддерживая частоту дыхания ~ 60 / мин, как описано ранее [21]. Для получения изображений с помощью стандартного водно-иммерсионного объектива (Olympus XLUNPlanFl 20x / 0,95 Вт) над мышью подвешивали слой Parafilm в качестве платформы для изоляции яичников от дыхательных движений мыши. Яичник продевали через разрез в брюшной полости и предварительно вырезанное отверстие в подвешенном ложе из парафильма. Иммерсионный физиологический раствор, необходимый для оптимальной визуализации, удерживался вокруг яичника с помощью ложа Parafilm.

Получение изображений непосредственно в брюшную полость мыши было выполнено с помощью линзы объектива Olympus диаметром 3,2 мм (IV-OB35F22W20 27x / 0,7 Вт). В дополнение к микрозондовой оптике для получения высококачественных изображений опухоли с клеточным разрешением в брюшной полости потребовались две другие разработки: 1) механизм смыва крови и других оптически неблагоприятных тканевых веществ вдали от области визуализации и 2 ) механизм стабилизации тканей от движений мыши.Первоначально мы разработали гильзу, через которую проходил микрозонд для фокусировки; рукав был соединен с перфузионным трубопроводом и обеспечивал стабилизацию ткани. Эта конструкция оказалась слишком громоздкой и втягивала в нее ткань, когда зонд отодвигался от образца. Более простая конструкция, в которой небольшая трубка (диаметром 2 мм) была установлена ​​на отдельном микроманипуляторе, оказалась лучше для промывки тканей в поле зрения. Шланг также стабилизировал ткань, уменьшая движение ткани из-за дыхания мыши и фокусировки на объективе.

Визуализация активности катепсина

Для введения ProSense 680 (VisEnMedical, Inc, Woburn, MA) мышей анестезировали авертином (2,5% об. / Об. В 0,85% NaCl; 0,020 мл / г массы тела) и ProSense 680 вводили в хвостовую вену в концентрации 2 нмоль / 150 мкл в PBS. Ткани мыши были визуализированы ex vivo через 24 часа после введения ProSense 680. Общие флуоресцентные изображения были получены с использованием фильтра RFP2 на флуоресцентном стереомикроскопе Olympus SZX12. Многофотонное изображение ProSense 680 было выполнено, как ранее описано для собственной флуоресценции, за исключением того, что вместо этого флуоресцентное излучение было разделено с помощью 560DCXRU на синий (BGG22; Chroma Technology, Inc) и красный (650DF100MP; Chroma Technology, Inc) псевдоцветные каналы.Синее излучение было обнаружено с помощью двухщелочного ФЭУ (HC125-02; Hamamatsu), а излучение NIR ProSense 680 (псевдоцветное красное на рисунках) было обнаружено с помощью чувствительного к красному цвету фотокатода GaAsP PMT (H7422P-40; Hamamatsu) со специально разработанным схемотехника усилителя. Для визуализации ProSense 680 требуется значительно (обычно в пять раз) меньшая мощность возбуждения, чем для визуализации собственной флуоресценции.

Патологическая оценка

Образцы человека и мыши были помечены чернилами для ориентации, помещены в забуференный PBS 4% параформальдегид, зафиксированы в течение ночи и обработаны для заливки парафином.Перед разделением образцы были тщательно ориентированы, чтобы обеспечить прямое сравнение MPM / SHG и обычных микроскопических изображений. Подготовленные срезы окрашивали H&E и оценивали под световым микроскопом. Все поражения яичников были идентифицированы в соответствии с Руководством по классификации, одобренным Консорциумом мышиных моделей рака человека [22,23], и классификацией рака яичников Всемирной организации здравоохранения [24]. Гистологические изображения собирали с помощью камер SPOT-RT или Insight (Diagnostic Instruments, Sterling Heights, MI) и сравнивали с изображениями MPM / SHG тех же или параллельных образцов.

Морфометрический анализ

Цифровые изображения MPM серии z с шагом 5 мкм были импортированы в программное обеспечение SPOT (версия 4.6; диагностические инструменты). Были идентифицированы сопоставимые области оптических срезов через OSE, покрывающие желтое тело, и ядерные и цитоплазматические контуры были вручную отмечены людьми, которые не знали экспериментальных параметров. Наложения изображений были записаны, а параметры рассчитаны с использованием функции измерений и .

Статистический анализ

Для статистического анализа с помощью InStat 3 были выполнены двусторонние непарные тесты Стьюдента t .05 и Prism 4.03 (GraphPad, Inc, Ла-Хойя, Калифорния).

Результаты

Мультифотонная микроскопия с высоким разрешением собственной флуоресценции при раке яичников мыши и человека

Ранее мы продемонстрировали, что гистологическая архитектура нормального яичника и его клеточный состав могут быть точно идентифицированы с помощью MPM собственной флуоресценции только что вырезанных образцов [ 12]. Поэтому, чтобы определить значение MPM для патологической оценки неопластических поражений, мы сравнили изображения, полученные с помощью MPM / SHG без добавления флуоресцентных меток, с изображениями из срезов после стандартной гистологической обработки и окрашивания H&E нормального OSE и его новообразований (как мыши, так и человека). ).При визуализации с использованием окрашивания H&E нормальный OSE представлен в виде одного слоя с плоскоклеточной морфологией (). Напротив, карциномы яичников мышей Tg MISIIR-TAg ( n = 12) содержали плотно упакованные полигональные атипичные эпителиальные клетки (). В соответствии с нашими ранее опубликованными наблюдениями [15], неопластические клетки были расположены в сплошных слоях и разделены ограниченной стромой. MPM / SHG-визуализация свежих неокрашенных тканей обеспечивала одинаковый уровень разрешения с точки зрения общих гистологических и клеточных характеристик нормальных (, B и C ) и неопластических тканей (, E и F ).Подобно окрашиванию H&E, неопластические особенности, такие как высокое ядерно-цитоплазматическое соотношение, вариации в размерах клеток и измененная архитектура ткани, были легко идентифицированы. Визуализация MPM / SHG также позволила лучше визуализировать коллагеновую строму (, B, C, E и F ) и продемонстрировала, что большинство коллагеновых волокон около инвазивного края расположены перпендикулярно ее поверхности (, E и F ). В то же время, срезы H&E были важны для оценки ключевых патологических характеристик, таких как ядрышки, конденсация хроматина и общие тинкториальные свойства тканей.Идентификация митотических и апоптотических клеток также была проблематичной с использованием только MPM / SHG.

