Сколько целевых направлений можно брать одному абитуриенту: Как получить целевое направление в вуз от предприятия, прокуратуры, - Управленческое образование

Содержание

Целевой прием

85. Университет ИТМО устанавливает целевую квоту в соответствии с квотой приема на целевое обучение, установленной Правительством Российской Федерации, органами государственной власти субъектов Российской Федерации, органами местного самоуправления, или количеством мест для приема на целевое обучение, установленным учредителем.

86. При проведении многопрофильного конкурса (в соответствии с пунктом 8 Правил) Университет ИТМО устанавливает целевую квоту в соответствии с максимальной квотой приема на целевое обучение, установленной Правительством Российской Федерации, органами государственной власти субъектов Российской Федерации, органами местного самоуправления, по направлениям подготовки, включенным в конкурс, а в случае установления учредителем количества мест для приема на целевое обучение по одному или нескольким направлениям подготовки, включенным в конкурс, -по согласованию с учредителем.

87. Прием на целевое обучение осуществляется при наличии договора о целевом обучении, заключенного между поступающим и органом или организацией, указанными в части 1 статьи 71.

1 Федерального закона N 273-ФЗ (далее — заказчик целевого обучения), в соответствии с положением о целевом обучении и типовой формой договора о целевом обучении, устанавливаемыми Правительством Российской Федерации.

88. При подаче заявления о приеме на целевое обучение поступающий представляет помимо документов, указанных в пункте 42 Правил, договор о целевом обучении (оригинал договора, или копию договора, заверенную заказчиком целевого обучения, или незаверенную копию договора с предъявлением его оригинала).

Прием на целевое обучение в интересах безопасности государства осуществляется при наличии в организации информации о заключенном договоре о целевом обучении, полученной от соответствующего федерального государственного органа, являющегося заказчиком целевого обучения, и без представления поступающим договора о целевом обучении.

89. В случае если Министерство науки и высшего образования Российской Федерации, детализировало квоту приема на целевое обучение с установлением количества мест по специальностям, направлениям подготовки с указанием заказчиков целевого обучения (далее — детализированная целевая квота), Университет ИТМО проводит отдельный конкурс по каждой детализированной целевой квоте.

Поступающий может участвовать в конкурсах по нескольким детализированным целевым квотам. Участие в конкурсе по каждой детализированной целевой квоте осуществляется в соответствии с договором о целевом обучении с заказчиком (одним из заказчиков) целевого обучения, для которого выделена квота, или в соответствии с имеющейся в организации информацией, указанной в абзаце второго пункта 88 Правил и полученной от федерального государственного органа (одного из органов), для которого выделена квота. В заявлении о согласии на зачисление поступающий указывает, в соответствии с результатами какого конкурса он хочет быть зачисленным.

90. В списке лиц, подавших документы, и в списке поступающих на места в пределах целевой квоты не указываются сведения, относящиеся к приему на целевое обучение в интересах безопасности государства.

91. Зачисление на места в пределах целевой квоты лиц, подготовка которых осуществляется в интересах безопасности государства, оформляется отдельным приказом (приказами), который не подлежит размещению на официальном сайте.

Целевая подготовка

Набор на целевую подготовку в университет проводится на основании Положения о целевой подготовке специалистов, рабочих, служащих и Правил приема лиц для получения высшего образования I ступени.

Количество мест для обучения на условиях целевой подготовки на специальности медицинского профиля выделяется в пределах 50% от контрольных цифр приема за счет средств республиканского бюджета.

Получение образования на условиях целевой подготовки

Целевая подготовка осуществляется для повышения укомплектованности врачебными кадрами регионов республики.

Преимуществами целевой подготовки являются

проходной балл по целевому конкурсу, как правило, ниже такового по общему конкурсу;
абитуриенты, не прошедшие на целевые места по целевому конкурсу, могут участвовать в общем конкурсе, что увеличивает шансы абитуриента на поступление;
распределение после обучения в университете осуществляется в организацию здравоохранения, с которой заключен договор.

В конкурсе на целевое место могут участвовать выпусники учреждений общего среднего, среднего специального и профессионально-технического образования, проживающие в Республике Беларусь.

Право заключения договоров о целевой подготовке делегировано Министерством здравоохранения Республики Беларусь организациям, имеющим потребность в подготовке специалиста под контролем управлений здравоохранения облисполкомов, областных ТПРУП «Фармация», областных центров гигиены, эпидемиологии и общественного здоровья (Приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 17.06.2014 №659 «О внесении изменений и дополнений в приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 13.02.2014 №121»).

Договоры о целевой подготовке специалиста с лицами, претендующими на получение высшего образования I ступени по специальностям «Лечебное дело» и «Педиатрия», должны быть заключены с указанием в договоре конкретной должности на предоставляемом первом месте работы (Приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 26.

03.2014 №295 «О внесении дополнений и изменений в приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 13.02.2014 №121»).

Количество заявлений, подаваемых для участия в конкурсе на целевое место, не ограничивается!

Документы, предоставляемые дополнительно для участия в конкурсе на целевое место

Договор о целевой подготовке (3 экземпляра), оформленный в организации здравоохранения, имеющей потребность в подготовке специалиста.

Для граждан в возрасте до 18 лет (кроме граждан, которые приобрели в установленном порядке дееспособность в полном объеме) необходимо наличие письменного согласия одного из родителей (законного представителя) и документ, удостоверяющий личность родителя (законного представителя).

Заключение/расторжение договора

Граждане, получившие образование на основании договора, направляются на работу и обязаны отработать указанный в договоре срок обязательной работы.

В случае появления вакантных мест для получения образования на условиях целевой подготовки по согласованному решению приемной комиссии учреждения образования и заказчика договоры могут заключаться с гражданами, успешно сдавшими вступительные испытания по таким же предметам в данном или другом учреждении образования, либо эти места передаются на общий конкурс.

Договор считается заключенным с момента подписания его всеми сторонами и действует до окончания срока обязательной работы молодого специалиста, молодого рабочего (служащего).

Договор может быть изменен или расторгнут по соглашению сторон, а также по требованию одной из сторон. Сторона, инициирующая изменение или расторжение договора, обязана письменно уведомить об этом другие стороны с указанием причин и представлением подтверждающих их документов. Договор считается измененным или расторгнутым по соглашению сторон, если стороны в месячный срок со дня получения уведомления письменно выразят свое согласие с его изменением или расторжением. Договор считается измененным или расторгнутым по требованию одной из сторон в месячный срок со дня получения уведомления. Изменение или расторжение договора осуществляется по согласованию с республиканскими органами государственного управления, местными исполнительными и распорядительными органами, в подчинении которых находятся заказчики, в определяемом этими органами порядке.

В период получения образования договор может быть расторгнут при наличии следующих оснований:

установление гражданину, не достигшему 18-летнего возраста, инвалидности;
установление гражданину инвалидности I или II группы;
установление одному из родителей или мужу (жене) гражданина инвалидности I или II группы или инвалидности ребенку гражданина;
возникновение медицинских противопоказаний к работе по получаемой специальности (направлению специальности, специализации) и присваиваемой квалификации;
ликвидация заказчика;

досрочное прекращение образовательных отношений по обстоятельствам, не зависящим от воли гражданина, учреждения образования.

Гражданин, с которым договор расторгнут в период получения образования по указанным основаниям, вправе продолжить обучение в учреждении образования на основании договоров о подготовке специалистов (рабочих, служащих) за счет средств республиканского (местного) бюджета или на платной основе.

Гражданин обязан возместить средства, затраченные государством на его подготовку, в республиканский и (или) местный бюджеты в случае расторжения договора в период получения образования при отсутствии оснований, установленных Правительством.

При наличии в учреждении образования вакантных мест для получения образования на условиях целевой подготовки на эти места могут быть переведены лица, обучающиеся по той же или родственной специальности (направлению специальности), в том числе на платной основе, в данном или другом учреждении образования, по их заявлениям с обязательным заключением договора.

Целевое направление (договор): Как и где его взять и сколько придется отрабатывать?

6.12.2019 KudaPostupat.by Архив (2019г.)

Целевой направление на обучение. Как и где взять его? Что оно дает? Сколько надо отрабатывать? И что нужно, чтобы не отрабатывать после вуза или колледжа?

Целевое направление – это договор о подготовке специалистов между организацией–заказчиком кадров, учреждением образования и самим гражданином.

Для ознакомления образец такого договора можно скачать по ссылке.

Целевое направление позволяет

бесплатно получить профессионально-техническое, среднее специальное, высшее (бакалавриат и магистратура) и послевузовское образование (аспирантура, докторантура).

Процесс регулируется специальным «Положением о целевой подготовке специалистов, рабочих, служащих» Совета Министров Республики Беларусь от 22.06.2011 № 821

Количество мест для приема по целевому договору регулируется ежегодно специальными приказами Министерства образования Республики Беларусь.

Итак, как это происходит?

Предприятия, которым нужны определенные специалисты, подают заявку в местные или республиканские органы государственного управления, в подчинении которых находятся вузы или колледжи, в которых проводится обучение необходимых специалистов.

Важно!

Подавать заявку на целевую подготовку кадров могут как государственные предприятия, так и частные компании.

Органы управления в свою очередь определяют точные цифры целевого набора и доводят их Министерству образования, организациям-заказчикам и учреждениям образования.

Как можно получить целевое направление?

Есть 2 варианта:

Можно просто позвонить в приемную комиссию вуза, куда вы хотите поступить (все телефоны есть в нашем каталоге) и уточнить, от каких фирм или предприятий можно принести им такое направление, чтобы поступить на выбранную вами специальность.

Важно!

Помните, что если вы принесете такое направление от организации, то и работать будете там же! Причем на протяжении всего периода обязательной отработки.

Иногда в приемных комиссиях уже есть вакантные места на целевую подготовку по конкретным специальностям, и вам необходимо просто узнать об этом. Как? Позвоните по телефонам. И если вам повезет, т. е. на вашу специальность есть заказ, то вам останется только реально взвесить все перспективы и принять решение, устраивает ли вас работа в этой организации и проживание в указанном населенном пункте на протяжении всего периода обязательной отработки. Если да, дерзайте.

Какое количество мест выделяется целевикам при приеме на учебу?

В соответствии с новым Указом Президента от 9 января 2017 г. количество мест для получения высшего образования на условиях целевой подготовки специалистов утверждается:

по специальностям учредителями УВО по согласованию с Министерством образования, в том числе по сельскохозяйственным специальностям – до 60% от контрольных цифр приема,
по специальностям профиля образования «Здравоохранение» – до 50 % от контрольных цифр приема,
по иным специальностям – до 40 % от контрольных цифр приема.

Дополнено 24. 02.2021

Подготовлен указ Президента о целевой подготовке, в котором количество мест для целевиков будет изменено:

по сельскохозяйственным специальностям – до 70% от контрольных цифр приема,
по медицинским – до 80%,
по иным – до 50%.

Каковы сроки отработки по целевому направлению?

Сроки отработки следующие:

Если вы будете учиться в УВО (вузе) — не менее пяти лет.
Если вы будете учиться в УО ССО (колледже) — не менее трёх лет.
Если вы будете учиться в УО ПТО (колледже, профлицее) — не менее двух лет.

Важно!

В срок обязательной отработки по желанию выпускника могут быть включены для мужчин — срок военной службы по призыву или в резерве Вооруженных Сил Республики Беларусь, других войсках и воинских формированиях Беларуси, а для женщин – срок декретного отпуска до достижения ребенком возраста трех лет.

Период обучения в магистратуре или аспирантуре не влияет на период отработки.

Что может стать основанием для того, чтобы выпускник-целевик был освобожден от отработки?

Договор о целевой подготовке специалиста может быть расторгнут по следующим причинам:

установление гражданину инвалидности I или II группы;
установление одному из родителей или мужу (жене) гражданина инвалидности I или II группы или инвалидности ребенку гражданина;
возникновение медицинских противопоказаний к работе по получаемой специальности (направлению специальности, специализации) и присваиваемой квалификации;
ликвидация организации-заказчика;
досрочное прекращение образовательных отношений по обстоятельствам, не зависящим от воли гражданина, учреждения образования.
возвращение гражданином учреждению образования средств, затраченных государством на его подготовку, в республиканский и (или) местный бюджеты в порядке, определяемом Правительством Республики Беларусь.

И наконец, что будет, если абитуриент по целевому направлению не пройдет по конкурсу?

Такой абитуриент имеет право участвовать в общем конкурсе для обучения за счет средств бюджета, а также в конкурсе на платное обучение, если это было указано в заявлении при подаче документов.

Пациент-мишень Часто задаваемые вопросы и обзор расчетов Таблица

Получатели награды программы центров здоровья HRSA предоставляют комплексные услуги первичной медико-санитарной помощи почти в 1400 районах обслуживания почти 30 миллионам пациентов ежегодно. В этом документе подробно описывается, как HRSA ежегодно рассчитывает целевые показатели пациентов для этих областей обслуживания в таблице «Обзор расчетов целевых показателей пациентов», а также приводятся часто задаваемые вопросы и ответы.

Расчеты

В чем разница между проекцией пациента и целью пациента?

Прогноз пациента — это количество новых, неповторяющихся пациентов программы Health Center, которых заявитель обязуется обслуживать, как правило, в Форме 1A: Рабочий лист общей информации (заявки на конкурс зон обслуживания (SAC) или New Access Point (NAP)) или в Форме воздействия на пациента (дополнительные заявки на финансирование). Целевой показатель для пациентов – это сумма прогнозов пациентов по выигранным заявкам.

(Добавлено: 08.04.2021)

Что мне следует сделать в ответ на электронное письмо с уведомлением о целевом пациенте в электронном справочнике (EHBs)?

В вашем электронном письме с уведомлением будет указано, запланирована ли ваша организация для выполнения BPR или SAC на 2022 финансовый год.

BPR на 2022 финансовый год (примерно две трети медицинских центров)
Если вы заполняете BPR на 2022 финансовый год, никаких действий не требуется.Однако вы можете просмотреть своего целевого пациента и задать вопросы, связавшись с целевой группой пациентов, используя контактную форму BPHC .

SAC на 2022 финансовый год (примерно треть медицинских центров)
Если вы заполняете SAC на 2022 финансовый год, необходимо принять меры. Директор проекта (PD) и Уполномоченное должностное лицо (AO) должны проверить расчет целевых показателей пациентов, консультируясь при необходимости с руководящим советом или другим персоналом, который разрабатывает, рассматривает и утверждает заявки на участие в программе Health Center, чтобы обеспечить:

Точность проекций приложения, используемых для расчета цели пациента.
Понимание периода измерения и даты достижения.

Если целевое значение пациента и расчет верны, следуйте инструкциям, чтобы подтвердить целевое значение пациента в EHB. Если у вас есть вопросы, свяжитесь с целевой группой пациентов, используя контактную форму BPHC .

(Добавлено: 08.04.2021)

Как HRSA рассчитывает цели для пациентов?

Каждое целевое значение для пациентов включает в себя базовое значение, а также прогнозы пациентов из выигранных заявок на участие в программе Health Center Program для оперативного финансирования.Дополнительные сведения см. в таблице «Обзор расчета целевого показателя пациента».

(Добавлено: 08.04.2021)

Как просмотреть цель пациента в EHB?

Только PD и AO, связанные с грантом Health Center Program (H80) в EHB, могут просматривать целевое значение пациента, включая его расчетные значения (см. таблицу «Обзор расчета целевого значения пациента»). PD и AO могут получить доступ к целевому пациенту по ссылке в электронном письме с уведомлением EHB целевого пациента или в папке грантов H80 через ссылку «Управление целевым пациентом» под заголовком «Другие».

(Добавлено: 08.04.2021)

Настройки

Как настроить цель пациента?

Существует два способа настройки цели пациента, как показано на рисунке ниже. Последствия чрезвычайной ситуации в области общественного здравоохранения, связанные с COVID-19, относятся к категории процессов подачи заявок в SAC. Поднимите любые вопросы или опасения, связанные с любым методом корректировки, с целевой группой пациентов, используя контактную форму BPHC.

Факторы и методы корректировки цели пациента

Процесс подачи заявки в SAC

Уменьшенный объем пациента

Нехватка провайдера

Закрытие сайта

Изменения в контракте или соглашении

Процесс настройки EHB

Нижний выступ пациента, указанный в заявке

Отказ от награды

Правопреемник/слияние/передача

(Добавлено: 08.04.2021)

Как понизить целевое значение пациента через SAC?