Оценка потенциала MPM (желтый) и SHG (синий и оттенки серого) для исследования EOC мышей. Модели нормальных мышей яичников (A – C), карциномы яичников Tg MISIIR-TAg (D – F) и диссеминированные перитонеальные EOC (G – M) мыши визуализировались с помощью окрашивания H&E (A, D и G). Собственная эмиссия MPM (B, E и H) и визуализация SHG (B, C, E, F, H, I – M). (A – C) Поверхностный эпителий яичника (OSE, стрелка), часть желтого тела (CL) и бурса яичника (OB) четко разрешимы с помощью MPM и напоминают изображения на обычном гистологическом изображении.Кроме того, SHG демонстрирует наличие коллагена в сумке яичников и базальной мембране (BM) под OSE. (D – F) Мономорфные полигональные неопластические клетки (стрелка) обнаруживаются с помощью H&E и MPM. Обратите внимание, что ГВГ демонстрирует присутствие коллагена, причем большинство коллагеновых волокон вблизи периферии опухоли расположены перпендикулярно ее поверхности (стрелка), что не проявляется в тканях, приготовленных традиционным способом. (G – H) Группа неопластических клеток (стрелка), проникающая в париетальную брюшину. Проекционные изображения с низким (J и L) и высоким (K и M) увеличением изображения архитектуры коллагена из нормальной брюшины (J и K) и вокруг областей опухоли (L и M).(N и O) Типичные преобразования Фурье из полных изображений, показанных в K и M, соответственно. Эллипсы Гаусса (синие) подходят для определения асимметрии коллагеновых фибрилл. Изображения MPM были получены с использованием возбуждения 780 нм. Синий и желтый псевдоцветы представляют собой эмиссию от 355 до 425 нм и от 450 до 550 нм соответственно. Для наглядности изображения ГВГ воспроизводятся серым цветом в C, F и от I до M. Масштабные полосы: 30 µ м (A – C), 22 µ м (D – F), 45 µ м. (G – I, J и L) и 12 µ м (K и M).

Чтобы расширить общность этих наблюдений, мы разработали и оценили новую модель диссеминированного перитонеального EOC. В этой модели OSE, трансформированная инактивацией p53 и Rb и сверхэкспрессией c-Myc, формирует множественные неопластические опухоли на висцеральных и париетальных стенках брюшной полости через 3-5 недель после внутрибрюшинной инъекции. Подобно новообразованиям мышей Tg MISIIR-TAg , неопластические клетки были идентифицированы с помощью изображений H&E и MPM / SHG ( G и H ) во всех 10 исследованных случаях.Примечательно, что эти опухоли также имели аберрантный внешний вид и ориентацию коллагена (, H и I ). Фибриллы, лежащие в основе нормального мезотелия брюшины, были относительно однородными и имели волнистый вид, тогда как фибриллы вокруг опухолевых масс имели переменный диаметр и прямолинейно-жесткий вид. Аберрации однородности и внешнего вида были хорошо различимы (при низком и высоком разрешении соответственно) путем проецирования оптических срезов из стопки изображений коллагена, лежащей под мезотелием (, J и K ) или неопластических клеток (, L и M ). .Свойства выравнивания автоматически анализировались путем вычисления БПФ проецируемых изображений и подгонки гауссовых эллипсов к полученным компонентам Фурье. БПФ из стопок изображений нормальной () и карциноматозной () брюшины выявили значительное увеличение асимметрии ( P = 0,0456) опухолевых фибрилл по сравнению с нормальными фибриллами (среднее ± стандартная ошибка; 3,0 ± 0,6, n = 4 ). против 1,49 ± 0,02, n = 4). Разница потенциалов в сегментарном коллагене, указывающая на фибриллогенез (наблюдаемая в виде пятен микрометрового масштаба на изображениях, см. Williams et al.[25]). Было высказано предположение, что коллагеновых сегментов больше в раковых тканях из-за повышенного обмена коллагена в этих тканях (см., Например, Kenny and Lengyel [26]). Однако было обнаружено, что количество наблюдаемого сегментарного коллагена в опухолевых и контрольных тканях примерно одинаково.

Затем мы протестировали применение MPM / SHG на человеческих образцах. Сравнительный анализ нормальных яичников (, A, и B, n = 8) и аденокарцином яичников (, C, и D, n = 4) подтвердил, что этот подход обеспечивает уровень детализации, аналогичный полученному с стандартная гистологическая обработка, с ранее отмеченными преимуществами и ограничениями.В соответствии с наблюдениями на моделях мышей и исследованиями в тканях человека [14], коллаген из опухолей EOC человека обычно наблюдался в более толстых, менее однородных полосах, чем из нормальных яичников ( D против B ).

Стандартная гистология и MPM / SHG эпителия яичников человека и низкодифференцированной аденокарциномы. Те же образцы тканей визуализировали после фиксации формалином и заливки парафином с последующим окрашиванием H&E (A и C) и перед фиксацией с использованием MPM / SHG собственных выбросов ткани (B и D).(A, B) Морфологически нормальный эпителий яичника в инвагинациях (стрелка) и простых кистах (наконечник стрелки) у поверхности яичника. (C – D) Атипичные неопластические клетки, образующие железистую структуру (стрелка) внутри десмопластической стромы (наконечник стрелки). Обратите внимание на присутствие фибрилл коллагена, отображаемых с помощью генерации второй гармоники (SHG; синий), что не всегда очевидно в тканях, приготовленных традиционным способом. Изображения MPM / SHG получаются как в. Масштабная шкала, 30 µ м на всех изображениях.

Морфометрический анализ на основе MPM позволяет обнаруживать ранние изменения во время канцерогенеза яичников

Согласно литературным данным, у людей ранние поражения яичников могут быть идентифицированы по их морфометрическим параметрам, таким как увеличенный размер клеток и ядер [27–31].Однако, поскольку выявление таких поражений обычно сопровождается овариэктомией, их прогрессирование до карциномы остается неподтвержденным. Для воспроизводимого исследования ранних событий, связанных с канцерогенезом яичников, мы обратились к нашей модели серозной аденокарциномы яичников, инициированной условной инактивацией OSE p53 и Rb после однократной трансинфундибулярной интрабурсальной инъекции AdCre [16]. Эта модель уникально подходит для таких исследований из-за временного и локального контроля исходного события.EOC развиваются относительно синхронно и приводят к гибели 97% мышей со средней выживаемостью 227 дней после инактивации гена [16].

Подобно другим образцам яичников, неопластические поражения, различимые при патологической оценке срезов H&E, были легко обнаружены с помощью MPM / SHG (, A и B ). Кроме того, MPM / SHG позволил обнаружить утолщение коллагеновых волокон на или рядом с базальной мембраной, лежащей в основе ранних диспластических поражений (сравните, C и D , с B и C ).Подтвердив наши более ранние наблюдения, что более 90% клеток OSE инфицированы после введения 5 x 10 ⁷ БОЕ / мкл аденовируса (и Flesken-Nikitin et al. [16]), мы затем проверили, является ли MPM / SHG оптическим секционирование может облегчить обнаружение морфологических изменений через 8 и 34 дня после условной инактивации p53 и Rb. Никаких изменений клеточной морфологии и гистологической архитектуры не было обнаружено при визуальной оценке срезов H&E или MPM. Однако количественная морфометрическая оценка срезов MPM, взятых параллельно поверхности яичников, продемонстрировала значительное увеличение ядер и цитоплазмы OSE через 8 и 34 дня после начала канцерогенеза (, F – H).Интересно, что ядерно-цитоплазматические отношения не изменились в какой-либо значительной степени ( P = 0,6547 и P = 0,3761 на 8-й и 34-й дни, соответственно).

Канцерогенез поверхностного эпителия яичников, связанный с условной инактивацией генов p53 и Rb . Многослойные атипичные клетки, образующие сосочковые структуры (стрелки), можно идентифицировать с помощью стандартной микроскопии (A) и MPM / SHG (B). Утолщение коллагеновых фибрилл (стрелки) около и на базальной мембране раннего диспластического поражения (стрелка) очевидно на изображении MPM / SHG (C) с SHG, воспроизведенным в оттенках серого для ясности (D).(E) Экспрессия eGFP в OSE яичника мыши после однократной интрабурсальной инъекции в яичник 5 × 10 ⁷ БОЕ / мкл мкл AdCMVEGFP. Стрелка указывает OSE; CL , желтое тело; F , фолликул; В , сосуд. Зеленый псевдоцвет — это флуоресценция GFP, а желтый — собственная флуоресценция (эмиссия <500 нм). (F) Морфометрическая оценка изображений собственной эмиссии OSE мыши. Размер отдельных клеток, их ядер и цитоплазмы оценивали по площади (белые кольца, мкм, мкм, ² , среднее значение ± стандартная ошибка).(G) Результаты нанесены на график для изображений, собранных через 8 дней после интрабурсального введения AdCMVCre (Cre) или AdCMVLacZ (LacZ) мышам p53floxPRb1floxP. Непарный тест т дал двусторонний P = 0,0002 для цельноклеточного Cre по сравнению с LacZ (171,4 ± 12,4, n = 45 против 120,4 ± 6,0, n = 53), P = 0,0466 для ядра Cre по сравнению с LacZ (74,8 ± 5,3, n = 45 против 53,0 ± 10,7, n = 26) и P =.0009 для цитоплазмы Cre по сравнению с LacZ (96,58 ± 8,7, n = 45, против 65,6 ± 3,78, n = 53). (H) Через 34 дня после трансформации неспаренный тест t дал двусторонний P = 0,0007 для цельноклеточного Cre по сравнению с LacZ (130,4 ± 6,5, n = 40 против 92,1 ± 8,8, n = 36), P = 0,015 для ядра Cre по сравнению с LacZ (70,0 ± 4,5, n = 40 против 53,4 ± 4.9, n = 36) и P = 0,0007 для цитоплазмы Cre по сравнению с LacZ (60,38 ± 4,3, n = 40 против 38,6 ± 4,3, n = 36). Все эксперименты проводились в двух экземплярах и дали аналогичные результаты. Масштабные линейки: 15 µ м (A, B), 20 µ м (C, D), 30 µ м (E) и 12 µ м (F).

Количественные изменения во внутренних флуоресцентных свойствах рака яичников

Поскольку считается, что сигнал внутриклеточной флуоресценции в эпителиальных клетках происходит главным образом от NAD (P) H, мы предположили, что характеристики этого сигнала — интенсивность, спектр или анизотропия — могут давать дополнительная информация о метаболическом состоянии клеток.Первоначально мы протестировали эти параметры на первичных клетках OSE, несущих гены p53 и Rb , через три пассажа после воздействия AdCre или AdLacZ (контроль). Действительно, интенсивность в клетках с делецией p53 / Rb была значительно ниже (60 ± 4%, среднее ± стандартная ошибка, n = 32 изображения), чем у нормальной популяции (100 ± 12, n = 16 изображений, P = 0,0003). Мы также наблюдали небольшой спектральный красный сдвиг в клеточных культурах (не показан). Оба характерных изменения, по-видимому, коррелируют с везикулярной продукцией флуоресцентного материала, не проявляющейся в нормальных клетках in vivo .

Третьим протестированным параметром была стационарная анизотропия излучения собственного сигнала флуоресценции. Ожидается, что такое измерение даст информацию о количестве времени, в течение которого флуорофор повернулся относительно его времени жизни флуоресценции. Например, время вращения (и время жизни флуоресценции) может изменяться при связывании НАДН с высокомолекулярным белком. Собственная анизотропия флуоресценции в неопластических клетках OSE (0,301 ± 0,001, среднее ± стандартная ошибка, n = 25 изображений) была значимой ( P <.0001) ниже, чем в нормальных клетках OSE (0,319 ± 0,003 среднее ± SE, n = 25 изображений). Эти результаты могут указывать на то, что более метаболически активные клетки, такие как неопластические клетки, имеют более высокую фракцию свободного связанного NAD (P) H (как было показано на трансформированных культурах клеток молочной железы [32]).

Однако на мышах мы определили, что значения интенсивности и анизотропии очень чувствительны к рассеянию ткани и, таким образом, зависят от количества и типа ткани, через которую было получено изображение.Соответственно, анализы интенсивности и анизотропии тканей дали противоречивые результаты (не показаны).

В то же время красный сдвиг средней собственной флуоресценции клеток воспроизводимо наблюдался в опухолевых клеточных массах по сравнению с нормальным OSE. MPM-изображения свежевырезанной ткани из модели диссеминированных метастазов () показали соотношение LW / SW, которое было значительно выше в опухолевых по сравнению с нормальными клетками (1,3 ± 0,1, среднее ± стандартная ошибка, n = 7 опухолей, против 1.00 ± 0,03, n = 9 яичников, P = 0,0064). Интересно, что спектральный сдвиг в опухолях, по-видимому, возникает в основном из-за отдельной популяции клеток, излучающих красный цвет, в опухолевой массе (). Было обнаружено, что эти излучающие в красный цвет клетки жизнеспособны при анализе интенсивности НАДН и стоимости жизнеспособного красителя кальцеина-АМ (данные не показаны).

Изменение цвета излучения при собственной флуоресценции EOC. Нормальные OSE (A и B) и неопластические клетки из модели диссеминированного перитонеального EOC (C и D) были проанализированы на относительные количества LW / SW (510-650 нм / 410-490 нм, зеленый / красный псевдоцвет) собственной флуоресценции.Для справки, ГВГ из коллагена бурсы яичника показана синим псевдоцветом. Собственные флуоресцентные изображения OSE помечаются вручную (зеленые замаскированные области, A и C). Белыми полями отмечены увеличенные области, показанные в B и D соответственно. (E) Анализ средней интенсивности пикселей в областях, замаскированных зеленым цветом, показывает, что собственная флуоресценция опухоли смещена в красную область по сравнению с нормальным OSE из-за отчетливой популяции переедмиттирующих клеток (стрелки, D). Средние отношения LW / SW составляют 1,00 ± 0,03 (среднее ± SE, n = 9; RU, относительные единицы) для нормального OSE и 1.3 ± 0,1 ( P = 0,0064, n = 7) для новообразований. Данные были получены из 450 изображений при возбуждении 780 нм. Масштабные линейки, 50 µ м (A, C) и 25 µ м (B, D).