Вы можете снизить целевое количество пациентов до 25 процентов в процессе подачи заявки на SAC, сделав прогноз пациента, который составляет не менее 75 процентов целевого количества пациентов в таблице объявлений зоны обслуживания (SAAT).

Если прогноз пациентов, подаваемых в заявку SAC, составляет менее 95 процентов от целевого показателя пациентов, уменьшите федеральный запрос на финансирование в соответствии с таблицей ниже.

Прогноз пациента по сравнению с целевым пациентом (%)	Максимальный запрос на финансирование
95-100% целевого показателя пациента	Без сокращения финансирования
90–94,9% от целевого показателя пациента	0,5% сокращение финансирования
85-89.9% от целевого показателя пациента	1% сокращение финансирования
80–84,9% от целевого показателя пациента	1,5% сокращение финансирования
75-79,9% целевого показателя пациента	2% сокращение финансирования
Менее 75% целевого показателя пациента	Недопустимое приложение

(Добавлено: 08. 04.2021)

Что следует учитывать при создании проекции пациента?

Соответствующие факторы, которые следует учитывать при создании проекции пациента в приложении, могут включать:

Данные о пациентах, клинические и финансовые данные.
Зона обслуживания и потребности целевого населения.
Местные тенденции и тенденции штата (например, изменения в возмещении расходов, перемещение населения).
Текущая цель пациента (не дублировать предполагаемых новых пациентов в приложениях).
Дата достижения (обеспечить реалистичный и достижимый прогноз на календарный год, указанный в каждом NOFO).

Ассоциации первичной медико-санитарной помощи (PCA) могут служить полезным ресурсом для разработки прогнозов пациентов. Дополнительная информация о влиянии прогнозов пациентов на цели пациентов обычно включается в Уведомление о присуждении (NoA) для финансируемых заявок.

(Добавлено: 08.04.2021)

Достижение

Каков период измерения для оценки достижения пациентом цели?

Периодом измерения достижения является календарный год, следующий за датой начала периода производительности SAC. Дата достижения — 31 декабря того же года. HRSA использует отчет Единой системы данных (UDS) (количество обслуженных пациентов) для измерения прогресса и достижения пациентами целевых показателей. Например, для медицинских центров, получивших 3-летний период эффективности в рамках SAC за 2022 финансовый год, периодом измерения является 2023 календарный год, а датой достижения — 31 декабря 2023 года.

(Добавлено: 08.04.2021)

Как HRSA количественно определяет достижение цели пациента?

HRSA не дает количественной оценки достижения целевого показателя пациента. Минимум 75 процентов прогноза пациента, подающего заявку на получение SAC, зависит от права на получение SAC и не связан с достижением пациентом цели.

(Добавлено: 08.04.2021)

Что произойдет, если мой медицинский центр не достигнет цели по количеству пациентов к требуемой дате?

HRSA будет отслеживать прогресс в достижении целевого показателя пациента в течение периода эффективности. Мы осознаем значительное влияние чрезвычайной ситуации в области общественного здравоохранения, вызванной COVID-19, на работу медицинских центров и не ожидаем корректировки финансирования до объявления SAC за 2022 финансовый год на основе прошлых результатов по сравнению с целевыми показателями для пациентов.

(Добавлено: 08.04.2021)

Как HRSA использует цель пациента?

HRSA использует цель пациента для:

Обеспечьте осведомленность пациентов о приверженности каждой области обслуживания.
Поддерживать честную конкуренцию и непрерывное предоставление комплексных услуг первичной медико-санитарной помощи в рамках финансируемых зон обслуживания.
Оцените прогресс медицинского центра в обслуживании количества пациентов, для которых было выделено финансирование. См. вопросы 8-10 для получения дополнительной информации.

(Добавлено: 08.04.2021)

Как целевые показатели пациентов будут вписываться в новую структуру Advancing Health Center Excellence?

HRSA изучает способы более целостного согласования целей для пациентов с работой медицинского центра.

Обзор расчета цели пациента

Если следующий SAC для вашей зоны обслуживания:	SAC 2022 ФГ (награды SAC на 1 год 2021 ФГ)	SAC 2022 финансового года (награды NAP за 2019 финансовый год бывшим LAL с продлением)	(трехлетнее вознаграждение SAC за 2018 финансовый год с продлением)	SAC 2023 ФГ (трехлетнее вознаграждение SAC 2019 ФГ, скоро будет продлено)	SAC 2024 ФГ (трехлетнее вознаграждение SAC 2020 ФГ, скоро будет продлено)	SAC 2024 ФГ (награды SAC за 3 года на 2021 ФГ)
Целевое базовое значение для вашего пациента – это прогноз пациента из:
Plus Проекции пациента из:	FY 2020/2021 SAC/SAC-AA, дополнение	FY 2020/2021 SAC/SAC-AA, дополнение	Цели 2017 финансового года FY 2018 SUD MH Дополнение SAC/ SAC AA к финансовому году 2019/2020/2021 Спутник NAP за 2019 финансовый год IBHS за финансовый год 2019 г.	FY 2018 SUD MH FY 2018/2019/2020/2021 Дополнение SAC/SAC-AA Спутник NAP за 2019 финансовый год IBHS за финансовый год 2019 г.	FY 2019/2020/2021 SAC/SAC Дополнение AA Спутник NAP за 2019 финансовый год IBHS за финансовый год 2019 г.	FY 2020/2021 SAC/SAC-AA, дополнение

(Добавлено: 08.04.2021)

Сокращения

AIMS – Расширение доступа к службам охраны психического здоровья и лечения наркомании (HRSA-17-118)
IBHS – Комплексные услуги по охране психического здоровья (HRSA-19-100)
Двойники программы медицинского центра
NAP — новые точки доступа (HRSA-19-080)
SAC – Конкуренция в зоне обслуживания
SAC-AA — Зона обслуживания соревнований — дополнительные зоны
SUD-MH – Расширение доступа к качественным услугам по лечению расстройств, связанных с употреблением психоактивных веществ, и психиатрическим услугам (HRSA-18-118)

Целевые группы для балансировщиков нагрузки приложений

Каждая целевая группа используется для маршрутизации запросов к одному или нескольким зарегистрированным цели. При создании каждого правила прослушивателя вы указываете целевую группу и условия. Когда выполняется условие правила, трафик направляется в соответствующую целевую группу. Ты сможешь создавать разные целевые группы для разных типов запросов. Например, создать один целевая группа для общих запросов и другие целевые группы для запросов к микросервисам для вашего приложения. Дополнительные сведения см. в разделе Компоненты Application Load Balancer.

Вы определяете параметры проверки работоспособности балансировщика нагрузки для каждой целевой группы.Каждый целевая группа использует настройки проверки работоспособности по умолчанию, если только вы не переопределите их при создайте целевую группу или измените их позже. После указания целевой группы в правиле для прослушивателя балансировщик нагрузки постоянно отслеживает работоспособность всех зарегистрированных целей. с целевой группой, которая находится в зоне доступности, включенной для балансировщика нагрузки. То балансировщик нагрузки направляет запросы зарегистрированным целевым объектам, которые являются работоспособными.

Конфигурация маршрутизации

По умолчанию балансировщик нагрузки направляет запросы к своим целям, используя протокол и порт. номер, который вы указали при создании целевой группы.Кроме того, вы можете переопределить порт, используемый для маршрутизации трафика к цели, когда вы регистрируете его в целевая группа.

Целевые группы поддерживают следующие протоколы и порты:

Протоколы : HTTP, HTTPS
Порты : 1-65535

Если целевая группа настроена на протокол HTTPS или использует проверки работоспособности HTTPS, TLS-соединения с целевыми объектами используют параметры безопасности из ELBSecurityPolicy-2016-08 политика. Балансировщик нагрузки устанавливает TLS соединения с целями с использованием сертификатов, которые вы устанавливаете на цели. То балансировщик нагрузки не проверяет эти сертификаты. Таким образом, вы можете использовать самоподписанный сертификаты или сертификаты с истекшим сроком действия. Поскольку балансировщик нагрузки находится в виртуальное частное облако (VPC), трафик между балансировщиком нагрузки и целевыми объектами аутентифицируется на уровне пакетов, поэтому он не подвержен риску атак «человек посередине» или спуфинг, даже если сертификаты на цели недействительны.

Тип мишени

Когда вы создаете целевую группу, вы указываете ее тип цели, который определяет тип цели, которую вы укажете при регистрации целей в этой целевой группе. После того, как вы создадите целевая группа, вы не можете изменить ее тип цели.

Возможны следующие типы целей:

экземпляр: Цели определяются идентификатором экземпляра.
IP-адрес: Целями являются IP-адреса.
лямбда: Целью является лямбда-функция.

Когда тип цели ip , вы можете указать IP-адреса из одного из следующие блоки CIDR:

Подсети VPC для целевой группы
10.0.0.0/8 (RFC 1918)
100.64.0.0/10 (RFC 6598)
172.16.0.0/12 (RFC 1918)
192.168.0. 0/16 (RFC 1918)

Эти поддерживаемые блоки CIDR позволяют зарегистрировать в целевой группе следующее: Экземпляры ClassicLink, экземпляры в облаке VPC, связанном с VPC балансировщика нагрузки (тот же регион или другой регион), ресурсы AWS, к которым можно обращаться по IP-адресу и порту. (например, базы данных) и локальные ресурсы, связанные с AWS через AWS Direct Connect или VPN-подключение Site-to-Site.

Нельзя указывать публично маршрутизируемые IP-адреса.

Если вы указываете цели с помощью идентификатора экземпляра, трафик направляется к экземплярам с использованием основной частный IP-адрес, указанный в основном сетевом интерфейсе экземпляра. Если вы укажете цели с помощью IP-адресов, вы можете направить трафик на экземпляр с помощью любой частный IP-адрес с одного или нескольких сетевых интерфейсов. Это позволяет несколько приложения на экземпляре для использования одного и того же порта. Каждый сетевой интерфейс может иметь свой собственная группа безопасности.

Если целевой тип вашей целевой группы — лямбда , вы можете зарегистрировать одна лямбда-функция. Когда балансировщик нагрузки получает запрос на Lambda функция, она вызывает функцию Lambda. Дополнительные сведения см. в разделе Функции Lambda как цели.

Тип IP-адреса

При создании новой целевой группы вы можете выбрать тип IP-адреса вашей цели. группа.Это контролирует версию IP, используемую для связи с целями и проверки их состояние здоровья.

Балансировщики нагрузки приложений

поддерживают целевые группы IPv4 и IPv6. По умолчанию выбран IPv4.

Соображения

Все IP-адреса в целевой группе должны иметь один и тот же тип IP-адреса. За Например, вы не можете зарегистрировать цель IPv4 в целевой группе IPv6.
Целевые группы
IPv6 можно использовать только с нагрузкой DualStack . балансиры.
Целевые группы
IPv6 поддерживают только цели типа IP.

Версия протокола

По умолчанию балансировщики нагрузки приложений отправляют запросы целевым объектам, используя HTTP/1.1. Вы можете использовать протокол версия для отправки запросов к целям с использованием HTTP/2 или gRPC.

В следующей таблице приведены результаты для комбинаций протокола запроса и версия протокола целевой группы.

Протокол запроса	Версия протокола	Результат
HTTP/1. 1	HTTP/1.1	Успех
HTTP/2	HTTP/1.1	Успех
гРПЦ	HTTP/1.1	Ошибка
HTTP/1.1	HTTP/2	Ошибка
HTTP/2	HTTP/2	Успех
гРПЦ	HTTP/2	Успех, если цели поддерживают gRPC
HTTP/1.1	гРПЦ	Ошибка
HTTP/2	гРПЦ	Успешно, если запрос POST
гРПЦ	гРПЦ	Успех

Рекомендации по версии протокола gRPC

Единственным поддерживаемым протоколом прослушивания является HTTPS.
Единственным поддерживаемым типом действия для правил прослушивателя является вперед .
Поддерживаются только целевые типы , экземпляр и ip .
Балансировщик нагрузки анализирует запросы gRPC и направляет вызовы gRPC на соответствующие целевые группы в зависимости от пакета, услуги и метода.
Балансировщик нагрузки поддерживает унарную потоковую передачу на стороне клиента, потоковая передача и двунаправленная потоковая передача.
Необходимо указать пользовательский метод проверки работоспособности в формате /package.service/метод .
Необходимо указать коды состояния gRPC для использования при проверке успешного ответ от цели.
Вы не можете использовать лямбда-функции в качестве целей.

Особенности версии протокола HTTP/2

Единственным поддерживаемым протоколом прослушивания является HTTPS.
Единственным поддерживаемым типом действия для правил прослушивателя является вперед .
Поддерживаются только целевые типы , экземпляр и ip .
Балансировщик нагрузки поддерживает потоковую передачу от клиентов. Балансировщик нагрузки не поддержка потоковой передачи на цели.

Зарегистрированные цели

Балансировщик нагрузки служит единой точкой контакта для клиентов и распределяет входящий трафик через его исправные зарегистрированные цели. Вы можете зарегистрировать каждую цель с одной или несколькими целевыми группами.

Если спрос на ваше приложение увеличится, вы можете зарегистрировать дополнительные цели с помощью одного или более целевых групп для удовлетворения спроса. Балансировщик нагрузки начинает маршрутизацию запросы к вновь зарегистрированной цели, как только процесс регистрации завершится и цель проходит первоначальные проверки работоспособности.

Если спрос на ваше приложение снижается или вам нужно обслуживать свои цели, вы можете отмените регистрацию целей из ваших целевых групп.Отмена регистрации цели удаляет ее из вашего целевую группу, но никак иначе не влияет на цель. Балансировщик нагрузки прекращает маршрутизацию запросы к цели, как только ее регистрация будет отменена. Цель входит в сбрасывает состояние до тех пор, пока не будут завершены текущие запросы. Ты сможешь снова зарегистрируйте цель в целевой группе, когда вы будете готовы к ее возобновлению получение запросов.

Если вы регистрируете цели по идентификатору экземпляра, вы можете использовать балансировщик нагрузки с Группа автоматического масштабирования.После того как вы присоедините целевую группу к группе Auto Scaling, Auto Scaling зарегистрирует вашу цели с целевой группой для вас, когда он запускает их. Для получения дополнительной информации см. Подключение балансировщика нагрузки к вашей группы Auto Scaling в Руководстве пользователя Amazon EC2 Auto Scaling .

Пределы

Вы не можете зарегистрировать IP-адреса другого Application Load Balancer в том же VPC.Если другой Application Load Balancer находится в VPC, который связан с VPC балансировщика нагрузки, вы можете зарегистрировать его IP-адреса.

Атрибуты целевой группы

Следующие атрибуты целевой группы поддерживаются, если тип целевой группы экземпляр или ip :

deregistration_delay.таймаут_секунд: Время ожидания Elastic Load Balancing перед отменой регистрации цели. То диапазон 0–3600 секунд. Значение по умолчанию — 300 секунд.
load_balancing.algorithm.type: Алгоритм балансировки нагрузки определяет, как балансировщик нагрузки выбирает цели при маршрутизации запросов.Значение round_robin или наименьших_выданных_запросов . По умолчанию round_robin .
slow_start.duration_seconds: Период времени в секундах, в течение которого балансировщик нагрузки отправляет новый зарегистрированная цель линейно возрастающая доля трафика на цель группа.Диапазон составляет 30–900 секунд (15 минут). По умолчанию 0 секунд (отключено).
липкость включена: Указывает, включены ли закрепленные сеансы. Значение истина или ложь . По умолчанию ложь .
липкость.app_cookie.cookie_name: Имя файла cookie приложения. Имя файла cookie приложения не может имеют следующие префиксы: AWSALB , AWSALBAPP или АВСАЛБТГ ; они зарезервированы для использования нагрузкой балансир.
stickiness.app_cookie.duration_seconds: Срок действия файлов cookie на основе приложения в секундах.После этого период, файл cookie считается устаревшим. Минимальное значение составляет 1 секунду и максимальное значение — 7 дней (604800 секунд). Значение по умолчанию — 1 день. (86400 секунд).
stickiness.lb_cookie.duration_seconds: Срок действия файла cookie на основе продолжительности в секундах. После этого период, файл cookie считается устаревшим.Минимальное значение составляет 1 секунду и максимальное значение — 7 дней (604800 секунд). Значение по умолчанию — 1 день. (86400 секунд).
клейкость.тип: Тип липкости. Возможные значения: lb_cookie и app_cookie .