Прижизненный MPM рака яичников с использованием лапароскопической палочки Объектив

Ранее было продемонстрировано, что при определенных экспериментальных условиях, обычно в сочетании с исследовательскими флуорофорами, MPM можно использовать для визуализации у живых животных (например, см. Zipfel et al. [9] ], Браун и др.[33], Кондилис и Сегал [34]). Чтобы изучить возможность применения in vivo без контрастного вещества, мы визуализировали яичники живых мышей (, A – F ) путем экстериоризации яичника, чтобы изолировать его от полости тела. Этого метода было достаточно для разделения отдельных клеток OSE в неокрашенных яичниках (, A – C ) и для дифференциации этих нормальных OSE от ранних неоплазий EOC с использованием модели с флоксированием p53 / Rb (, D – F ).

Отличие нормального OSE от опухолевого у живых мышей с использованием MPM / SHG.Изображения нормальных (A – C) и трансформированных (D – F) мышей OSE от условной инактивации модели p53 и Rb получают путем экстериоризации яичника и визуализации с помощью стандартной линзы объектива. На увеличенных изображениях от A и D, соответственно, OSE (стрелки) разрешимы как один слой в нормальных яичниках (B) и как несколько слоев в неоплазии (E). Кроме того, канал SHG (C, F) показывает, что коллагеновый слой под OSE заметно толще при неоплазии (стрелка).OB отмечает бурсу яичника, а >> отмечает артефакты горизонтального движения из-за дыхания мыши. Шкала: 30 µ м (A, D) и 15 µ м (B, C, E и F).

Однако стандартные объективы микроскопа большого диаметра закрывают доступ к внутренним органам и тканям. Кроме того, для получения изображений с разрешением в микрометровом масштабе необходимо иметь в наличии стратегии уменьшения артефактов движения, в первую очередь из-за дыхания пациента. Чтобы решить эти проблемы, мы протестировали микрозондовый объектив, недавно разработанный Olympus.Эта серия оптики представляет собой объективы с полной коррекцией аберраций с наконечниками малого диаметра (1,2 и 3,2 мм) и длиной сантиметра. Мы обнаружили, что простые линзы GRIN неэффективны для сбора высококачественных изображений собственного излучения, предположительно из-за их более значительных аберраций. В соответствии с нашими предыдущими результатами, демонстрирующими применимость микрозондового объектива Olympus для MPM-визуализации собственной флуоресценции иссеченных тканей толстой кишки [35], мы смогли успешно визуализировать ткани яичников и брюшины без окрашивания (не показано).После дополнительных улучшений промывки и стабилизации тканей с помощью дополнительных трубок мы смогли получить изображения париетального и висцерального мезотелия и подлежащих тканей брюшной полости. Важно отметить, что неопластические клетки легко отличить от окружающих нормальных тканей в мышиной модели диссеминированного перитонеального EOC ().

Прижизненная визуализация MPM / SHG в брюшной полости с использованием линзы микрозондового объектива (диаграмма A). Нормальная брюшина (B и C) и неопластические клетки модели диссеминированного перитонеального EOC (D – G) визуализированы in vivo и in situ через разрез брюшной полости.Нормальный мезотелий очень тонкий, имеет низкую собственную флуоресценцию и практически невидим при прижизненном МФМ. Однако неопластические поражения четко видны на инвазивном крае (D и E) и на поверхности опухоли (F и G). Для наглядности изображения SHG воспроизводятся в оттенках серого в оттенках C, E и G. Артефакты движения из-за дыхания мыши отмечены знаком >>. Желтый мениск внизу B — это край поля зрения линзы объектива. Масштабная линейка 30 µ м.

Комбинация скрининга при малом увеличении и оптической биопсии MPM высокого разрешения

Потенциальным ограничением линзы стержневого объектива является ее небольшое поле зрения.Чтобы облегчить прижизненный скрининг неопластических поражений на больших площадях, мышам внутрибрюшинно вводили ProSense 680, комплекс, который излучает красный свет при опосредованном катепсином B гидролизе. В соответствии с предыдущими результатами [36], этот индикатор протеазной активности оказался эффективным при обнаружении неопластических диссеминированных перитонеальных клеток EOC при малом увеличении как при стандартном, так и при многофотонном возбуждении (, A – D ). Выбранные области впоследствии визуализировались лапароскопической линзой объектива (, E и F ), что позволяло визуализировать отдельные клетки с активностью катепсина B.В то время как большинство флуоресцентных клеток были неопластическими, капилляры и внутримышечные клетки под париетальной брюшиной () также были обнаружены в соответствии с более ранними наблюдениями [36]. MPM / SHG позволил получить подробное картирование границы опухоли в трех измерениях, подтвердив наши предыдущие наблюдения, что фибриллы коллагена вокруг опухоли были более прямыми и ориентированы к границе опухоли на инвазивном фронте ().

Визуализация активности катепсина с использованием MPM / SHG. Изображения нормальной брюшины (A, C, E и G) и опухолей брюшины (B, D, F и H, стрелки) из модели диссеминированной брюшины после введения ProSense 680 (красный).Обнаружение неопластического поражения с помощью стандартной стереофлюороскопии (A и B) и последующее картирование границ опухоли (D, стрелки) в трех измерениях с помощью MPM / SHG. В этом случае нормальные (C) и опухолевые (D) изображения были собраны с помощью объектива с низким увеличением (4x / 0,28 NA) и отображены в виде проекций, каждое из 100 изображений с интервалами 5- µ м. Различение нормальной брюшной стенки (E) и новообразования (F) при клеточном разрешении с помощью палочки. Изображения MPM / SHG с высоким разрешением демонстрируют активность катепсина в некоторых стромальных клетках (G, стрелки) и неопластических клетках (H, стрелка).Кроме того, они показывают изменения размера и формы неопластических клеток и архитектуры ткани, а также ориентацию фибрилл коллагена по направлению к границе опухоли (H, стрелка). Масштабные линейки: 1000 µ м (A, B), 500 µ м (C, D), 80 µ м (E, F) и 100 µ м (G, H).

Обсуждение

Минимально инвазивные или неинвазивные методы диагностики рака и терапевтической оценки у людей, а также мониторинг канцерогенеза в режиме реального времени у экспериментальных животных остаются одними из самых желанных и сложных целей исследований рака.Несомненно, такие способности значительно облегчат наше понимание возникновения и прогрессирования рака, а также позволят разработать индивидуальные терапевтические подходы к пациентам. Два недавних события предоставили захватывающую предпосылку для дальнейших исследований. Во-первых, в последнее время был достигнут значительный прогресс в технологиях, позволяющих неинвазивно визуализировать молекулярные и клеточные процессы [37,38]. Во-вторых, технический прогресс в манипулировании и генетической модификации генома мыши привел к быстрому расширению репертуара точных моделей рака, которые генетически и фенотипически имитируют человеческий рак (обзор у Jonkers and Berns [39], Van Dyke and Jacks [40] и Frese and Тувсон [41]).

Оба достижения стимулировали развитие флуоресцентных контрастных агентов для обнаружения и мониторинга рака [37,42]. Проблемы с этими агентами включают репортерную специфичность, индуцированную токсичность и подходящие стратегии доставки. Эндогенные излучатели, напротив, являются неотъемлемой частью ткани. Хотя их фотофизические характеристики обычно хуже (тусклые и излучающие на коротких длинах волн, которые легко рассеиваются в ткани), собственные тканевые излучения демонстрируют характерные свойства естественной ткани [12].Поскольку спектры излучения не зависят от режима возбуждения (т. Е. Обычное УФ-освещение по сравнению с двухфотонным возбуждением), интерпретация изображений собственной многофотонной флуоресценции тканей изначально основывается на широком спектре однофотонной тканевой спектроскопии и экспериментов по визуализации (обзоры см. Ramanujam [10] и Richards-Kortum и Sevick-Muraca [11]), в которых значительные усилия были направлены на определение спектральных характеристик внутренней ткани, которые различают нормальные и диспластические или опухолевые ткани.Как правило, эмпирические диагностические критерии устанавливаются путем анализа спектральной формы собственных кривых возбуждения и / или испускания флуоресценции с использованием обучающего набора раковых образцов по сравнению с нормальными образцами. Эта стратегия оказалась успешной для широкого спектра раковых тканей [43–53] и была реализована в эндоскопических устройствах для раннего обнаружения раковых поражений шейки матки [51], толстой кишки [52], мочевого пузыря [43], кожи [44]. , полость рта [46,48,50] и пищевод [54]. Обычно спектральные измерения проводятся в одной точке ткани, местоположение которой определяется эндоскопом белого света.Однако недавно были разработаны эндоскопы с внутренней флуоресценцией для визуализации (системы LIFE-GI и Olympus Auto-Fluorescence Videoscope), которые демонстрируют диагностический потенциал рака желудка [55], легких [56] и толстой кишки [57].

Несмотря на то, что эти системы полезны, разрешение этих систем находится в миллиметровом диапазоне, что исключает обнаружение и определение характеристик микроскопических поражений, а также оценку свойств тканей на уровне отдельных клеток. Подходы к нелинейной визуализации, такие как MPM и SHG, могут устранить это текущее ограничение [9].Однако их применимость в клинических условиях во многом зависит от ряда достижений, включая 1) разработку диагностических критериев, сопоставимых с критериями, получаемыми при рутинной гистологической визуализации, 2) способность получать четкие изображения в сложных условиях со значительным оптическим рассеянием от крови [58] и артефакты движения от дыхания и сердцебиения, 3) разработка эндоскопических инструментов, совместимых со сверхбыстрой оптикой, обеспечивающих минимально инвазивный доступ к целевым органам и тканям, с достаточно высокой чувствительностью для сбора слабых сигналов собственной флуоресценции, и 4) улучшение способности Найдите регионы для оценки с высоким разрешением с помощью MPM / SHG (лучшая интеграция переключателя с малого на большое увеличение).

Диагностические критерии MPM / SHG

В настоящем исследовании мы проверили возможность визуализации MPM / SHG при раке яичников, где особенно важна необходимость ранней диагностики и тщательной оценки эффективности операции по удалению опухоли. Поскольку внедрение новых диагностических тестов и подходов в клиническую практику, и особенно в патологию, во многом зависит от способности связывать новые диагностические критерии с уже установленными и клинически подтвержденными наборами функций, мы сосредоточили внимание на преимуществах и недостатках визуализации естественных тканей. с MPM по сравнению с обычной микроскопией гистологических препаратов H&E.Параллельная оценка образцов EOC от пациентов-людей и моделей мышей продемонстрировала, что MPM / SHG было достаточно для обнаружения особенностей неоплазии, таких как размер и форма клеточных компартментов и архитектура ткани. Кроме того, изображения выбросов тканей MPM / SHG предоставили информацию, отличную от той, которая была получена с использованием стандартных гистологических протоколов. Например, SHG четко очерчивает фибриллярную структуру коллагена, которая не видна на стандартных срезах H&E. Однако на изображениях MPM / SHG отсутствовала диагностическая ядерная информация, такая как размер и форма ядрышек, конденсация хроматина и локализация.Кроме того, отсутствуют цветовые вариации H&E; цитозольные пространства вместо этого в значительной степени ограничиваются флуоресценцией NAD (P) H, которая чувствительна к окислительно-восстановительному состоянию [59].

Происхождение многих воспроизводимых флуоресцентных характеристик на изображениях собственной флуоресценции тканей до сих пор неизвестно. Наша работа способствует разработке атласа или базы данных для интерпретации изменений собственной эмиссии тканей, характерных для различных поражений. Такие усилия дополняют усилия других лабораторий [14,35,60–63].

В дополнение к прямому применению изображений MPM / SHG для диагностики новообразований в соответствии с установленными патологическими критериями, некоторые из его внутренних особенностей особенно привлекательны для облегчения диагностики. Во-первых, визуализация MPM / SHG позволяет быстро и трехмерно оценить патологию иссеченной ткани практически без подготовки ткани. Эта методология должна быть полезна в клинических ситуациях, требующих быстрых трехмерных изображений биопсии, или в исследованиях живых тканей, где фиксация ткани не может использоваться, поскольку она нарушает архитектуру ткани или исследуемые процессы.Мы демонстрируем здесь, что «оптические срезы» MPM / SHG позволяют нам избежать длительных серийных гистологических срезов, необходимых для точной оценки однослойной OSE. Ожидается, что дальнейшие исследования с использованием этого подхода упростят морфометрическую оценку ранних поражений яичников у людей.

Во-вторых, визуализация MPM / SHG позволила лучше оценить расположение и характеристики коллагеновой стромы. Поскольку известно, что метастатическое прогрессирование рака яичников совпадает с повышенным синтезом и деградацией коллагена [26,64], мы проанализировали изображения на предмет увеличения сегментарного коллагена, связанного с фибриллогенезом в областях, окружающих опухоль, но обнаружили сопоставимые количества.Вместо этого мы наблюдали утолщение коллагена в базальной мембране при ранних неоплазиях яичников и более прямые, менее однородные фибриллы коллагена вокруг перитонеальных неопластических имплантатов, что согласуется с предыдущими сообщениями о том, что компоненты стромального матрикса перестраиваются в плотные, линейно выровненные волокна при инвазивной карциноме яичников [65 , 66]. Кроме того, мы продемонстрировали, что большинство коллагеновых волокон вблизи инвазивного края расположены перпендикулярно его поверхности. Эти результаты согласуются с предыдущими сообщениями о опухолях молочной железы [62], предполагая, что фибриллы, ориентированные перпендикулярно опухоли, коррелировали с инфильтрацией опухолевых клеток в стромальную ткань хозяина.

В-третьих, MPM позволяет всесторонне оценивать спектральные изменения собственной флуоресценции с клеточным разрешением. Мы определили, что анализы интенсивности и анизотропии тканей вряд ли дадут согласованные результаты из-за их высокой чувствительности к рассеянию тканей. Подобно предыдущему отчету о тканях человека [14], мы обнаружили красный сдвиг флуоресценции неопластических клеток у мышей с расширенным EOC. Киркпатрик и др. [14] объяснили этот спектральный сдвиг увеличением общего отношения FAD к NAD (P) H.Однако, согласно нашим наблюдениям, это изменение внутренней клеточной флуоресценции происходит не из-за среднего изменения цвета, а из-за определенной популяции клеток, выделяющих красный цвет внутри опухоли. Эти клетки были определены как живые по клеточной экспрессии NAD (P) H и окрашиванию кальцеином-AM и могут представлять собой порфиринсодержащие клетки [47,67,68].