Следующий атрибут целевой группы поддерживается, если тип целевой группы лямбда :

лямбда.multi_value_headers.enabled: Указывает, обменивались ли заголовки запроса и ответа между балансировщик нагрузки и функция Lambda включают массивы значений или строк. Возможные значения: true или false . По умолчанию значение ложно . Дополнительные сведения см. в разделе Заголовки с несколькими значениями.

Алгоритм маршрутизации

По умолчанию для маршрутизации запросов к адресату используется циклический алгоритм маршрутизации. групповой уровень.Вы можете указать алгоритм маршрутизации наименее ожидающих запросов вместо.

Рассмотрите возможность использования наименее ожидающих запросов, когда запросы для вашего приложения различаются по сложности или ваши цели различаются по возможностям обработки. Круговая система — это хорошо выбор, когда запросы и цели похожи, или если вам нужно распределить запросы поровну среди целей. Вы можете сравнить эффект циклического перебора с наименьшим невыполненных запросов с использованием следующих метрик CloudWatch: RequestCount , TargetConnectionErrorCount , и TargetResponseTime .

Соображения

Вы не можете одновременно включить наименее ожидающие запросы и режим медленного запуска.
Если вы включите фиксированные сеансы, алгоритм маршрутизации целевой группы переопределяется после первоначального выбора цели.
При использовании HTTP/2 балансировщик нагрузки преобразует запрос в несколько HTTP/1.1 запросы, поэтому наименее ожидающий запрос обрабатывает каждый запрос HTTP/2 как несколько Запросы.
При использовании наименее ожидающих запросов с WebSockets цель выбираются с использованием наименее невыполненных запросов. Балансировщик нагрузки создает соединение с этой целью и отправляет все сообщения по этому соединению.

Новая консоль

Чтобы изменить алгоритм маршрутизации с помощью новой консоли

Откройте консоль Amazon EC2 по адресу https://консоль.aws.amazon.com/ec2/.
На панели навигации в разделе БАЛАНСИРОВКА НАГРУЗКИ , выберите Целевые группы .
Выберите имя целевой группы, чтобы открыть ее сведения страница.
На вкладке Сведения о группе в Раздел Атрибуты , выбираем Редактировать .
На странице Редактировать атрибуты для Алгоритм балансировки нагрузки , выберите Круговая система или Наименее выдающийся запросы .
Выберите Сохранить изменения .

Старая консоль

Чтобы изменить алгоритм маршрутизации с помощью старой консоли

Откройте консоль Amazon EC2 по адресу https://консоль.aws.amazon.com/ec2/.
На панели навигации в разделе БАЛАНСИРОВКА НАГРУЗКИ , выберите Целевые группы .
Выберите целевую группу.
На вкладке Описание выберите Редактировать атрибуты .
На странице Редактировать атрибуты для Алгоритм балансировки нагрузки , выберите Круговая система или Наименее выдающийся запросы , а затем выберите Сохранить .

Для изменения алгоритма маршрутизации с помощью интерфейса командной строки AWS

Используйте команду change-target-group-attributes с параметром load_balancing.атрибут algorithm.type .

Задержка отмены регистрации

Elastic Load Balancing прекращает отправку запросов к целевым объектам, регистрация которых отменяется. По умолчанию эластичная балансировка нагрузки ждет 300 секунд, прежде чем завершить процесс отмены регистрации, что может помочь в полете запросы к цели для завершения. Чтобы изменить время ожидания Elastic Load Balancing, обновить значение задержки отмены регистрации.

Исходное состояние цели отмены регистрации: истощающая .После задержка отмены регистрации истекает, процесс отмены регистрации завершается, и состояние цель неиспользуемых . Если цель является частью группы Auto Scaling, ее можно прекращено и заменено.

Если цель отмены регистрации не имеет текущих запросов и активных подключений, Elastic Load Balancing немедленно завершает процесс снятия с учета, не дожидаясь снятия с учета задержка истечет.Однако, несмотря на то, что целевая отмена регистрации завершена, статус цель отображается как слива до истечения времени задержки отмены регистрации истекает. По истечении таймаута цель переходит на неиспользуемый государство.

Если цель отмены регистрации завершает соединение до задержки отмены регистрации истекает, клиент получает ответ об ошибке уровня 500.

Новая консоль

Для обновления значения задержки отмены регистрации с использованием нового console

Откройте консоль Amazon EC2 по адресу https://консоль. aws.amazon.com/ec2/.
На панели навигации в разделе БАЛАНСИРОВКА НАГРУЗКИ , выберите Целевые группы .
Выберите имя целевой группы, чтобы открыть ее сведения страница.
На вкладке Сведения о группе в Раздел Атрибуты , выбираем Редактировать .
На странице Редактировать атрибуты измените значение Задержка отмены регистрации по мере необходимости.
Выберите Сохранить изменения .

Старая консоль

Для обновления значения задержки отмены регистрации с использованием старого console

Откройте консоль Amazon EC2 по адресу https://консоль. aws.amazon.com/ec2/.
На панели навигации в разделе БАЛАНСИРОВКА НАГРУЗКИ , выберите Целевые группы .
Выберите целевую группу.
На вкладке Описание выберите Редактировать атрибуты .
На странице Редактировать атрибуты измените значение Задержка отмены регистрации по мере необходимости, а затем выберите Сохранить .

Чтобы обновить значение задержки отмены регистрации с помощью интерфейса командной строки AWS

Используйте команду change-target-group-attributes с параметром deregistration_delay. атрибут timeout_seconds .

Режим медленного пуска

По умолчанию цель начинает получать всю свою долю запросов, как только она регистрируется в целевой группе и проходит первоначальную проверку здоровья. Использование режима медленного запуска дает целевым объектам время для разогрева, прежде чем балансировщик нагрузки отправит им полную долю Запросы.

После того, как вы включите медленный старт для целевой группы, ее цели перейдут в режим медленного старта, когда целевая группа считает их здоровыми.Цель в режиме медленного старта выходит из режима медленного режим запуска, когда истекает настроенный период продолжительности медленного запуска или цель становится нездоровый. Балансировщик нагрузки линейно увеличивает количество запросов, которые он может отправить к цели в режиме медленного старта. После того, как здоровая цель выходит из режима медленного пуска, нагрузка балансировщик может отправлять ему полную долю запросов.

Соображения

Когда вы включаете медленный старт для группы целей, регистрируются исправные цели с целевой группой не переходите в режим медленного старта.
Когда вы включаете медленный старт для пустой группы целей, а затем регистрируете цели используя одну операцию регистрации, эти цели не входят в режим медленного старта режим. Новые зарегистрированные цели переходят в режим медленного старта только тогда, когда одна здоровая цель, которая не находится в режиме медленного запуска.
Если вы отмените регистрацию цели в режиме медленного запуска, цель выйдет из медленного запуска режим.Если вы снова зарегистрируете ту же цель, она перейдет в режим медленного запуска, когда считается здоровым в целевой группе.
Если цель в режиме медленного запуска становится неработоспособной, цель выходит из медленного запуска режим. Когда цель становится здоровой, она снова переходит в режим медленного запуска.
Нельзя одновременно включить режим медленного запуска и наименее ожидающие запросы.

Новая консоль

Чтобы обновить значение продолжительности медленного запуска с помощью новой консоли

Откройте консоль Amazon EC2 по адресу https://консоль.aws.amazon.com/ec2/.
На панели навигации в разделе БАЛАНСИРОВКА НАГРУЗКИ , выберите Целевые группы .
Выберите имя целевой группы, чтобы открыть ее сведения страница.
На вкладке Сведения о группе в Раздел Атрибуты , выбираем Редактировать .
На странице Редактировать атрибуты измените значение из Продолжительность медленного старта по мере необходимости. Отключить режим медленного запуска, установите продолжительность на 0,
Выберите Сохранить изменения .

Старая консоль

Чтобы обновить значение длительности медленного запуска с помощью старой консоли

Откройте консоль Amazon EC2 по адресу https://консоль. aws.amazon.com/ec2/.
На панели навигации в разделе БАЛАНСИРОВКА НАГРУЗКИ , выберите Целевые группы .
Выберите целевую группу.
На вкладке Описание выберите Редактировать атрибуты .
На странице Редактировать атрибуты измените значение из Продолжительность медленного запуска по мере необходимости, а затем выберите Сохранить . Чтобы отключить режим медленного запуска, установите продолжительность до 0.

Чтобы обновить значение продолжительности медленного запуска с помощью интерфейса командной строки AWS

Используйте команду change-target-group-attributes с параметром медленный_старт. атрибут duration_seconds .

Регистрация целей в целевой группе

Вы регистрируете цели в целевой группе. Когда вы создаете целевую группу, вы укажите его целевой тип, который определяет, как вы регистрируете его цели. Например, вы может регистрировать идентификаторы экземпляров, IP-адреса или функции Lambda. Для получения дополнительной информации см. Целевые группы для ваших балансировщиков нагрузки приложений.

Если спрос на ваши текущие зарегистрированные цели увеличится, вы можете зарегистрировать дополнительные цели для удовлетворения спроса.Когда ваша цель будет готова обрабатывать запросы, зарегистрируйте его в своей целевой группе. Балансировщик нагрузки начинает направлять запросы на цель, как только завершится процесс регистрации и цель пройдет начальный проверки здоровья.

Если спрос на ваши зарегистрированные мишени снижается или вам нужно обслуживать мишень, вы может удалить его из вашей целевой группы. Балансировщик нагрузки прекращает маршрутизацию запросов к target, как только вы отмените регистрацию.Когда цель готова получать запросы, вы может снова зарегистрировать его в целевой группе.

Когда вы отменяете регистрацию целевого объекта, балансировщик нагрузки ожидает, пока выполняющиеся запросы не будут завершенный. Это называется сбросом соединения . Статус цель — слить , в то время как соединение выполняется.

При отмене регистрации цели, которая была зарегистрирована по IP-адресу, необходимо дождаться задержка отмены регистрации, прежде чем вы сможете зарегистрировать тот же IP-адрес снова.

Если вы регистрируете цели по идентификатору экземпляра, вы можете использовать балансировщик нагрузки с Группа автоматического масштабирования. После того, как вы присоедините целевую группу к группе автоматического масштабирования и группа масштабируется, экземпляры, запущенные группой Auto Scaling, автоматически регистрируются в целевом группа. Если вы отсоедините целевую группу от группы Auto Scaling, экземпляры автоматически снимается с регистрации в целевой группе. Дополнительные сведения см. в разделе Подключение балансировщика нагрузки к вашему Группа Auto Scaling в Amazon EC2 Auto Scaling User Guide .

Целевые группы безопасности

При регистрации экземпляров EC2 в качестве целей необходимо убедиться, что безопасность группы для ваших экземпляров позволяют балансировщику нагрузки взаимодействовать с вашими экземплярами как на порту прослушивателя, так и на порту проверки работоспособности.

Входящие
Источник	Диапазон портов	Комментарий
`группа безопасности подсистемы балансировки нагрузки`	`слушатель экземпляра`	Разрешить трафик от балансировщика нагрузки на прослушивателе экземпляра порт
`группа безопасности подсистемы балансировки нагрузки`	`медицинский осмотр`	Разрешить трафик от балансировщика нагрузки при проверке работоспособности порт

Мы также рекомендуем разрешить входящему ICMP-трафику поддержку Path MTU. Открытие.Дополнительные сведения см. в разделе MTU пути. Обнаружение в Руководстве пользователя Amazon EC2 для инстансов Linux .

Зарегистрировать или отменить регистрацию целей

Тип цели вашей целевой группы определяет, как вы регистрируете цели с этой целевая группа. Дополнительные сведения см. в разделе Тип цели.

Регистрация или отмена регистрации целей по экземпляру ID

Экземпляр должен находиться в виртуальном частном облаке (VPC), указанном для целевая группа.Экземпляр также должен находиться в состоянии под управлением . когда вы его зарегистрируете.

Новая консоль

Для регистрации или отмены регистрации целей по идентификатору экземпляра с помощью новая консоль

Откройте консоль Amazon EC2 по адресу https://console. aws.amazon.com/ec2/.
На панели навигации в разделе ЗАГРУЗИТЬ БАЛАНСИРОВКА , выберите цель Группы .
Выберите имя целевой группы, чтобы открыть ее сведения страница.
Выберите вкладку Targets .
Чтобы зарегистрировать экземпляры, выберите Регистрация цели .Выберите один или несколько экземпляров, введите порт экземпляра по умолчанию по мере необходимости, а затем выберите Включить как ожидающие ниже . Когда ты завершили добавление экземпляров, выберите Зарегистрировать ожидающие цели .
Чтобы отменить регистрацию экземпляров, выберите экземпляры, а затем выберите Отменить регистрацию .

Старая консоль

Для регистрации или отмены регистрации целей по идентификатору экземпляра с помощью старая консоль

Откройте консоль Amazon EC2 по адресу https://console.aws.amazon.com/ec2/.
На панели навигации в разделе ЗАГРУЗИТЬ БАЛАНСИРОВКА , выберите цель Группы .
Выберите целевую группу.
На вкладке Targets выберите Редактировать .
Чтобы зарегистрировать экземпляры, выберите их из Экземпляры , изменить значение по умолчанию порт экземпляра по мере необходимости и выберите Добавить в зарегистрирован .
Чтобы отменить регистрацию экземпляров, выберите их из зарегистрированных экземпляров и выберите Удалить .
Выберите Сохранить .

Регистрация или отмена регистрации целей по IP адрес

Адреса IPv4

IP-адреса, которые вы регистрируете, должны быть из одного из следующих CIDR блоков:

Вы не можете зарегистрировать IP-адреса другого Application Load Balancer в том же VPC.Если другой балансировщик нагрузки приложений находится в облаке VPC, равноправном с VPC подсистемы балансировки нагрузки, вы можете зарегистрировать его IP-адреса.

Новая консоль

Чтобы зарегистрировать или отменить регистрацию целей по IP-адресу, используя новый console

Откройте консоль Amazon EC2 по адресу https://консоль. aws.amazon.com/ec2/.
На панели навигации в разделе ЗАГРУЗИТЬ БАЛАНСИРОВКА , выберите цель Группы .
Выберите имя целевой группы, чтобы открыть ее детали страница.
Выберите вкладку Targets .
Чтобы зарегистрировать IP-адреса, выберите Регистрация цели . Для каждого IP-адреса выберите сеть, введите IP-адрес и порт и выберите Включить как ожидающие ниже . Когда ты закончите указывать адреса, выберите Register ожидающие цели .
Чтобы отменить регистрацию IP-адресов, выберите IP-адреса и затем выберите Отменить регистрацию . Если у вас есть много зарегистрированных IP-адресов, вам может быть полезно добавить фильтр или изменить порядок сортировки.

Старая консоль

Чтобы зарегистрировать или отменить регистрацию целей по IP-адресу

Откройте консоль Amazon EC2 по адресу https://консоль.aws.amazon.com/ec2/.
На панели навигации в разделе ЗАГРУЗИТЬ БАЛАНСИРОВКА , выберите цель Группы .
Выберите целевую группу.
На вкладке Targets выберите Редактировать .
Чтобы зарегистрировать IP-адреса, выберите Регистр . значок target (знак плюс) в строке меню. Для каждого IP-адреса выберите сеть, введите IP-адрес и порт и выберите Добавить в список . Когда вы закончили указывать адреса, выберите Регистр .
Чтобы отменить регистрацию IP-адресов, выберите Отмена регистрации целей значок (минус знак) в строке меню. Если у вас много зарегистрированных IP адреса, вам может быть полезно добавить фильтр или изменить порядок сортировки. Выберите IP-адреса, а затем выберите Отменить регистрацию .
Чтобы покинуть этот экран, выберите Вернуться к цели иконка группы (кнопка назад) в меню бар.

Регистрация или отмена регистрации Lambda функция

Вы можете зарегистрировать одну лямбда-функцию для каждой целевой группы.Эластичная балансировка нагрузки должна иметь права на вызов функции Lambda. Если вам больше не нужно отправлять трафик к вашей функции Lambda, вы можете отменить ее регистрацию. После отмены регистрации Лямбда-функция, запросы в процессе выполнения завершаются с ошибками HTTP 5XX. Чтобы заменить Лямбда-функция, вместо этого лучше создать новую целевую группу. Для большего информацию см. в разделе Лямбда-функции как цели.

Новая консоль

Чтобы зарегистрировать или отменить регистрацию лямбда-функции с помощью нового console

Откройте консоль Amazon EC2 по адресу https://консоль.aws.amazon.com/ec2/.
На панели навигации в разделе ЗАГРУЗИТЬ БАЛАНСИРОВКА , выберите цель Группы .
Выберите имя целевой группы, чтобы открыть ее сведения страница.
Выберите вкладку Targets .
Если функция Lambda не зарегистрирована, выберите Регистр . Выберите лямбда и выберите Зарегистрируйте .
Чтобы отменить регистрацию лямбда-функции, выберите Снять с учета .При запросе подтверждения, выберите Отменить регистрацию .

Старая консоль

Чтобы зарегистрировать или отменить регистрацию лямбда-функции, используя старый console

Откройте консоль Amazon EC2 по адресу https://console. aws.amazon.com/ec2/.
На панели навигации в разделе ЗАГРУЗИТЬ БАЛАНСИРОВКА , выберите цель Группы .
Выберите целевую группу и выберите Цели вкладка.
Если функция Lambda не зарегистрирована, выберите Регистр . Выберите лямбда и выберите Зарегистрируйте .
Чтобы отменить регистрацию лямбда-функции, выберите Снять с учета . При запросе подтверждения, выберите Отменить регистрацию .

Зарегистрируйте или отмените регистрацию целей, используя Интерфейс командной строки AWS

Используйте команду register-targets для добавления целей и отмены регистрации целей. команда для удаления целей.

Принципы раннего открытия лекарств

Br J Pharmacol. 2011 март; 162(6): 1239–1249.