На пути к

In vivo Реализация внутренней флуоресценции тканей MPM / SHG

Очевидно, что стандартный многофотонный микроскоп не может использоваться для микроскопической визуализации человека.Однако несколько новых технологических достижений сделали эндоскопическую версию MPM / SHG — устройства для сбора in vivo гистологических изображений — реально достижимой целью. Несколько недавно разработанных конфокальных эндоскопов предлагают замечательную визуализацию in vivo в клеточном масштабе и проходят клинические испытания [69,70]. В этих устройствах артефакты движения сводятся к минимуму за счет стабилизации ткани катетера и использования всасывающих отверстий. Эндоскопическая реализация MPM может дополнить эти усилия дополнительной возможностью визуализации собственной флуоресценции ткани и ожидаемым увеличением глубины проникновения в несколько раз [9].Первой задачей было разработать волокна, по которым могли бы распространяться достаточно мощные фемтосекундные лазерные импульсы с минимальным временным расширением импульса из-за дисперсии. Некомпенсированный импульс 1 нДж и длительностью 100 фс удлиняется до ~ 4000 фс после прохождения через метр оптического волокна (уменьшая потенциал возбуждения 2P в 40 раз). Дисперсию импульсов можно частично компенсировать при малых мощностях. Однако для передачи более высокой мощности необходимы микроструктурированные волокна. Они относительно большие (сохраняют низкие средние интенсивности), но распространяют только одну моду из-за сложных граничных условий [71,72].Сканирование выполняется либо путем покачивания волокна [70,73–76], либо с помощью устройств MEM [77], переданных на градиент-индекс или микролинзу для фокусировки [78]. Несколько исследователей продемонстрировали визуализацию коллагена с помощью эндоскопа MPM [77,79], но еще не in vivo . Настоящая проблема заключалась в разработке эндоскопа с чувствительностью для визуализации внутренних клеточных флуорофоров, которые обычно в 100 раз тусклее, чем стандартные флуорофоры [12]. В текущем исследовании мы демонстрируем клеточную визуализацию in vivo с использованием MPM / SHG собственных выбросов, которые можно использовать для идентификации новообразований в нескольких моделях рака яичников на мышах.Кроме того, мы демонстрируем возможность лапароскопической реализации MPM / SHG in vivo с помощью недавно разработанного стержневого объектива диаметром 3 мм, который обеспечивает прямой доступ к визуализируемым тканям. В этом случае отдельная небольшая трубка служила для стабилизации и промывания ткани, последняя возможность особенно важна для опухолей с внутренним кровотечением.

Контрастные агенты для нацеливания MPM / SHG на области предполагаемых неопластических поражений

Помимо эндогенной собственной флуоресценции, вероятно, что флуоресцентные контрастные агенты (например,g., ALA [80]) и / или интеллектуальные индикаторы [42,81] улучшат диагностическую информацию и сигнализируют, как только вопросы токсичности и доставки будут лучше поняты. Другие продемонстрировали полезность индикатора активности катепсина ProSense 680 для диагностики рака яичников [7]. Мы показали, что этот сигнал можно использовать для быстрой идентификации поражений с помощью стандартной рентгеноскопии для последующего клеточного опроса с использованием MPM / SHG. ProSense 680 можно отображать одновременно с собственными тканевыми выбросами, обеспечивая контекстуальный тканевый фон.Поскольку он флуоресцирует в ближнем инфракрасном диапазоне, ProSense 680 может также существенно улучшить глубину и точность картирования поражений с помощью MPM / SHG в сложной среде in vivo .

В совокупности наши результаты демонстрируют возможность получения изображений с высоким разрешением эпителиального рака яичников с помощью лапароскопической нелинейной микроскопии. Они также демонстрируют ценность изображений MPM / SHG для быстрой первоначальной оценки образцов рака яичников. Дальнейшие достижения в области фотоники и микротехнологии должны сделать возможным создание эффективного многофотонного эндоскопа с оптоволоконным соединением с возможностью минимально инвазивной полностью оптической биопсии для клеточно-разрешенной диагностической оценки поражений рака яичников, а также других злокачественных новообразований.

ДОМ

Весы для создания собственной логарифмической линейки

• Контрольные масштабы — вырезать и вставить для создания правила слайда — Андрей Никитин
• Создайте базовое правило слайда — шкалы: A, B, C, D — Брайан Рональд (Великобритания)
• Создайте свою собственную линейку слайдов — Масштаб: D, L, S [B, CI, C] T, K, A — Опубликовано в Scientific American
• Постройте правило скольжения Мангейма — шкалы: K, A, B, L, C, D — Kinsman (США)
• Создайте круговую линейку с использованием футляра для компакт-диска — Ин Хум (Канада)
• Построение кругового правила скольжения для любительского радиолюбителя — Патрик Эглофф (Корсика)
• Построение правила слайда журнала-журнала — версия A — Джон Савард (Канада)
• Построение правила слайда журнала-журнала — версия B — Джон Савард (Канада)
• Построение круговой SR — множественные наложения — Джон Савард (Канада)
• Построение кругового правила скольжения (простое) — Чарльз Канкельборг (США)
• Круговая линейка Build Sexton Omnimetre — Уэйн Харрисон
• Цилиндрическая скользящая линейка Thacher — Уэйн Харрисон
• Thacher Пример сборки 1 — Дэвид Уайт
• Thacher, пример сборки 2 — Боб Вольфсон
• Построение цилиндрической скользящей линейки Otis King — Питер Монта
• Весы SR или математика — Джейсон Васкевич

Верх

---

Справочные шкалы с линейкой скольжения

Это очень удобно, когда вы пытаетесь описать старую логарифмическую линейку. без наклеек шкалы или когда инструкции написаны кириллицей.Превосходная графика любезно предоставлена ​​Андреем Никитином. Графика может быть используется для создания настраиваемой шкалы линейки слайдов путем копирования и вставки в графический редактор и распечатайте его на бумаге или прозрачных материалах.

По многочисленным просьбам, следующие 75 изображений эталонного масштаба объединены в один файл, который вы можете скачать: SR_scales.zip . Просто щелкните правой кнопкой мыши и сохраните цель на свой компьютер, после чего вы сможете распаковать их.

Верх

---

Весы для создания основного правила скольжения

A [B, C] D — Брайан Рональд

Вершина

---

Создайте свою собственную линейку для слайдов

D, L, S [B, CI, C] T, K, A — Опубликовано в Scientific American

Читать статью полностью: Статья Scientific American, май 2006 г. Когда правила слайдов Клифф Столл (16.8 МБ PDF)

Загрузите и распечатайте этот PDF-файл. Вы можете построить рабочую логарифмическую линейку из бумаги и целлофановой ленты. Фотокопирование этих планов на более толстую бумагу дает достаточно надежный расчетный инструмент. Scientific American, май 2006 г.

Вершина

---

Весы для создания правила скольжения Мангейма

K, A [B, L, C] D — Эндрю Кинсман

Эндрю коллекционирует логарифмические линейки с 1972 года.Он пишет: «Я 30 лет проработал в Eastman Kodak инженером-программистом, специализируясь на проектах микропроцессоров в реальном времени, и ушел на пенсию в начале 2006 года. Я помогал проектировать и программировать автоматизированные склады, анализаторы крови, робототехнику, ротационные микрофильмы, копировальные аппараты, объективы с компьютерным управлением. шлифовальные станки, принтеры, фотоаппараты, сотовые телефоны и несколько интересных военных проектов На пенсии я помогаю находящейся поблизости команде роботов FIRST и моему брату, который преподает высокоскоростную фотографию в соседнем колледже со всеми своими компьютерными проектами.Я почти всегда работаю над каким-нибудь проектом Arduino, пока готовлюсь к следующему мейкерфайру ». Для вопросов, контактная информация Эндрю: sneelocke [] aol [] com

Вершина

---

Весы для создания круговой линейки с использованием футляра для компакт-дисков

от Ying Hum (VA3YH), Канада Показаны 2 варианта круговой логарифмической линейки. Каждую из них просто нужно вырезать и поместить в футляр для компакт-дисков. Если вы загружаете инструкции, к ним также прилагаются два основных правила слайда. Один является точной копией Concise 270.Файлы PDF масштабируются, поэтому будьте осторожны при вырезании центрального отверстия.

Инь получил награду за это инновационное приложение. Показано, как его сын вырезает один из дисков.

Вершина

---

Весы для радиолюбителей, круглая линейка

от Патрика Эглоффа (VA3YH) Corsica Это круговая линейка для вычисления коэффициента усиления, потерь или КСВ при измерении мощности или работе с антеннами. Очень удобное устройство, если вы любитель радиолюбителей.(куратором ISRM оказался KI0CC из Колорадо). Принцип прост, мощности даны в логарифмической шкале с четырьмя декадами для диапазона 40 дБ. Для коэффициентов усиления и обратных потерь используется одна и та же линейная шкала с 40 градациями, а КСВ — это специальная шкала. шкала, отвечающая формуле зависимости КСВ от мощности. Чтобы использовать диаграмму, вам нужно только совместить 2 мощности на 2 концентрических дисках, и вы прочитаете результат в маленьком окошке. На самом диске есть краткое пояснение. Шкала допускает прямое считывание до 40 дБ при мощности от 0.От 1 Вт до 1 кВт и все остальные весы с небольшим мысленным отражением. Например: от 0,1 мВт до 1 Вт и от 100 Вт до 1000 кВт.

Для получения более подробной информации о конструкции и использовании перейдите на сайт Патрика. Домашняя страница TK5EP.

Вершина

---

Весы для изготовления бревенчатого слайда. Правило

Версия A — Джон Дж. Дж. Savard Передние весы: ST, S, T1, T2, A, K1 [K2, R1, R2, LL0, LL1, LL2, LL3, C] D, DI, Sh2, Sh3, TH
Задняя шкала (перевернуть слайд): [ LL, LL00, LL01, LL02, LL03, P, L, CI]

Посетите веб-страницу Джона Саварда, веб-сайт с математической структурой, посвященный криптологии, шифрованию и проекциям карт
, а также многим темам по математике, естествознанию, компьютерам и шахматам.

Вершина

---

Весы для создания бревенчатого слайда Правило

Версия B — Джон Дж. Дж. Savard 50-дюймовые весы Дизайн
Передние весы: ST, S, T1, T2, K, A [B, P, M1, M2, M3, M4, M5, C] D, R1, R2, Q1, Q2, Q3
Задняя шкала (Перевернуть слайд): [BI, LL0, LL1, LL2, LL3, L, CF, CI]

Вершина

---

Весы для создания круговой скользящей линейки

Несколько наложений Джона Дж. Дж. Savard Вот 3 круговых правила от Джона, которые используют одно и то же наложение (что делает оба вращающиеся шкалы и курсор) и 3 разных белых тела.Эти варианты предлагают широкий ряд круглых конструкций большого диаметра (8 дюймов). Сделайте базовые изображения на белом материале, или клейкий белый материал, а затем ламинируйте их на подходящую карточку или другой материал. Сделайте прозрачный слой на прозрачном материале и вырежьте курсоры в любой форме, какой захотите. Затем все три элемента закрепляются в центре и фиксируются либо винтом и гайкой, либо другая застежка, и правило готово к использованию. (Это и следующие описания были написаны Уолтером Шоули из Sphere Research)

Примечание: идентификаторы шкалы (A, B, C, S, T и т. Д.) добавляются к каждой шкале на отметках половины интервала (необычный визуальный прием, но очень эффективный). Таким образом, весы идентифицируются независимо от того, где расположена линейка.

	Первый из трех шаблонов для создания фона круговой логарифмической линейки. Это правило общего назначения, за исключением того, что присутствуют гиперболические функции, а логарифмические шкалы опущены. Это странно, но предполагается, что это правило будет использоваться в вместе с шкалой с двумя четырехдесятилетными логарифмическими шкалами, нормальной и обратной, как частью набора.
	Это второй из трех возможных фонов для круговой логарифмической линейки. Этот имеет логарифмическую шкалу для умножение, которое делает пять оборотов по правилу. В отличие от более ранних версий моей круговой логарифмической линейки, я поставил ее достаточно далеко ближе к внешней стороне, чтобы я мог градуировать его по правилу 20 дюймов вместо правила 10 дюймов. Учитывая двоичный Благодаря возможности дизайна наложения, его действительно можно использовать для точного умножения.
	Это третий из трех фонов круговой логарифмической линейки.Он содержит обычные логарифмические и обратные логарифмические шкалы. Шкалы логарифм, но не обратные логарифмические шкалы, градуированы по правилу 20 дюймов, за исключением последнего небольшого отрезка.
	Это тот файл, который нужно напечатать на прозрачном пластике в качестве накладки для семейства из трех круговых слайд-линейок. Обратите внимание на строку курсора на основном диске, а также на шаблоны курсора (для которых границы не указаны). Это позволяет правило для использования как простой, так и обычной логарифмической линейки для комбинаций, включающих одну из шкал на наложении, а также как логарифмическую линейку «бинарного» типа для любой произвольной пары шкал на основании.

Вершина

---

Весы для создания круговой скользящей линейки

Log-Log Version A Чарльз Канкельборг

Вершина

---

Весы для создания круговой линейки Sexton’s Omnimetre c1898

Автор: Уэйн Харрисон, nwharrison [] sympatico [] ca Copyright Январь 2020

Веб-сайт: Правила слайдов Уэйна Харрисона

PDF масштабного шаблона. PDF-файл шаблона курсора
и Инструкции по сборке круговой линейки Secton Omnimetre

Вершина

---

Весы для изготовления цилиндрической линейки Thacher

Автор: Уэйн Харрисон, nwharrison [] sympatico [] ca Авторские права, январь 2002 г.,

Thacher Цилиндрический SR c1910

Пример шкалы Thacher

Thacher Bars, полноразмерные, печать на одном листе 18.5 дюймов x 20 дюймов
Thacher Drum, полноразмерный, печать на одном листе 13,5 x 20 дюймов

Полоски Thacher, размер листа Legal, несколько страниц
Thacher Drum, размер листа Legal, несколько страниц.