JP Hughes

^{1 ¹ Medimmune Inc, Granta Park, Кембридж, Великобритания
S Rees
S Rees
S Rees
² GlaxoSmithKline, Gnernels Wood Road, Stevenage, Hertfordshire, UK
SB Kalindjian
³ King’s College, Guy’s Campus, Лондон, Великобритания
KL Philpott
KL Philpott
^{33 King’s College, Guy’s Campus, Лондон, Великобритания}
¹ Meditimune Inc, Granta Park, Кембридж, Великобритания
² GlaxoSmithKline, Goonnels Wood Road, Stevenage , Хартфордшир, Великобритания
³ Королевский колледж, кампус Гая, Лондон, Великобритания
Поступила в редакцию 2 августа 2010 г . ; Пересмотрено 7 октября 2010 г .; Принято 8 ноября 2010 г.
Copyright British Journal of Pharmacology © 2011 Британское фармакологическое обществоЭта статья цитировалась в других статьях PMC. Abstract
Разработка нового лекарства от первоначальной идеи до запуска готового продукта — сложный процесс, который может занять 12–15 лет и стоить более 1 миллиарда долларов. Идея цели может исходить из различных источников, включая академические и клинические исследования, а также из коммерческого сектора. Может потребоваться много лет, чтобы собрать массу подтверждающих доказательств, прежде чем выбрать цель для дорогостоящей программы открытия новых лекарств.Как только цель выбрана, фармацевтическая промышленность, а в последнее время и некоторые академические центры упростили ряд ранних процессов для идентификации молекул, которые обладают подходящими характеристиками для создания приемлемых лекарств. В этом обзоре будут рассмотрены ключевые доклинические этапы процесса открытия лекарств, от первоначальной идентификации мишени и проверки, через разработку анализа, высокопроизводительный скрининг, идентификацию попаданий, оптимизацию потенциальных клиентов и, наконец, выбор молекулы-кандидата для клинической разработки.
Ключевые слова: поиск лекарств, высокопроизводительный скрининг, идентификация мишеней, валидация мишеней, серия попаданий, разработка тестов, каскад скрининга, оптимизация потенциальных клиентов
Введение
доступные медицинские продукты, и именно эта неудовлетворенная клиническая потребность является основной движущей силой проекта. Первоначальные исследования, часто проводимые в академических кругах, позволяют получить данные для разработки гипотезы о том, что ингибирование или активация белка или пути приводит к терапевтическому эффекту при болезненном состоянии.Результатом этой деятельности является выбор мишени, которая может потребовать дальнейшей проверки перед переходом к фазе поиска потенциальных клиентов, чтобы оправдать усилия по поиску лекарств (1). Во время открытия свинца следует интенсивный поиск, чтобы найти лекарствоподобную малую молекулу или биологическое терапевтическое средство, обычно называемое кандидатом на разработку, которое перейдет в доклиническую, а в случае успеха — в клиническую разработку () и, в конечном итоге, станет коммерческим лекарством.
Процесс обнаружения лекарств от идентификации цели и проверки до регистрации соединения и приблизительные временные рамки для этих процессов.FDA, Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов; IND, Исследовательский новый препарат; NDA, Заявка на новое лекарство.
Обзор скрининговых тестов для открытия новых лекарств.
Идентификация цели
Лекарства не работают в клинике по двум основным причинам; во-первых, они не работают, а во-вторых, они небезопасны. Таким образом, одним из наиболее важных шагов в разработке нового лекарства является идентификация и проверка мишени. Мишень — это широкий термин, который может применяться к целому ряду биологических объектов, которые могут включать, например, белки, гены и РНК.Хорошая мишень должна быть эффективной, безопасной, удовлетворять клинические и коммерческие потребности и, прежде всего, быть «лекарственной». «Лекарственная» мишень доступна для предполагаемой молекулы лекарства, будь то малая молекула или более крупная биологическая молекула, и при связывании вызывает биологический ответ, который можно измерить как in vitro , так и in vivo . В настоящее время известно, что некоторые целевые классы более поддаются открытию низкомолекулярных лекарств, например, рецепторы, связанные с G-белком (GPCR), в то время как антитела хорошо блокируют межбелковые взаимодействия.Хорошая идентификация и валидация мишени обеспечивают повышенную уверенность в связи между мишенью и заболеванием и позволяют нам исследовать, приведет ли модуляция мишени к побочным эффектам, основанным на механизме.
Интеллектуальный анализ доступных биомедицинских данных привел к значительному увеличению идентификации целей. В этом контексте интеллектуальный анализ данных относится к использованию биоинформатического подхода, чтобы не только помочь в идентификации, но и в выборе и приоритизации потенциальных целей заболевания (Янг и др. ., 2009). Доступные данные поступают из различных источников, но включают публикации и патентную информацию, данные об экспрессии генов, данные протеомики, данные о трансгенном фенотипировании и профилировании соединений. Подходы к идентификации также включают исследование уровней мРНК/белка, чтобы определить, экспрессируются ли они при заболевании и коррелируют ли они с обострением или прогрессированием заболевания. Другой эффективный подход заключается в поиске генетических ассоциаций, например, существует ли связь между генетическим полиморфизмом и риском заболевания или прогрессирования заболевания, или является ли полиморфизм функциональным.Например, пациенты с семейной болезнью Альцгеймера (БА) обычно имеют мутации в генах белка-предшественника амилоида или пресенилина, которые приводят к выработке и отложению в головном мозге повышенных количеств пептида Абета, характерного для БА (Bertram and Tanzi, 2008). Существуют также примеры фенотипов у людей, при которых мутации могут аннулировать или сверхактивировать рецептор, например, потенциалзависимый натриевый канал NaV1.7, обе мутации проявляют болевой фенотип, нечувствительность или гиперчувствительность соответственно (Yang et al ., 2004; Cox и др. ., 2006).
Альтернативный подход заключается в использовании фенотипического скрининга для выявления мишеней, связанных с заболеванием. В элегантном эксперименте Куросава и др. . (2008) использовали библиотеку антител фагового дисплея для выделения человеческих моноклональных антител (мАт), которые связываются с поверхностью опухолевых клеток. Клоны подвергали индивидуальному скринингу с помощью иммуноокрашивания, и отбирали те, которые преимущественно и сильно окрашивали злокачественные клетки. Антигены, распознаваемые этими клонами, выделяли иммунопреципитацией и идентифицировали с помощью масс-спектроскопии.Из 2114 mAb с уникальными последовательностями они идентифицировали 21 отличный антиген, экспрессирующийся в высокой степени на нескольких карциномах, некоторые из которых могут быть полезными мишенями для соответствующей терапии карциномы, и несколько mAb, которые могут стать терапевтическими агентами.
Подтверждение цели
После того, как цель идентифицирована, ее нужно полностью отследить. Методы валидации варьируются от инструментов in vitro с использованием моделей целых животных до модуляции желаемой мишени у пациентов с заболеваниями.Хотя каждый подход действителен сам по себе, уверенность в наблюдаемом результате значительно повышается за счет подхода с множественной проверкой (2).
Целевой идентификатор и проверка — многофункциональный процесс. ИГХ, иммуногистохимия.
Антисмысловая технология представляет собой потенциально мощный метод, в котором используются РНК-подобные химически модифицированные олигонуклеотиды, разработанные таким образом, чтобы они комплементарны области целевой молекулы мРНК (Henning and Beste, 2002). Связывание антисмыслового олигонуклеотида с мРНК-мишенью предотвращает связывание механизма трансляции, тем самым блокируя синтез кодируемого белка.Яркий пример силы антисмысловой технологии был продемонстрирован исследователями из Abbott Laboratories, которые разработали антисмысловые зонды для крысиного рецептора P2X3 (Honore et al. ., 2002). При интратекальном мининасосе, чтобы избежать токсичности, связанной с болюсной инъекцией, фосфоротиоатные антисмысловые олигонуклеонуклеотиды P2X3 проявляли выраженную антигипералгезическую активность в модели полного адъюванта Фрейнда, демонстрируя недвусмысленную роль этого рецептора в хронических воспалительных состояниях.Интересно, что после прекращения введения антисмысловых олигонуклеонуклеотидов функция рецепторов и болевые реакции возвращались. Следовательно, в отличие от подхода с нокаутом гена, эффекты антисмысловых олигонуклеотидов обратимы, и для ингибирования белка-мишени требуется постоянное присутствие антисмысловых олигонуклеотидов (Peet, 2003). Однако химия, связанная с созданием олигонуклеотидов, привела к молекулам с ограниченной биодоступностью и выраженной токсичностью, что делает проблематичным их использование in vivo .Это усугубляется неспецифическими действиями, проблемами с контролем этих инструментов и отсутствием разнообразия и разнообразия в выборе подходящих нуклеотидных зондов (Henning and Beste, 2002).
Напротив, трансгенные животные являются привлекательным инструментом проверки, поскольку они включают животных целиком и позволяют наблюдать фенотипические конечные точки для выяснения функциональных последствий манипуляций с генами. В первые дни нацеливания на гены были созданы животные, у которых отсутствовала функция данного гена с самого начала и на протяжении всей их жизни.Эта работа позволила лучше понять in vivo функций широкого спектра генов. Одним из таких примеров является использование мышей с нокаутом P2X7 для подтверждения роли этого ионного канала в развитии и поддержании невропатической и воспалительной боли (Chessell et al. ., 2005). У мышей, лишенных Р2Х7-рецепторов, полностью отсутствует воспалительная и невропатическая гиперчувствительность как к механическим, так и к термическим раздражителям, при сохранении нормальной ноцицептивной обработки. Этих трансгенных животных также использовали для подтверждения механизма действия этой абляции in vivo , поскольку трансгенные мыши были неспособны высвобождать зрелый провоспалительный цитокин IL-1бета из клеток, хотя не было дефицита экспрессии мРНК IL-1бета. Альтернативой генным нокаутам являются генные нокауты, когда неферментативно функционирующий белок заменяет эндогенный белок. Эти животные могут иметь фенотип, отличный от нокаутного, например, когда белок выполняет как структурные, так и ферментативные функции (Abell et al ., 2005), и эти мыши должны якобы более точно имитировать то, что происходит во время лечения лекарствами, то есть , белок присутствует, но функционально ингибирован.
В последнее время возросло желание иметь возможность создавать ограниченные тканями и/или индуцируемые нокауты.Хотя эти подходы технически сложны, наиболее очевидной причиной этого является необходимость преодоления эмбриональной летальности гомозиготных нулевых животных. Другие причины включают избегание компенсаторных механизмов из-за хронического отсутствия функции, кодируемой геном, и избегание фенотипов развития. Однако использование трансгенных животных дорого и требует много времени. Таким образом, чтобы обойти некоторые из этих проблем, использование малых интерферирующих РНК (миРНК) становится все более популярным для проверки цели. Двухцепочечная РНК (дцРНК), специфичная для подавляемого гена, вводится в клетку или организм, где она распознается как экзогенный генетический материал и активирует путь РНКи. Активируется рибонуклеазный белок Dicer, который связывает и расщепляет дцРНК с образованием двухцепочечных фрагментов из 21–25 пар оснований с несколькими выступающими неспаренными основаниями на каждом конце. Эти короткие двухцепочечные фрагменты называются миРНК. Затем эти siRNA разделяют на отдельные нити и интегрируют в активный РНК-индуцированный комплекс молчания (RISC).После интеграции в RISC siRNAs спариваются с их мРНК-мишенью и индуцируют расщепление мРНК, тем самым предотвращая ее использование в качестве матрицы трансляции (rev. Castanotto and Rossi, 2009). Тем не менее, технология RNAi по-прежнему имеет основную проблему доставки в клетку-мишень, но в настоящее время исследуются многие вирусные и невирусные системы доставки (обзор см. Whitehead et al. ., 2009).
Моноклональные антитела являются отличным инструментом проверки мишени, поскольку они взаимодействуют с большей областью поверхности молекулы-мишени, позволяя лучше различать даже близкородственные мишени и часто обеспечивая более высокую аффинность. Напротив, небольшие молекулы имеют недостатки из-за необходимости взаимодействовать с часто более консервативным активным центром мишени, в то время как антитела могут быть выбраны для связывания с уникальными эпитопами. Эта исключительная специфичность является причиной отсутствия у них немеханистической (или «нецелевой») токсичности, что является основным преимуществом перед низкомолекулярными препаратами.
Однако антитела не могут проникать через клеточные мембраны, ограничивая целевой класс в основном клеточной поверхностью и секретируемыми белками. Одним из впечатляющих примеров эффективности mAb in vivo является функция, нейтрализующая антитело против TrkA MNAC13, которое, как было показано, уменьшает как невропатическую боль, так и воспалительную гиперчувствительность (Ugolini et al ., 2007), тем самым вовлекая NGF в инициацию и поддержание хронической боли. Наконец, классическим инструментом проверки мишени является небольшая биоактивная молекула, которая взаимодействует с эффекторными белками и функционально модулирует их.
Совсем недавно появилась химическая геномика, системное применение молекул-инструментов для идентификации и проверки целей. Химическую геномику можно определить как изучение геномных реакций на химические соединения. Целью является быстрая идентификация новых лекарств и мишеней для лекарств с использованием нескольких технологий раннего обнаружения лекарств, начиная от идентификации и проверки мишеней, разработки соединений и химического синтеза и заканчивая биологическими испытаниями.Химическая геномика объединяет химические библиотеки, ориентированные на разнообразие, и клеточные анализы с высоким содержанием информации, а также инструменты информатики и добычи, необходимые для хранения и анализа полученных данных (рассмотрено в Zanders et al. ., 2002). Конечная цель этого подхода — предоставить химические инструменты против каждого белка, кодируемого геномом. Цель состоит в том, чтобы использовать эти инструменты для оценки клеточной функции до полного инвестирования в мишень и проведения кампании по скринингу
Процесс выявления попаданий
процесс открытия лекарств, что разработаны анализы скрининга соединений. Молекула «попадание» может различаться по значению для разных исследователей, но в этом обзоре мы определяем попадание как соединение, которое обладает желаемой активностью при скрининге соединений и активность которого подтверждается при повторном тестировании. Существует множество парадигм скрининга для идентификации хитовых молекул (см. Ресурсы). Высокопроизводительный скрининг (HTS) включает в себя скрининг всей библиотеки соединений непосредственно против целевого лекарственного средства или в более сложной системе анализа, такой как клеточный анализ, активность которого зависит от мишени, но который затем также потребует вторичных анализов. для подтверждения места действия соединений (Fox et al ., 2006). Эта парадигма скрининга включает в себя использование сложной лабораторной автоматизации, но не предполагает предварительного знания природы хемотипа, который, вероятно, будет иметь активность в отношении целевого белка. Целенаправленный или основанный на знаниях скрининг включает в себя выбор из химической библиотеки меньших подмножеств молекул, которые, вероятно, обладают активностью в отношении целевого белка, на основе знаний о целевом белке и литературных или патентных прецедентах для химических классов, которые, вероятно, обладают активностью в отношении целевого лекарственного средства. (Боппана и др. ., 2009). Этот тип знаний недавно дал начало парадигмам раннего открытия с использованием фармакофоров и молекулярного моделирования для проведения виртуальных скринингов баз данных соединений (McInnes, 2007). Скрининг фрагментов включает в себя создание библиотек соединений с очень малой молекулярной массой, которые подвергают скринингу при высоких концентрациях, и, как правило, сопровождается созданием белковых структур, обеспечивающих продвижение соединения (Law et al. ., 2009). Наконец, можно использовать более специализированный сфокусированный подход к скринингу — физиологический скрининг.Это подход, основанный на тканях, и он ищет ответ, более соответствующий конечному желаемому эффекту in vivo , в отличие от нацеливания на один конкретный молекулярный компонент.
Таблица 1
7 Комментарии Комментарии 0 Высокая пропускная способность Большое количество соединений, проанализированных в анализе, как правило, предназначено для проведения в пластинах 384 скважин и выше Крупные коллекции соединений часто находятся в ведении крупных фармацевтических компаний, но небольшие банки соединений также могут находиться в ведении фармацевтических или академических организаций, что может помочь сократить расходы. В настоящее время компании также пытаются охватить широкий спектр химических веществ, используя компьютерный анализ, чтобы уменьшить количество проверяемых соединений. Сфокусированный экран Соединения, ранее идентифицированные как поражающие определенные классы мишеней (например, киназы), и соединения с аналогичной структурой Могут обеспечить более дешевый путь к поиску молекулы-попадателя, но совершенно новые структуры могут быть не обнаружены, и могут быть трудности с получением патентной позиции в хорошо защищенной области интеллектуальной собственности Экранирование фрагментов Замачивание небольших соединений в кристаллы для получения соединений с низкой мМ-активностью, которые затем можно использовать в качестве строительных блоков для более крупных молекул Может соединять выбранные фрагменты вместе вписаться в химическое пространство для повышения потенции. Требуется наличие кристаллической структуры Структурный дизайн лекарств Использование кристаллических структур для облегчения дизайна молекул Часто используется в качестве дополнения к другим стратегиям скрининга в крупной фармацевтике. В этом случае обычно добавляют соединение в кристалл и используют его, чтобы помочь предсказать, где модификации могут быть добавлены для повышения эффективности или селективности структуру белка или, если имеется известный лиганд, в качестве основы для разработки дальнейших соединений на основе Может предоставить исходные структуры для сфокусированного скрининга без необходимости использования дорогостоящих скринингов больших библиотек.Может также использоваться для поиска нового патентного пространства вокруг существующих составных структур Физиологический скрининг Тканевой подход для определения эффектов лекарственного средства на тканевом, а не на клеточном или субклеточном уровне, например, мышечная сократимость Индивидуальные грохоты меньшей пропускной способности. Стремитесь более точно имитировать сложность ткани, а не просто смотреть на отдельные показания. Может обратиться к академическим экспертам в области болезней для скрининга меньшего количества соединений, чтобы получить данные, более релевантные для заболевания с низкой активностью мМ, которые затем можно использовать в качестве строительных блоков для более крупных молекул Использование ЯМР в качестве инструмента определения структуры