Готовый к печати формат Kinko Adobe .KDF Thacher Bars, полноразмерный, печать на одном листе 18,5 «x 20»
Готовый к печати формат Kinko Adobe .KDF Thacher Drum, полноразмерный, печать на одном листе 13,5 «x 20»

Вершина

---

Thacher Пример сборки 1

Дэвид Уайт из Эссекса, штат Массачусетс, построил это прекрасное изображение Тэчера, используя вышеупомянутые весы Тэчера. Нажмите на картинки и в pdf, чтобы увидеть, как ему это удалось. Обращаться: whitey5656 [at] hotmail.com

Вверх

---

Thacher, пример сборки 2

Боб Вулфсон из Мариетты, штат Джорджия, создал еще одну красивую версию Thacher использует вышеуказанные весы Thacher. Контактное лицо: bobwolfson [at] gmail.com

Вершина

---

Построение цилиндрической направляющей линейки Otis King

1.3 МБ POSTSCIPT (.PS) файл 1,4 МБ

Питер Монта сделал этот масштабный лист, используя файл ‘C’ для создания файла postscript с весами Otis King Model L. для установки на жесткую трубку. Указания: Вырежьте детали, используя линии обрезки. Рекомендуется триммер для бумаги, но ножницы можно использовать, если линии обрезки соединены карандашом и линейкой, затем аккуратно прорежьте линию, чтобы карандаш не просвечивал заключительная статья. Оберните нижнюю и верхнюю шкалы в цилиндры и закрепите вдоль шов прозрачным скотчем (хорошо подходит матовая лента 3M Magic).Лента должна проходить с внешней стороны верхней шкалы и с внутренней стороны нижняя шкала, чтобы при выдвижении их было гладкое, скользящее действие между бумагой и бумагой. Убедитесь, что маленькие отметки сохраняют свои равномерное расстояние по шву — зазоры или нахлёстки ухудшат точность правил. Переместите верхнюю шкалу в нижнюю. Нижняя шкала по горизонтали растянут на 1,2 процента, чтобы это произошло (это значение соответствует толщине обычной бумаги для лазерного принтера).Оберните курсор вокруг сборки. Стремитесь к более свободной посадке, чем две основные трубки, затем скотч. Нет вреда в стыке внахлест для этой части, и ее намного проще сделать и отрегулировать. Ставьте или считывайте шкалы прямо сверху, а не под углом. В метка курсора находится немного выше верхней шкалы, поэтому параллакс должен быть исключено для лучшей точности. Инструкции по использованию и многое другое можно найти на http://www.svpal.org/~dickel/OK/OtisKing.html

Верх

---

Масштаб линейки — математика

Примечание: следующее было написано в 1999 году Ясоном Васкевичем.Это очень хорошо пример того, как рассчитываются деления шкалы логарифмической линейки. Вы можете использовать их для создания логарифмической линейки любой длины — Mike

В первом столбце указано название шкалы. Во втором столбце формула, используемая для этой шкалы. Любое упрощение оставлено как упражнение для читателя. Используемое соглашение заключается в том, что R обозначает длина линейки, а # обозначает число на шкале чья позиция вычисляется. Последний столбец содержит примечания о конкретном масштабе.

Вывод весов не всегда был легким, и я здесь не показывал. как это было сделано. По сути, я знал, что все был основан на логарифмах, а затем поиграл, пока не придумал что-то, что сработало. Обычно я начинал довольно близко — это стало в основном игрой с константами. Джейсон.

Масштаб	Формула	Комментарии
А / Б	(R / 2) * журнал (#)	Используется для вычисления квадратов и квадратные корни со шкалой D, используемые для вычислить синус угла с S шкала на логарифмической линейке Мангейма
К / Д	R * журнал (#)	Используется для умножения и деления, а также используется со многими другими гаммами в различные операции
CF / DF	( журнал # — журнал PI) * R если # меньше R, добавьте R	Сложенные весы, используемые как ярлык в умножение и деление
КИ	абс [R * log (10 / #) — R]	Обратная шкала С, часто используется как ярлык в делении
CIF	abs [R * ( log (1 / #) — log (1 / PI))] if # abs [R * ( log (1 / #) — log (1 / PI)) — 25] если #> (10 / PI)	Обратная шкала CF
К	(R / 3) * журнал (#)	Используется со шкалой D для определения кубический или кубический корень из числа
л	# * R	Используется со шкалой D для расчета логарифм журнал 10 (#) числа
LL0	журнал ( вход (#)) * R + 3 * R	Содержит все числа больше или равные к 1.001 и меньше или равно 1,01; эти шкалы (LL0-LL3) используются для логарифмов, корней, и полномочия
LL1	журнал ( вход (#)) * R + 2 * R	Содержит все числа больше или равные до 1,01 и меньше или равно 1,105
LL2	журнал ( вход (#)) * R + R	Содержит все числа больше или равные до 1.105 и меньше или равно e
LL3	журнал ( вход (#)) * R	Содержит все числа больше или равно e
LL / 0	журнал ( вход (1 / #)) * R + 3 * R	Содержит все числа больше или равно e -0.01 и менее или равно e -0,001
LL / 1	журнал ( вход (1 / #)) * R + 2 * R	Содержит все числа больше или равно e -0,1 и меньше или равно e -0,01
LL / 2	журнал ( вход (1 / #)) * R + R	Содержит все числа больше или равно e -1.0 и менее или равно e -0,1
LL / 3	журнал ( вход (1 / #)) * R	Содержит все числа больше или равно e -10,0 и меньше или равно e -1,0
R 1	log (#) * 2 * R	Используется со шкалой D для поиска квадраты и квадратные корни; эти числа больше чем около 3.13 по шкале R 2
R 2	[ журнал (#) * 2 * R] — 25	Используется со шкалой D для поиска квадраты и квадратные корни; эти числа больше чем примерно 3,13 по шкале R 2
S мангейм	(R / 2) * [2 + журнал ( sin (#))]	Используется со шкалой A для вычисления синуса числа или тангенса числа, меньшего, чем 5.7 градусов
S, T	[ журнал (100 * sin (#))] * R	Используется со шкалой C для вычисления синуса или тангенс числа меньше 5,7 градуса
ю.	[ журнал (10 * sin (#))] * R	Используется со шкалой C для вычисления синуса числа больше 5,7 градусов
т	R * журнал [10 * коричневый (#)	Используется со шкалой D для расчета тангенс углов больше 5.7 градусов

авторское право 1999 Джейсон Васкевич — Контактное лицо: waskiewi [at] sendit.nodak.edu

---

Copyright © 2003-2020 International Музей правил слайдов

.