Высокопроизводительные и другие скрининги соединений разработаны и запущены для идентификации молекул, которые взаимодействуют с лекарственным средством-мишенью, проводятся химические программы для улучшения активности, селективности и физико-химических свойств молекулы, и продолжают накапливаться данные, подтверждающие гипотезу о том, что воздействие на мишень лекарственного средства будет эффективным при болезненном состоянии.Именно эта серия мероприятий является предметом интенсивной деятельности в фармацевтической промышленности и все чаще в академических кругах для выявления молекул-кандидатов для клинической разработки. Фармацевтические компании создали крупные организации с целью определения целей, сбора коллекций соединений и связанной инфраструктуры для скрининга этих соединений для выявления первоначально попадающих молекул из HTS или других парадигм скрининга и оптимизации этих скрининговых «попаданий» в клинических кандидатов.В последние годы академический сектор проявляет все больший интерес к деятельности, традиционно выполняемой на этапе открытия свинца в фармацевтической промышленности. Академические ученые в настоящее время форматируют тесты для открытия лекарств, которые передаются в академические центры открытия лекарств для скрининга соединений. Эти центры, примером которых является инициатива NIH Roadmap в США (Frearson and Collie, 2009), создали библиотеки соединений, инфраструктуру для скрининга и соответствующий опыт, традиционно имеющийся в промышленном секторе, для скрининга целевых белков для идентификации так называемых химических зондов для использование в целевых исследованиях и исследованиях биологии болезней и во все большей степени для определения химических отправных точек для программ разработки лекарств. Успеху этих усилий способствовала передача навыков между промышленным и академическим секторами.
Типичный критический путь программы на этапе открытия потенциальных клиентов состоит из ряда мероприятий и начинается с разработки биологических тестов, которые будут использоваться для идентификации молекул, обладающих активностью в отношении целевого лекарственного средства. После разработки такие анализы используются для скрининга библиотек соединений для выявления интересующих молекул. Результат скрининга соединений обычно называют хитовой молекулой, которая, как было продемонстрировано, обладает специфической активностью в отношении целевого белка.Результаты скрининга составляют основу программы химии оптимизации свинца для повышения эффективности химического ряда в отношении основного целевого белка лекарственного средства. Во время открытия свинца фазовые молекулы также проверяются в клеточных анализах, предсказывающих состояние болезни, и в животных моделях болезни, чтобы охарактеризовать как эффективность соединения, так и его вероятный профиль безопасности (). В следующих параграфах более подробно описываются требования и применение анализов скрининга соединений при обнаружении попаданий и потенциальных клиентов.
Разработка анализов
В рекомбинантную эру большинство анализов, используемых в промышленности, основаны на создании стабильных клеточных линий млекопитающих, сверхэкспрессирующих интересующую мишень, или на сверхэкспрессии и очистке рекомбинантного белка для установления таковых. называемые биохимическими анализами, хотя в последние годы увеличилось количество сообщений, описывающих использование систем первичных клеток для скрининга соединений (Dunne et al ., 2009). Как правило, клеточные анализы применялись к целевым классам, таким как мембранные рецепторы, ионные каналы и ядерные рецепторы, и, как правило, давали функциональные показания вследствие активности соединения (Michelini et al ., 2010). Напротив, биохимические анализы, которые применялись как к рецепторам, так и к ферментам-мишеням, часто просто измеряют сродство тестируемого соединения к целевому белку. Относительные достоинства биохимических и клеточных анализов широко обсуждались и рассматривались в других источниках (Moore and Rees, 2001). Обе парадигмы анализа были успешно использованы для идентификации хитов и молекул-кандидатов.
Множество форматов анализов поддерживают скрининг соединений.Выбор формата анализа зависит от биологии целевого белка лекарственного средства, инфраструктуры оборудования в принимающей лаборатории, опыта ученых в этой лаборатории, от того, ищется ли молекула ингибитора или активатора, а также от масштаба скрининга соединений. Например, анализы скрининга соединений в GPCR были сконфигурированы для измерения аффинности связывания радио- или флуоресцентно меченого лиганда с рецептором, для измерения замены гуаниновых нуклеотидов на уровне G-белка, для измерения опосредованных соединением изменений в одном из ряд метаболитов вторичных мессенджеров, включая кальций, цАМФ или инозитолфосфаты, или для измерения активации нижестоящих репортерных генов.Какой бы формат анализа ни был выбран, необходимо учитывать следующие факторы:
Фармакологическая значимость анализа. Если возможно, следует провести исследования с использованием известных лигандов, обладающих активностью в отношении изучаемой мишени, чтобы определить, является ли фармакология анализа предиктивной для болезненного состояния, и показать, что анализ способен идентифицировать соединения с желаемой эффективностью и механизмом действия.
Воспроизводимость анализа.В среде скрининга соединений требуется, чтобы анализ воспроизводился на планшетах для анализа, в течение нескольких дней скрининга и, в рамках программы, которая может выполняться в течение нескольких лет, на протяжении всей программы открытия лекарств.
Стоимость анализов. Анализы скрининга соединений обычно проводят в титрационных микропланшетах. В академических кругах или для относительно небольшого количества соединений анализы обычно форматируются в 96-луночных или 384-луночных микротитрационных планшетах, тогда как в промышленности или в приложениях HTS анализы форматируются в 384-луночных или 1536-луночных микропланшетах с небольшими объемами анализа. несколько микролитров.В каждом случае реагенты для анализа и объемы для анализа выбираются таким образом, чтобы минимизировать затраты на анализ.
Качество анализа. Качество анализа обычно определяют по фактору Z’ (Zhang et al. , 1999). Это статистический параметр, который в дополнение к рассмотрению окна сигнала в анализе также учитывает дисперсию как высоких, так и низких сигналов в анализе. Фактор Z стал отраслевым стандартом для измерения качества анализа на основе планшета.Коэффициент Z имеет диапазон от 0 до 1; анализ с Z-фактором более 0,4 считается достаточно надежным для скрининга соединений, хотя многие группы предпочитают работать с анализами с Z-фактором более 0,6. В дополнение к анализу фактора Z качество также контролируется посредством включения фармакологического контроля в каждый анализ. Анализ считается приемлемым, если фармакология стандартного(ых) соединения(й) находится в заданных пределах. Качество анализа зависит от многих факторов.Как правило, высококачественные анализы создаются за счет реализации простых протоколов анализа с несколькими этапами, минимизации этапов промывки или переноса реагентов с планшета на планшет в рамках анализа, за счет использования стабильных реагентов и биологических препаратов, а также за счет обеспечения того, чтобы все инструменты, используемые для выполнения анализа анализ работает оптимально. Обычно это достигается за счет разработки методов контроля качества для всех элементов лабораторной автоматизации (см. http://www.ncgc.nih.gov/guidance/section2.html#replicate-experiment-study-summary-acceptance).
Влияние соединений в анализе. Химические библиотеки обычно хранятся в органических растворителях, таких как этанол или диметилсульфоксид (ДМСО). Таким образом, анализы должны быть сконфигурированы так, чтобы они не были чувствительны к концентрациям растворителей, используемых в анализе. Как правило, клеточные анализы не переносятся при концентрации растворителя более 1% ДМСО, тогда как биохимические анализы можно проводить при концентрации растворителя до 10% ДМСО. Также проводятся исследования для установления частоты ложноотрицательных и ложноположительных результатов в анализе.Если они неприемлемо высоки, то анализ необходимо будет переконфигурировать. Наконец, следует уделить внимание экранирующей концентрации. Анализы скрининга соединений для обнаружения попаданий обычно проводят при концентрации соединения 1–10 мкМ. При этих концентрациях можно идентифицировать соединения с активностью до 40 мкМ. Концентрацию теста можно варьировать, чтобы идентифицировать соединения с более высокой или более низкой активностью.
Одним из примеров технологии HTS, применяемой для идентификации хитовых молекул с активностью в отношении GPCR, является анализ экворина (Stables et al ., 2000). Экворин — чувствительный к кальцию биолюминесцентный белок, клонированный из медузы Aequorea victorea. Были созданы стабильные клеточные линии млекопитающих, трансфицированные для экспрессии лекарственной мишени GPCR и биосенсора экворина. Для рецепторов, способных связываться с гетеротримерными G-белками семейства Gαq/11, активация лиганда приводит к увеличению внутриклеточной концентрации кальция. Когда аэкворин экспрессируется в тех же клетках, это увеличение внутриклеточной концентрации кальция обнаруживается как следствие связывания кальция с фотобелком аэкворина, что в присутствии кофактора целентеразина приводит к генерации вспышки света, которую можно обнаружить. в люминометре на основе титрационного микропланшета, таком как платформа Lumilux™ (PerkinElmer, Уолтем, Массачусетс, США).Анализ аэкворина имеет очень простой протокол и был разработан для HTS в формате 1536-луночных планшетов с объемом анализа 6 мкл и для определения профилей соединений в формате 384-луночных планшетов.
При разработке любого анализа HTS, который может включать скрининг нескольких миллионов молекул в течение нескольких недель, рекомендуется проводить скрининг обучающих наборов соединений, чтобы убедиться, что анализ работает приемлемо. показан скрининг тренировочного набора из 12 000 соединений в отношении рецептора гистамина h2, экспрессируемого в клетках яичника китайского хомячка, в анализе HTS в формате 1536 лунок.Обучающий набор обычно запускается два или три раза, чтобы определить частоту совпадений в анализе, воспроизводимость анализа и частоту ложноположительных и ложноотрицательных совпадений в анализе. Как правило, для определения этих параметров разрабатываются статистические пакеты. При скрининге для обнаружения лигандов-агонистов частота попаданий в анализе экворина обычно составляет менее 0,5% соединений, проверенных с порогом статистического анализа 5% или менее от сигнала агониста, наблюдаемого со стандартным лигандом-агонистом.В этом формате анализа частота ложноположительных и ложноотрицательных результатов очень низка. Для скрининга антагонистов частота совпадений в анализе аэкворина обычно составляет 2–3% соединений, проверенных с отсечкой активности, превышающей 25% ингибирования. Это общее явление для всех скрининговых анализов. Частота совпадений в формате антагониста или ингибитора, как правило, выше, чем частота совпадения в анализах агонистов, поскольку анализы антагонистов, которые определяются путем обнаружения снижения сигнала анализа, также будут обнаруживать соединения, которые мешают генерации сигнала.После завершения тестирования устойчивости анализ переходит в HTS. Во время HTS каждый день проверяется до 200 аналитических планшетов, часто с использованием сложной лабораторной автоматизации. Во время скрининга эффективность анализа измеряется в соответствии с Z’ на планшете для анализа и дисперсией в фармакологии стандартного соединения, при этом планшеты для анализа считаются несостоятельными и подвергаются повторному скринингу, если эти меры контроля качества выходят за установленные пределы ().
Высокопроизводительный скрининг аэкворина: валидационное тестирование анализа антагонистов GPCR (1536 лунок).Валидация анализа скринингового анализа лекарственного средства GPCR для идентификации лигандов агонистов и антагонистов. Клетки, экспрессирующие рецептор гистамина h2 и чувствительный к кальцию фотопротеин экворин, помещали в 1536-луночные планшеты для микротитрования. В общей сложности 12 000 соединений были подвергнуты скринингу в двух повторностях для обнаружения лигандов-агонистов (левая панель) и лигандов-антагонистов (правая панель). В анализе агонистов (левая панель) отсутствие реакции на лекарство представлено красным, реакция на максимальную концентрацию лиганда гистамина — синим, а данные о соединении — желтым. Как обычно наблюдается в анализах агонистов, частота совпадений очень низка из-за отсутствия ложноположительных результатов. В анализе антагониста (правая панель) реакция на гистамин в отсутствие испытуемого соединения представлена красным (базовый ответ), реакция на максимальную концентрацию антагониста гистамина — синим (100% ингибирование), а данные о соединении — желтым. . Как обычно наблюдается в анализе клеточного ингибитора, существует значительный разброс данных о соединении из-за сочетания помех анализа и активности соединения.Истинные активы коррелируют в диапазоне ингибирования от 40% до 100%. Оба анализа имеют отличное значение Z’. GPCR, рецептор, связанный с G-белком.
Контроль качества (КК) при высокопроизводительном скрининге. Чтобы обеспечить контроль данных скрининга в кампаниях по скринингу соединений, каждый планшет для анализа обычно содержит ряд фармакологических контрольных соединений. (A) Каждый 384-луночный планшет содержит 16 лунок с низким контролем и еще 16 лунок с концентрацией EC100 фармакологического стандарта, которые используются для расчета Z’-фактора (ссылка Zhang et al . , 1999). Пластины, у которых коэффициент Z’ ниже 0,4, проходят повторный скрининг. (B) Каждый планшет также содержит 16 лунок с концентрацией EC ₅₀ фармакологического стандарта для контроля дисперсии в анализе (ромбы). (C) Тепловая карта создается для всех планшетов, которые проходят фармакологический стандарт QC, чтобы отслеживать распределение активности по планшету для анализа. Можно было бы ожидать увидеть случайное распределение активности по пластине скрининга. Планшет, такой как представленный, будет неудачным и будет подвергнут повторному скринингу из-за кластеризации активных лунок в центре планшета.
Определение хитовой серии
Библиотеки соединений были собраны таким образом, чтобы содержать молекулы с малой молекулярной массой, которые подчиняются химическим параметрам, таким как правило пяти Липински (Lipinski et al ., 2001), и чаще имеют молекулярную массу менее 400 и clogP (показатель липофильности, который влияет на всасывание в организм) менее 4. Молекулы с такими характеристиками были названы «лекарственными» в знак признания того факта, что большинство продаваемых в клинических условиях лекарств имеют молекулярную массу менее 350 и cLogP менее 3.Крайне важно инициировать программу разработки лекарств с помощью небольшой простой молекулы, так как оптимизация ведущей группы для повышения эффективности и селективности обычно включает увеличение молекулярной массы, что, в свою очередь, может привести к проблемам безопасности и переносимости.
После того, как в результате виртуального скрининга или HTS было получено несколько совпадений, первая задача группы по поиску лекарств — попытаться определить, над какими соединениями лучше всего работать. Этот процесс сортировки очень важен, так как из большой библиотеки у команды, скорее всего, останется много возможных попаданий, которые им нужно будет уменьшить, подтвердить и объединить в серии.Есть несколько шагов для достижения этого. Во-первых, хотя это и стало меньшей проблемой, поскольку качество библиотек улучшилось, соединения, которые, как известно кураторам библиотек, часто используются в кампаниях HTS, должны быть исключены из дальнейшего рассмотрения. Во-вторых, был разработан ряд алгоритмов вычислительной химии для группировки попаданий на основе структурного сходства, чтобы гарантировать, что широкий спектр химических классов представлен в списке соединений. Анализ списка совпадений соединений с использованием этих алгоритмов позволяет выбирать совпадения для прогрессии на основе химического кластера, активности и таких факторов, как эффективность лиганда, что дает представление о том, насколько хорошо соединение связывается для его размера (логарифм активности, деленный на количество «тяжелых» атомы I.е. неводородные атомы в молекуле).
Следующим этапом первоначального процесса уточнения является создание кривых доза-реакция в первичном анализе для каждого попадания, предпочтительно со свежим образцом соединения. Демонстрация нормального соревновательного поведения в ударах имеет важное значение. Соединения, которые дают ответ «все или ничего», действуют необратимо и действительно могут вообще не связываться с белком-мишенью, при этом активность при высоких концентрациях возникает в результате взаимодействия между образцом и другим компонентом системы анализа. Предпочтение отдается обратимым соединениям, поскольку их эффекты легче «вымываются» после отмены препарата, что является важным соображением при использовании у пациентов. Получение кривой доза-реакция позволяет получить половину максимальной ингибирующей концентрации, которая используется для сравнения эффективности соединений-кандидатов. Крайне желательно найти и использовать свежие образцы соединений для этого упражнения. Почти все библиотеки HTS хранятся в виде замороженных растворов ДМСО, в результате чего через некоторое время соединение может деградировать или модифицироваться.Практически любой, кто работал с библиотеками этого типа, слышал анекдоты о том, как сильнодействующая активность исчезала, когда соединение было повторно синтезировано и использовано в повторном тестировании, хотя иногда идентификация сильнодействующих примесей позволяла добиться прогресса.
С надежными кривыми доза-реакция, полученными в первичном анализе для мишени, устанавливается этап для изучения оставшихся попаданий во вторичном анализе, если он доступен, для выбранной мишени. Это не обязательно должен быть анализ в формате с высокой пропускной способностью, но он будет включать изучение влияния соединений на функциональный ответ, например, в анализе вторичных мессенджеров или в биоанализе на основе тканей или клеток.Активность в этих условиях даст уверенность в том, что соединения способны модулировать более интактные системы, а не просто взаимодействовать с изолированным и часто сконструированным белком, используемым в первичном анализе. На протяжении всего процесса подтверждения химики-медики пытались объединить соединения в группы, которые могли бы лечь в основу ведущих рядов. В рамках этого процесса будут рассмотрены свойства каждого кластера, например, существует ли идентифицируемая взаимосвязь структура-активность (SAR), развивающаяся в отношении ряда соединений, то есть идентификация группы соединений, которые имеют некоторое сечение. или общий химический мотив, и добавление различных химических групп к этой основной структуре приводит к разным силам. Будут также рассмотрены вопросы химического синтеза. Таким образом, будут оцениваться простота получения, потенциальная возможность параллельного синтеза и способность генерировать разнообразие из промежуточных продуктов поздних стадий.
При наличии определенных кластеров теперь можно параллельно проводить упражнения по нескольким группам соединений. Этот этап будет включать быстрое создание рудиментарных данных SAR и определение основных элементов структуры, связанных с деятельностью. В то же время репрезентативные образцы каждой из этих мини-серий будут подвергаться различным анализам in vitro , предназначенным для получения важной информации о свойствах абсорбции, распределения, метаболизма и выделения (ADME), а также физико-химических и фармакокинетических ( ПК) измерения (см. ).Профилирование селективности, особенно в отношении типов мишеней, если таковые имеются, для которых первоначально были созданы соединения, также полезно проводить в настоящее время. Например, вы можете захотеть ингибировать киназу X, но избегать киназы Y, чтобы уменьшить нежелательные побочные эффекты in vivo . Это упражнение выявит сильные и слабые стороны каждой серии и позволит принять решение о наиболее перспективной серии соединений, которую следует развивать. Количество серий, продвигаемых на этом этапе, будет зависеть от доступных ресурсов, но в идеале несколько должно быть взято на этап попадания в лидерство, чтобы учесть истощение на следующем этапе.
Таблица 2
Ключ 2
Ключ in vitro Анализы в раннем открытии наркотиков

0
0 Комментарии 0
3 1
Водный растворимость > 100 мкм Важен для проведения анализов in vitro и для in vivo доставки лекарственного средства
Микросомальная стабильность Cl _int <30 мкл·мин ^-1 ·мг ^-1 белок Микросомы печени содержат связанные с мембраной ферменты, метаболизирующие лекарственные средства. Этот анализ измеряет клиренс соединения и может дать представление о том, как быстро он будет выведен
Проницаемость Caco-2 P _app >1 × 10 ⁻⁶ см ⁻¹ (асимметрия <2) всасывание из кишечника
MDR1-MDCK проницаемость P _app >10 × 10 ⁻⁶ см ⁻¹ (асимметрия <2) белок lux effDR1, трансфицированный MCDCK Гликопротеин P (P-gp).Важный переносчик оттока во многих тканях, включая кишечник, почки и головной мозг, P-gp можно использовать для прогнозирования проницаемости кишечника и головного мозга Клетки HepG2 человека могут выступать в качестве суррогата эффектов токсичности на печень человека, что является важной причиной неудачи лекарств в клинике
Цитотоксичность в подходящей клеточной линии Отсутствие эффекта при 50 × IC ₅₀ или EC ₅₀ Уменьшить вероятность клеточной токсичности in vivo
Какой бы ни была парадигма скрининга, результатом фазы обнаружения совпадений программы идентификации ведущих является так называемая «попадающая» молекула, обычно с активностью 100 нМ–5 мкМ на лекарственную мишень. Химическая программа инициирована для улучшения эффективности этой молекулы.
Фаза перехода к лиду
Целью данного этапа работы является уточнение каждой серии попаданий, чтобы попытаться произвести более сильнодействующие и селективные соединения, обладающие ФК-свойствами, достаточными для изучения их эффективности в любых моделях in vivo , которые доступны.
Как правило, работа теперь состоит из интенсивных исследований SAR вокруг каждой основной структуры соединения, при этом проводятся измерения для определения величины активности и селективности каждого соединения.Это необходимо проводить систематически, и там, где известна структурная информация о мишени, можно применять основанные на структуре методы разработки лекарств с использованием молекулярного моделирования и методологий, таких как рентгеновская кристаллография и ЯМР, для более быстрой и целенаправленной разработки SAR. способ. Этот тип активности также часто приводит к открытию новых сайтов связывания на белках-мишенях.
Каскад скрининга в настоящее время, как правило, будет состоять из относительно высокопроизводительного анализа, устанавливающего активность каждой молекулы в отношении молекулярной мишени, вместе с анализами в том же формате для участков, где избирательность может быть известна или, как ожидается, будет проблемой ().Соединение, отвечающее основным критериям на этом этапе, будет передано в дополнительный банк анализов. Они должны включать функциональные исследования более высокого порядка в отношении молекулярной мишени, а также определение того, были ли соединения активны в первичных анализах у разных видов. Анализ HTS обычно проводится на белке, кодируемом последовательностями ДНК человека, но поскольку модели животных используются для проверки активности соединений в моделях заболеваний in vivo , в фармакодинамическом (PD)/PK моделировании и в доклинических исследованиях токсичности, важно иметь данные об активности in vitro на ортологах.Это также особенно важно, поскольку поможет свести к минимуму уровни дозирования в токсикологических исследованиях, которые выбираются на основе кратных фармакологически эффективных доз.
Гипотетический экранирующий каскад. Показаны примеры анализов по каскаду скрининга от высокопроизводительного скрининга (HTS) до отбора кандидатов. ДМПК, фармакокинетика метаболизма лекарственных средств.
На этом этапе внимание также должно быть обращено на более подробное профилирование физико-химических свойств и in vitro ADME свойств, и эта серия исследований проводится параллельно, при этом для оценки выбираются ключевые соединения.Типы анализов, которые следует рассматривать, с мишенями, которые признаны подходящими, показаны на рис.
Оценки растворимости и проницаемости имеют решающее значение для принятия решения о том, может ли соединение быть лекарственным средством, то есть лекарственное вещество часто нуждается в доступе к кровообращению пациента и, следовательно, может вводиться инъекцией или, в более общем случае, должно адсорбироваться в пищеварительном тракте. система. Недостаток того или иного параметра в молекуле иногда можно исправить. Например, стратегии составления рецептур можно использовать для разработки таблетки, которая растворяется в определенной области кишечника при рН, при котором соединение более растворимо.Соединение, не имеющее обоих этих свойств, вряд ли станет лекарством, независимо от того, насколько оно сильнодействующее в первичном скрининговом анализе. Микросомальная стабильность является полезной мерой способности ферментов, метаболизирующих in vivo , модифицировать, а затем удалять соединение. Вместо этого в такого рода исследованиях иногда используются гепатоциты, и они дадут более обширные результаты, но не используются рутинно, поскольку их необходимо регулярно готовить свежими. Ингибирование CYP450 изучается, поскольку, среди прочего, оно является важным предиктором того, может ли новое соединение влиять на метаболизм существующего лекарственного средства, с которым его можно вводить одновременно.
Если одно или несколько из этих свойств далеки от идеальных, то может потребоваться скрининг многих других соединений специально для этих свойств. Каждая программа будет немного отличаться в этом отношении. Например, в одном из недавних проектов по идентификации новых антагонистов GPCR был идентифицирован ряд субмикромолярных хитовых соединений. Основные проблемы, связанные с этими молекулами, заключались в том, что они показали некоторое видообразование с более низким сродством к рецепторам грызунов, общее отсутствие селективности с > 50% ингибированием при 10 мкМ в 30 из 63 GPCR и транспортеры, протестированные в группе перекрестного скрининга, как а также широкую ингибирующую активность CYP450.Считалось, что ряд этих недостатков был связан с общим для всех исходных конструкций характером основания. Модификация основного остатка привела к ряду соединений, которые были столь же активны, как и первоначальные удары по основному рецептору, но были более избирательны в своем действии. Как и во многих других программах, в этой серии были оставлены позади вопросы селективности, связанные с повышением активности основной мишени.
Ключевые соединения, которые начинают соответствовать целевым показателям эффективности и селективности, а также большинству физико-химических и ADME-мишеней, следует оценивать на фармакокинетику у крыс. Здесь обычно стремятся к периоду полувыведения > 60 минут, когда соединение вводят внутривенно, и фракция, превышающая 20%, абсорбируется после перорального приема, хотя иногда разные мишени требуют очень разных фармакокинетических профилей. В крупных фармацевтических компаниях с собственными отделами фармакокинетики метаболизма лекарственных средств (DMPK) могут быть профилированы многочисленные соединения, в то время как в академической среде могут быть средства только для заранее определенного количества этих дорогостоящих исследований. в свинцовой фазе был получен ряд соединений, которые обладали эффективностью в наномолярном диапазоне и благоприятным профилем селективности, за исключением некоторой активности в канале hERG, калиевом потенциалзависимом ионном канале, важном для сердечной функции, и ингибирование которого может вызвать сердечную недостаточность.В идеале для hERG мы стремились к активности более 30 мкМ или, по крайней мере, к 1000-кратной селективности по мишени. Некоторые из этих соединений были исследованы в фармакокинетических исследованиях, и было обнаружено, что они имеют приемлемый период полураспада после внутривенного введения, но низкие уровни в плазме крови были отмечены при пероральном введении крысам. Было сочтено, что некоторые из этих соединений, представляющие собой конец фазы проекта «от попадания к свинцу», хотя и вряд ли будут развиваться сами по себе, способны отвечать на вопросы в моделях заболеваний.Таким образом, соединения вводили внутрибрюшинно, и результаты экспериментов внушали доверие к программе разработки.
Фаза оптимизации свинца
Целью этой заключительной фазы разработки лекарств является сохранение благоприятных свойств соединений свинца при одновременном улучшении недостатков в структуре свинца. Продолжая приведенный выше пример, цель программы теперь состояла в том, чтобы изменить структуру, чтобы свести к минимуму влияние hERG и улучшить абсорбцию соединения.Таким образом, были предприняты более регулярные проверки аффинности hERG и проникновения CACO2, и вскоре были доступны соединения, которые сохраняли свою эффективность и селективность в отношении основной мишени, но имели значительно сниженную аффинность hERG и лучшую очевидную проникающую способность, чем исходные ведущие соединения. При исследовании фармакокинетических свойств у крыс одно из этих соединений с аффинностью 8 нМ к интересующему рецептору имело пероральную биодоступность более 40% у крыс и около 80% у собак.
Соединения на этом этапе могут считаться достигшими первоначальных целей этапа оптимизации ведущего и готовыми к окончательной характеристике, прежде чем они будут объявлены кандидатами на доклинические испытания.На этом этапе исследовательская работа не прекращается. Команда должна продолжать исследования синтетически, чтобы производить потенциальные резервные молекулы на случай, если соединение, проходящее дальнейшую доклиническую или клиническую характеристику, потерпит неудачу, и, что более важно, искать последующие серии.
Этап, на котором выполняются различные элементы, составляющие дальнейшую характеристику, будет варьироваться от компании к компании, и части этого процесса могут быть включены в фазу оптимизации потенциальных клиентов.Однако в целом молекулы необходимо исследовать в моделях генотоксичности, таких как тест Эймса, и в моделях in vivo общего поведения, таких как тест Ирвина. Фармакология высоких доз, исследования фармакокинетики/фармакопеи, линейность дозы и фармакокинетика с повторным дозированием для выявления вызванного лекарством метаболизма и метаболического профилирования должны быть выполнены к концу этой стадии. Также необходимо учитывать вопросы химической стабильности и выбора соли для предполагаемого лекарственного вещества.
Вся информация, собранная о молекуле на этом этапе, позволит подготовить целевой профиль кандидата, который вместе с токсикологическими и химическими аспектами производства и контроля сформирует основу для представления в регулирующие органы, позволяющего начать введение человеку.
Процесс генерации результатов для доклинического отбора кандидатов часто занимает много времени и никоим образом не может считаться рутинной деятельностью. Редко бывают короткие пути, и требуется значительный интеллектуальный вклад от ученых из самых разных дисциплин и с разным опытом. Качество отправной точки от попадания к лиду и опыт доступной команды являются ключевыми факторами, определяющими успешный результат этого этапа работы. Как правило, в рамках отрасли для каждого проекта первоначально может быть проверено от 200 000 до >10 ⁶ соединений, а в ходе последующих программ оптимизации потенциальных клиентов проверяются сотни соединений, чтобы отшлифовать их до одной или двух молекул-кандидатов, обычно из разные химические ряды.В академических кругах скрининги, скорее всего, будут носить сфокусированный характер из-за высокой стоимости экстенсивного HTS или соединений, полученных на основе подхода, основанного на структуре. Только 10% проектов малых молекул в отрасли могут стать кандидатами, потерпев неудачу на нескольких этапах. Они могут включать (i) невозможность настроить надежный анализ; (ii) отсутствие развивающихся хитов, полученных от HTS; (iii) соединения не ведут себя должным образом в анализах вторичной или нативной ткани; (iv) соединения токсичны in vitro или in vivo ; (v) соединения обладают нежелательными побочными эффектами, которые нельзя легко исключить или отделить от способа действия мишени; (vi) невозможность получить хороший профиль фармакокинетики или фармакопеи в соответствии с режимом дозирования, требуемым для человека, например, если требуется таблетка один раз в день, тогда необходимо, чтобы соединение имело период полураспада in vivo , подходящий для достижения этого ; и (vii) неспособность преодолевать гематоэнцефалический барьер для соединений, мишень которых находится в центральной нервной системе. Уровень отсева для белковых терапевтических средств после того, как мишень была идентифицирована, намного ниже из-за меньшей селективности в отношении мишени и предшествующего опыта фармакокинетики некоторых белков, например, антител.
Хотя доклиническая деятельность относительно менее затратна, чем многие процессы, осуществляемые на более поздних стадиях разработки лекарств и клинических испытаний, она сопряжена с достаточно высоким риском и отдалена от финансовой отдачи, что часто затрудняет ее финансирование. Обеспечение прозрачности стоимости каждого этапа/анализа в крупных фармацевтических компаниях может помочь снизить часть их затрат, и есть определенные подвижки в этом направлении, поскольку компании внедряют «биотехнологический» менталитет и подотчетность по затратам.
После того, как кандидат выбран, процент отсева соединений, вступающих в клиническую фазу, также высок, опять же, только один из 10 кандидатов выходит на рынок, но на этом этапе финансовые последствия неудачи намного выше. В отрасли ведутся активные дебаты о том, как повысить вероятность успеха за счет «быстрого и дешевого провала». Как только кандидат достигает клинической стадии, закрыть проект становится все труднее, так как на этом этапе проект становится общеизвестным, и, таким образом, прекращение может повлиять на доверие к компании и стоимость акционеров.Проведение дополнительных исследований до клинической разработки, таких как улучшенные токсикологические скрининги (с использованием неэффективных лекарств для информирования этих анализов), создание прогностических трансляционных моделей, основанных на тщательном понимании болезни, и выявление биомаркеров могут помочь в этом начинании. Именно в этих двух последних областях партнерство между академическими кругами и промышленностью может действительно повысить ценность доклинических исследований и в конечном итоге помочь предоставить пациентам более эффективные лекарства.
Благодарности
Карен Филпотт получает поддержку Совета медицинских исследований и благотворительной организации Guys and St Thomas’ Charity.
С. Баррет Калинджян получает поддержку от фонда Seeding Drug Discovery Wellcome Trust.
Глоссарий
Сокращения
5 MAB
ADME поглощение, распределение, метаболизм и экскрецию
ДМПК метаболизма препарата фармакокинетика
ДМСО диметилсульфоксид
GPCRs G-белка -Последние рецепторы
HTS высокая пропускная способность
MAB
PD
PD Pharmacodynamic
PK PharmacoKinetic
SAR Структурные отношения
Конфликт интересов
Джейн Хьюз работает в MedImmune, Стив Риз работает в GSK, а Карен Филпотт ранее работала в GSK.
Дополнительный материал
Вспомогательная информация: Учебные материалы; Рис. 1–6 в виде слайда PowerPoint.
Ссылки
Abell AN, Rivera-Perez JA, Cuevas BD, Uhlik MT, Sather S, Johnson NL, et al. Удаление активности киназы MEKK4 вызывает дефекты нейруляции и скелетного паттерна у эмбрионов мышей. Мол Селл Биол. 2005; 25:8948–8959. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Bertram L, Tanzi RE. Тридцать лет генетики болезни Альцгеймера: последствия систематических метаанализов.Нат Рев Нейроски. 2008; 9: 768–778. [PubMed] [Google Scholar]
Boppana K, Dubey PK, Jagarlapudi SARP, Vadivelan S, Rambabu G. Идентификация селективных ингибиторов MAO-B на основе знаний с использованием моделей виртуального скрининга на основе фармакофоров и структур. Eur J Med Chem. 2009;44:3584–3590. [PubMed] [Google Scholar]
Castanotto D, Rossi JJ. Обещания и ловушки терапии на основе РНК-интерференции. Природа. 2009; 457:426–433. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Chessell IP, Hatcher JP, Bountra C, Michel AD, Hughes JP, Green P, et al. Разрушение гена пуринорецептора P2X7 устраняет хроническую воспалительную и невропатическую боль. Боль. 2005; 114: 386–396. [PubMed] [Google Scholar]
Cox JJ, Reimann F, Nicholas AK. Каналопатия SCN9A вызывает врожденную неспособность испытывать боль. Природа. 2006; 444: 894–898. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Dunne A, Jowett M, Rees S. Использование первичных клеток в экранах с высокой пропускной способностью. Мет Мол Биол. 2009; 565: 239–257. [PubMed] [Google Scholar]
Fox S, Farr-Jones S, Sopchak L, Boggs A, Nicely AW, Khoury R, et al.Высокопроизводительный скрининг; Актуальная информация о практиках и успехах. J Биол Экран. 2006; 11: 864–869. [PubMed] [Google Scholar]
Frearson JA, Collie IT. HTS и поиск хитов в академических кругах — от химической геномики до открытия лекарств. Наркотиков Дисков сегодня. 2009; 14:1150–1158. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Henning SW, Beste G. Стратегии потери функции при проверке целевого лекарственного средства. Curr Drug Discov. 2002; май: 17–21. [Google Scholar]
Оноре П., Кейдж К., Микуса Дж., Ватт А.Т., Джонстон Дж.Ф., Вятт Дж.Р. и др.Анальгетический профиль интратекального антисмыслового олигонуклеотида P2X3 при хронических воспалительных и нейропатических болевых состояниях. Боль. 2002; 99:11–19. [PubMed] [Google Scholar]
Kurosawa G, Akahori Y, Morita M, Sumitomo M, Sato N, Muramatsu C, et al. Всесторонний скрининг антигенов, сверхэкспрессированных на карциномах, путем выделения человеческих моноклональных антител, которые могут быть терапевтическими. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008;105:7287–7292. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Law R, Barker O, Barker JJ, Hesterkamp T, Godemann R, Andersen O, et al.Многочисленные роли вычислительной химии в разработке лекарств на основе фрагментов. J Comput Aided Mol Des. 2009; 23: 459–473. [PubMed] [Google Scholar]
Липински К.А., Ломбардо Ф., Домини Б.В., Фини П.Дж. Экспериментальные и вычислительные подходы к оценке растворимости и проницаемости в условиях открытия и разработки лекарств. Adv Drug Deliv Rev. 2001; 46:3–26. [PubMed] [Google Scholar]
McInnes C. Стратегии виртуального скрининга при открытии лекарств. Curr Opin Chem Biol. 2007; 11: 494–502.[PubMed] [Google Scholar]
Michelini E, Cevenini L, Mezzanotte L, Coppa A, Roda A. Анализы на основе клеток: стимулирование открытия лекарств. Анальная биохимия. 2010; 397:1–10. [PubMed] [Google Scholar]
Мур К., Рис С. Скрининг на основе клеток и изолированных мишеней: насколько вам повезло? J Биомол Скр. 2001; 6: 69–74. [PubMed] [Google Scholar]
Пит Н.П. Что представляет собой проверка цели? Цели. 2003; 2: 125–127. [Google Scholar]
Stables J, Mattheakis LC, Chang TR, Rees S.Рекомбинантный аэкворин как репортер изменений внутриклеточной концентрации кальция в n-клетках млекопитающих. Мет Энзимол. 2000; 327: 456–471. [PubMed] [Google Scholar]
Уголини Г., Маринелли С., Ковачеуш С., Каттанео А., Павоне Ф. Функция, нейтрализующая антитело против TrkA MNAC13, уменьшает воспалительную и невропатическую боль. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007;104:2985–2990. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Уайтхед К.А., Лангер Р., Андерсон Д.Г. Сбивая барьеры: достижения в доставке миРНК.Nature Rev Drug Discov. 2009; 8: 129–138. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Yang Y, Wang Y, Li S. Мутации в SCN9A, кодирующем альфа-субъединицу натриевого канала, у пациентов с первичной эритермалгией. J Med Genet. 2004; 41: 171–174. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Yang Y, Adelstein SJ, Kassis AI. Целевое обнаружение с помощью подходов интеллектуального анализа данных. Наркотиков Дисков сегодня. 2009; 14: 147–154. [PubMed] [Google Scholar]
Zanders ED, Bailey DS, Dean PM. Зонды для химической геномики по дизайну.Наркотиков Дисков сегодня. 2002; 7: 711–718. [PubMed] [Google Scholar]
Zhang JH, Chung DY, Oldenberg KR. Простой статистический параметр для использования при оценке и валидации высокопроизводительных скрининговых анализов. J Биомол Скр. 1999; 4: 67–73. [PubMed] [Google Scholar]
Целевые и нефункциональные требования — Microsoft Azure Well-Architected Framework
Статья
08.02.2022
12 минут на чтение
Полезна ли эта страница? Полезна ли эта страница?
да Нет
Любая дополнительная обратная связь?
Отзыв будет отправлен в Microsoft: при нажатии кнопки отправки ваш отзыв будет использован для улучшения продуктов и услуг Microsoft.Политика конфиденциальности.
Представлять на рассмотрение
Спасибо.
В этой статье
Целевые и нефункциональные требования, такие как целевые показатели доступности и целевые показатели восстановления , позволяют измерять время безотказной работы и время простоя ваших рабочих нагрузок. Наличие четко определенных целей имеет решающее значение для того, чтобы иметь цель для работы и измерения.В дополнение к этим целям существует множество других требований, которые следует учитывать для повышения требований к надежности и соответствия бизнес-ожиданиям.
Создание отказоустойчивости (восстановление после сбоев) и доступности (работа в работоспособном состоянии без значительных простоев) в ваших приложениях начинается со сбора требований. Например, какое время простоя допустимо? Во сколько потенциальные простои обходятся вашему бизнесу? Каковы требования к доступности вашего клиента? Сколько вы инвестируете в обеспечение высокой доступности вашего приложения? Каков риск по сравнению с затратами?
Ключевые точки
Определите приемлемый уровень времени безотказной работы для ваших рабочих нагрузок.
Определите, как долго рабочие нагрузки могут быть недоступны и сколько данных допустимо потерять во время аварии.
Учитывайте требования к приложениям и платформам данных, чтобы повысить отказоустойчивость и доступность.
Обеспечьте доступность подключения и повысьте надежность с помощью служб Azure.
Оценка общей работоспособности рабочих нагрузок приложений.
Цели доступности
Соглашение об уровне обслуживания (SLA) — это цель доступности, которая представляет собой обязательство в отношении производительности и доступности приложения.Понимание SLA отдельных компонентов в системе необходимо для определения целевых показателей надежности. Знание SLA зависимостей также обеспечит обоснование дополнительных затрат при обеспечении высокой доступности зависимостей и с надлежащими контрактами на поддержку. Цели доступности для любых зависимостей, используемых приложением, должны быть поняты и также должны быть рассмотрены в идеальном соответствии с целями приложения.
Понимание ваших ожиданий доступности жизненно важно для анализа общих операций приложения.Например, если вы стремитесь достичь целевого уровня обслуживания приложения (SLO) 99,999 %, уровень неотъемлемых операционных действий, требуемых приложением, будет намного выше, чем если бы целью был SLO 99,9 %.
Мониторинг и измерение доступности приложений жизненно важны для оценки общего состояния приложений и прогресса в достижении поставленных целей. Убедитесь, что вы измеряете и контролируете ключевые цели, такие как:
Среднее время наработки на отказ (MTBF) — среднее время наработки на отказ определенного компонента.
Среднее время восстановления (MTTR) — среднее время, необходимое для восстановления компонента после сбоя.
Вопросы доступности
Понятны ли SLA/SLO/SLI для всех используемых зависимостей?
Цели доступности для любых зависимостей, используемых приложением, должны быть понятны и идеально согласованы с целями приложения. Убедитесь, что SLA/SLO/SLI для всех задействованных зависимостей понятны.
Было ли рассчитано составное соглашение об уровне обслуживания для приложения и/или ключевых сценариев с использованием соглашений об уровне обслуживания Azure?
Составное соглашение об уровне обслуживания включает сквозное соглашение об уровне обслуживания для всех компонентов приложения и зависимостей. Он рассчитывается с использованием отдельных соглашений об уровне обслуживания для служб Azure, в которых размещаются компоненты приложений, и является важным индикатором запланированной доступности по отношению к ожиданиям и целям клиентов. Убедитесь, что составное соглашение об уровне обслуживания для всех компонентов и зависимостей на критических путях понято. Дополнительные сведения см. в разделе Составные соглашения об уровне обслуживания.
Примечание
Если у вас есть договорные обязательства по соглашению об уровне обслуживания для вашего решения Azure, необходимо сделать дополнительные допуски в дополнение к составному соглашению об уровне обслуживания Azure для компенсации сбоев, вызванных проблемами на уровне кода и развертываниями.Это часто упускается из виду, и клиенты напрямую предлагают составное соглашение об уровне обслуживания своим клиентам.
Учитываются ли целевые показатели доступности, когда система работает в режиме аварийного восстановления?
Цели доступности могут применяться или не применяться при работе в режиме аварийного восстановления. Это зависит от приложения к приложению. Если цели также должны применяться в состоянии сбоя, то следует использовать модель N+1 для достижения большей доступности и отказоустойчивости.В этом сценарии N — это мощность, необходимая для обеспечения требуемой доступности. Это также связано с затратами, поскольку более отказоустойчивая инфраструктура обычно стоит дороже. Это должен принять бизнес.
Каковы последствия невыполнения целевых показателей доступности?
Предусмотрены ли какие-либо штрафы, например, финансовые расходы, связанные с невыполнением обязательств по соглашению об уровне обслуживания? Дополнительные меры могут использоваться для предотвращения штрафов, но это также приводит к дополнительным затратам на эксплуатацию инфраструктуры.Это надо учитывать и оценивать. Следует полностью понимать, каковы последствия невыполнения целевых показателей доступности. Это также сообщит, когда следует инициировать отработку отказа.
Цели восстановления
Цели восстановления определяют, как долго рабочая нагрузка может быть недоступна и сколько данных допустимо потерять во время аварии. Определите целевые отчеты для приложения и ключевых сценариев. Необходимы целевые отчеты: целевое время восстановления (RTO) — максимально допустимое время, в течение которого приложение недоступно после инцидента, и целевое время восстановления (RPO) — максимальная продолжительность потери данных, приемлемая во время аварии.
Цели восстановления — это нефункциональные требования к системе, которые должны определяться бизнес-требованиями. Цели восстановления должны быть определены в соответствии с требуемыми целевыми значениями RTO и RPO для рабочих нагрузок.
Соответствие требованиям платформы приложений
Службы платформы приложений Azure предлагают функции отказоустойчивости для поддержки надежности приложений, хотя они могут быть применимы только для определенного SKU и конфигурации/развертывания. Например, SLA зависит от количества развернутых экземпляров или включенной определенной функции.Рекомендуется просмотреть SLA для используемых служб. Например, номер SKU служебной шины Premium обеспечивает предсказуемую задержку и пропускную способность, чтобы смягчить сценарии шумных соседей. Он также предоставляет возможность автоматического масштабирования и репликации метаданных в другой экземпляр служебной шины для аварийного переключения.
Дополнительные сведения см. в статье SKU Azure Service Bus Premium.
Множественные и парные регионы
При необходимости платформу приложений следует развернуть в нескольких регионах.Покрытие требований с использованием зон дешевле и проще. Региональная изоляция должна быть дополнительной мерой, если соглашения об уровне обслуживания, заданные при настройке нескольких зон в одном регионе, недостаточны или если этого требует географическое распределение пользователей.
Способность реагировать на аварийные сценарии для общей доступности вычислительной платформы и отказоустойчивости приложений зависит от использования нескольких регионов или других мест развертывания.
Используйте парные регионы, которые существуют в одной и той же географии, и предоставьте собственные функции репликации для целей восстановления, такие как асинхронная репликация Geo-Redundant Storage (GRS). В случае планового обслуживания обновления региона будут выполняться только последовательно. Дополнительные сведения см. в статье Непрерывность бизнеса с помощью парных регионов Azure.
Зоны доступности и наборы
Платформенные службы, которые могут использовать зоны доступности, развертываются либо зональным образом в конкретной зоне, либо в конфигурации с избыточностью зоны в нескольких зонах. Дополнительные сведения см. в разделе Создание решений для обеспечения высокой доступности с использованием зон доступности.
Группа доступности (AS) — это логическая конструкция, сообщающая Azure о том, что она должна распределять содержащиеся в ней экземпляры виртуальных машин по нескольким доменам сбоя и обновления в регионе Azure.Зоны доступности (AZ) повышают уровень отказоустойчивости виртуальных машин до физического центра обработки данных, позволяя развертывать экземпляры реплик в нескольких центрах обработки данных в регионе Azure. Хотя зоны обеспечивают большую отказоустойчивость, чем наборы, существуют соображения производительности и стоимости, когда приложения чрезвычайно «болтливы» между зонами, учитывая подразумеваемое физическое разделение и плату за пропускную способность между зонами. В конечном счете, виртуальные машины Azure и службы Azure PaaS, такие как Service Fabric и служба Azure Kubernetes (AKS), которые используют расположенные ниже виртуальные машины, могут использовать AZ или AS для обеспечения отказоустойчивости приложений в регионе.Дополнительные сведения см. в статье Непрерывность бизнеса с отказоустойчивостью данных.
Вопросы доступности
Приложение размещено на 2 или более узлах платформы приложений?
Для обеспечения надежности платформы приложений очень важно, чтобы приложение размещалось как минимум на двух узлах, чтобы исключить единые точки отказа. В идеале для доступности вычислений следует применять модель n+1, где n — количество экземпляров, необходимых для поддержки требований доступности и производительности приложений.
Примечание
Более высокие соглашения об уровне обслуживания, предоставляемые для виртуальных машин и связанных с ними служб платформы, требуют, чтобы по крайней мере два узла реплик были развернуты либо в группе доступности, либо в двух или более зонах доступности. Чтобы узнать больше, см. SLA для виртуальных машин.
Как клиентский трафик направляется в приложение в случае сбоя региона, зоны или сети?
В случае серьезного сбоя клиентский трафик должен быть перенаправлен на развертывания приложений, которые остаются доступными в других регионах или зонах.В конечном счете, именно здесь следует использовать кросс-локальное подключение и глобальную балансировку нагрузки, в зависимости от того, является ли приложение внутренним и/или внешним. Такие службы, как Передняя дверца Azure, Диспетчер трафика Azure или сторонние CDN, могут направлять трафик между регионами на основе работоспособности приложений, запрашиваемой с помощью тестов работоспособности. Дополнительные сведения см. в статье Мониторинг конечных точек диспетчера трафика.
Соответствие требованиям платформы данных
Службы данных и хранилища должны работать в высокодоступной конфигурации/SKU.Службы платформы данных Azure предлагают функции отказоустойчивости для поддержки надежности приложений, хотя они могут быть применимы только к определенному номеру SKU. Примерами являются критически важные для бизнеса SKU базы данных SQL Azure или избыточное хранилище зоны хранения Azure (ZRS) с тремя синхронными репликами, распределенными по зонам доступности.
Согласованность данных
Типы данных следует классифицировать по требованиям согласованности данных. Требования согласованности данных, такие как строгая или возможная согласованность, следует понимать для всех типов данных и использовать для информирования о группировке и категоризации данных, а также о том, какие стратегии репликации/синхронизации данных можно рассматривать для достижения целевых показателей надежности приложений.
Теорема CAP доказывает, что распределенное хранилище данных не может одновременно обеспечивать более двух гарантий:
Непротиворечивость: Каждое чтение получает самую последнюю запись или ошибку.
Доступность: Каждый запрос получает ответ без ошибок, без гарантии, что он содержит самую последнюю запись.
Допуск на разделение: Система продолжает работать, несмотря на произвольное количество транзакций, отброшенных или задержанных сетью между узлами.
Очень важно определить, какие из этих гарантий являются наиболее важными в контексте требований приложения.
Репликация и резервирование
Репликация данных между зонами или парными регионами поддерживает цели доступности приложений, чтобы ограничить влияние сценариев сбоя. Возможность восстановления данных из резервной копии имеет важное значение при восстановлении после повреждения данных, а также при сценариях сбоя. Чтобы обеспечить достаточную избыточность и доступность для зональных и региональных сценариев отказа, резервные копии должны храниться в разных зонах и/или регионах.
Определите и протестируйте процесс восстановления данных, чтобы обеспечить согласованное состояние приложения. Регулярное тестирование процесса восстановления данных способствует совершенствованию работы и уверенности в возможности восстановления данных в соответствии с определенными целями восстановления для приложения.
Подумайте, как трафик вашего приложения направляется к источникам данных в случае сбоя региона, зоны или сети. Понимание метода, используемого для маршрутизации трафика приложений к источникам данных в случае крупного сбоя, имеет решающее значение для определения того, будут ли процессы отработки отказа соответствовать целям восстановления.Многие службы платформы данных Azure предлагают собственные возможности обеспечения надежности для обработки крупных сбоев, например, автоматическая отработка отказа Cosmos DB или активная георепликация базы данных SQL Azure.
Примечание
Некоторые возможности, такие как Azure Storage RA-GRS и Azure SQL DB Active Geo-Replication, требуют отработки отказа на стороне приложения для альтернативных конечных точек в некоторых сценариях сбоя, поэтому логика приложения должна быть разработана для обработки этих сценариев.
Требования к сети и возможности подключения
Примите во внимание эти рекомендации, чтобы обеспечить доступность подключения и повысить надежность служб Azure.
Связь
Используйте глобальный балансировщик нагрузки, используемый для распределения трафика и/или аварийного переключения между регионами. Azure Front Door, Azure Traffic Manager или сторонние службы CDN можно использовать для направления входящих запросов на внешние конечные точки приложений, развернутые в нескольких регионах. Важно отметить, что диспетчер трафика — это балансировщик нагрузки на основе DNS, поэтому отработка отказа должна ждать распространения DNS. Для записей DNS следует использовать достаточно низкое значение TTL (время жизни), хотя не все интернет-провайдеры могут это соблюдать.Для сценариев приложений, требующих прозрачной отработки отказа, следует использовать переднюю дверцу Azure. Дополнительные сведения см. в разделе Аварийное восстановление с использованием Azure Traffic Manager и архитектуры маршрутизации Azure Front Door.
Для межучрежденческого подключения (ExpressRoute или VPN) обеспечьте наличие избыточных подключений из разных мест. Необходимо установить как минимум два избыточных подключения между двумя или более регионами Azure и расположениями пиринга, чтобы исключить единые точки отказа.Конфигурация с разделением нагрузки «активный/активный» обеспечивает разнообразие путей и повышает доступность путей сетевого подключения. Дополнительные сведения см. в разделе Межсетевое подключение.
Смоделируйте путь сбоя, чтобы обеспечить возможность подключения по альтернативным путям. Сбой пути подключения к другим путям подключения должен быть протестирован для проверки возможности подключения и эффективности работы. Использование подключения Site-to-Site VPN в качестве резервного пути для ExpressRoute обеспечивает дополнительный уровень отказоустойчивости сети для подключения между предприятиями.Дополнительные сведения см. в статье Использование VPN типа «сеть — сеть» в качестве резервной копии для частного пиринга ExpressRoute.
Устранение всех единых точек отказа на пути к данным (локально и в Azure). Виртуальные сетевые устройства с одним экземпляром (NVA), независимо от того, развернуты они в Azure или в локальном центре обработки данных, представляют значительный риск для подключения. Узнать больше Дополнительные сведения см. в разделе Развертывание высокодоступных сетевых виртуальных устройств.
Службы с учетом зоны
Используйте виртуальные сетевые шлюзы ExpressRoute/VPN с резервированием зоны.Виртуальные сетевые шлюзы , избыточные для зоны, распределяют экземпляры шлюза по зонам доступности, чтобы повысить надежность и обеспечить доступность во время сценариев сбоев, влияющих на центр обработки данных в регионе. Дополнительные сведения см. в разделе Виртуальные сетевые шлюзы с резервированием зоны.
Если используется, разверните Шлюз приложений Azure версии 2, развернутый в конфигурации с избыточной зоной. Шлюз приложений Azure версии 2 можно развернуть в конфигурации с избыточной зоной для развертывания экземпляров шлюза в разных зонах для повышения надежности и доступности во время сценариев сбоев, влияющих на центр обработки данных в регионе. Дополнительные сведения см. в статье Шлюз приложений версии 2, избыточный для зоны.
Используйте Azure Load Balancer Standard для распределения нагрузки по зонам доступности. Azure Load Balancer Standard учитывает зоны для распределения трафика между зонами доступности. Его также можно настроить в конфигурации с резервированием зоны, чтобы повысить надежность и обеспечить доступность во время сценариев сбоев, влияющих на центр обработки данных в регионе. Дополнительные сведения см. в разделе Standard Load Balancer и Зоны доступности.
Настройте проверки работоспособности для Azure Load Balancer/Azure Application Gateways. Зонды работоспособности позволяют балансировщикам нагрузки Azure оценивать работоспособность серверных конечных точек, чтобы предотвратить отправку трафика в неработоспособные экземпляры. Дополнительные сведения см. в статье Зонды работоспособности Load Balancer.
Оценка важных зависимостей приложений с помощью тестов работоспособности. Пользовательские проверки работоспособности следует использовать для оценки общей работоспособности приложения, включая подчиненные компоненты и зависимые службы, такие как API и хранилища данных, чтобы трафик не направлялся на серверные экземпляры, которые не могут успешно обрабатывать запросы из-за сбоев зависимостей.Дополнительные сведения см. в статье Шаблон мониторинга работоспособности конечной точки.
Следующий шаг
Вернуться к основной статье: Дизайн
Обзор программы заброшенных месторождений Агентства по охране окружающей среды США
Определение заброшенной площадки
С некоторыми юридическими исключениями и дополнениями термин «заброшенная площадка» означает недвижимое имущество, расширение, перепланировка или повторное использование которого может быть осложнено наличием или потенциальным присутствием опасного вещества, загрязнителя или загрязняющего вещества. Очистка и реинвестирование этих объектов защищают окружающую среду, уменьшают вредоносное воздействие и снижают нагрузку на зеленые насаждения и обрабатываемые земли.
Определение можно найти в публичном законе 107-118 (HR 2869), «Законе об освобождении от ответственности малого бизнеса и возрождении заброшенных месторождений», принятом 11 января 2002 г. См. текст закона (PDF) (27 стр., 187). К, О PDF)
Что такое Браунфилд?
Заброшенное месторождение — это недвижимость, расширение, перепланировка или повторное использование которой может быть затруднено из-за наличия или потенциального присутствия опасного вещества, загрязнителя или загрязняющего вещества.По оценкам, в США насчитывается более 450 000 заброшенных участков. Очистка и реинвестирование в эти объекты увеличивает местную налоговую базу, способствует росту рабочих мест, использует существующую инфраструктуру, снижает нагрузку на неосвоенные открытые земли, а также улучшает и защищает окружающую среду. . Узнайте больше о процессе оценки заброшенных участков, типах участков и загрязняющих веществах, зарегистрированных на заброшенных месторождениях, и действиях сообщества по их очистке и повторному использованию.
Каким образом программа Агентства по охране окружающей среды по возрождению заброшенных участков и земель стимулирует очистку и реконструкцию? С момента своего создания в 1995 году программа Агентства по охране окружающей среды США по возрождению заброшенных полей и земель превратилась в проверенную, ориентированную на результат программу, которая изменила способ, которым местные сообщества обращаются с загрязненной собственностью и управляют ею.Сообщества могут узнать больше о процессе очистки и перепланировки в руководстве «Анатомия перепланировки заброшенных полей».
Программа предназначена для расширения возможностей штатов, племен, сообществ и других заинтересованных сторон для совместной работы по предотвращению, оценке, безопасной очистке и устойчивому повторному использованию заброшенных месторождений. Начиная с середины 1990-х годов, EPA предоставило небольшие суммы начального капитала местным органам власти, которые запустили сотни двухлетних пилотных проектов на заброшенных месторождениях и разработали руководства и инструменты, чтобы помочь штатам, сообществам и другим заинтересованным сторонам в очистке и реконструкции заброшенных участков.Закон 2002 года об освобождении от ответственности малого бизнеса и возрождении существующих месторождений систематизировал многие методы, политики и рекомендации EPA. Это расширило помощь EPA, предоставив новые инструменты для государственного и частного секторов для содействия устойчивой очистке и повторному использованию заброшенных месторождений. Закон 2018 года об использовании, инвестициях и местном развитии заброшенных месторождений (BUILD) повторно санкционировал Программу заброшенных месторождений Агентства по охране окружающей среды и санкционировал изменения, которые затрагивают гранты заброшенных месторождений, положения о праве собственности и ответственности, а также программы реагирования штатов и племен.
Гранты Brownfield продолжают служить основой программы EPA для заброшенных месторождений. Эти гранты поддерживают усилия по возрождению путем финансирования мероприятий по экологической оценке, очистке и профессиональному обучению.
Программа Solar Massachusetts Renewable Target (SMART)
Процесс подачи заявления и базовые ставки вознаграждения Процесс подачи заявки на участие в программе SMART, а также то, как соответствующие генерирующие устройства Solar Tariff выдают Свидетельства о квалификации, можно найти в следующем Руководстве. Обновлено в сентябре 2021 г. Обратите внимание, что это руководство находится в стадии разработки и вступает в силу немедленно. Дополнительную информацию см. в Проекте руководства SMART.
Заявление о квалификации Срок резервирования Руководство
Солнечные тарифные генераторы подчиняются определенным правилам размещения и классифицируются в зависимости от землепользования, местоположения и типа установки. Следующее Руководство разъясняет классификацию проектов на основе местоположения, а также количество проектов, которые могут быть квалифицированы на участке или смежных участках. Обновлено в сентябре 2021 г. Обратите внимание, что это руководство находится в стадии разработки и вступает в силу немедленно. Дополнительную информацию см. в Проекте руководства SMART.
Руководство по землепользованию, размещению и сегментации проектов
Базовые ставки вознаграждения за блок мощностей были установлены на основе результатов первоначальной конкурентной закупки в конце 2017 года. Базовые ставки вознаграждения для каждого блока можно найти в следующем руководстве. Обновлено в июне 2020 г.
Блокировка мощности, базовая ставка компенсации и руководство по увеличению ставки компенсации
В некоторых случаях для квалифицированных проектов может потребоваться смешанная ставка.DOER разработал Руководство с изложением случаев, когда это может потребоваться, и как будет рассчитываться ставка. Обновлено в октябре 2020 г.
Руководство по установлению компенсационных ставок SMART
DOER создал Калькулятор стоимости энергии и поощрений для объектов, работающих за счетчиком. Этот калькулятор предназначен для использования в качестве практического инструмента для расчета стоимости энергии и фиксированной ставки поощрительной компенсации для систем, работающих за счетчиком. Расчет основан на типе проекта, размере, территории обслуживания распределительной компании, тарифном классе клиента и блоке мощностей.Эта рабочая книга не обязательно отражает окончательное значение тарифа, на которое система будет претендовать, но предназначена для того, чтобы быть инструментом для понимания и оценки ценности, которую конкретный клиент может получить при различных сценариях.
ПРИМЕЧАНИЕ. Рабочая тетрадь BTM VOE включает VOE для проектов AOBC и Non-Net Metering. В настоящее время DOER и электрораспределительные компании продолжают вносить необходимые коррективы в программу для проектов, подающих заявки на BTM AOBC или Non-Net Metering, и скоро предоставят дополнительную информацию.
Рабочая книга BTM Value of Energy за 2022 год
Дата вступления в силу поощрительного платежа зависит от распределительной компании. Электрораспределительные компании и DOER создали следующий документ, содержащий дополнительные рекомендации. Обновлено в мае 2021 г.
Даты вступления в силу поощрительных выплат SMART
DOER разработал руководство по требованиям к учету для сертифицированных по SMART блоков генерации по тарифу на солнечную энергию, а также для парных систем хранения энергии с общим доступом.
Руководство по хранению и учету энергии
Руководство по приемлемости для SMART Adders
Проекты, которым требуется сумматор для накопления энергии, могут использовать следующие рекомендации для рассмотрения критериев приемлемости, а также могут использовать калькулятор сумматора для накопления энергии в качестве инструмента для оценки значения сумматора, на которое может претендовать определенный проект. Обновлено в сентябре 2021 г.
Руководство по хранению энергии
Сумматор накопления энергии Калькулятор
Шаблон данных о производительности системы накопления энергии
Проекты, которым требуется сумматор для сельскохозяйственной солнечной тарифной единицы (ASTGU), должны подать заявку на получение письма о предварительном определении.При подготовке формы предварительного определения ASTGU настоятельно рекомендуется ознакомиться с информацией и информационными бюллетенями, доступными на веб-сайте UMass Clean Energy Extension (CEE), и связаться с расширением по любым вопросам, касающимся этой информации. Прежде чем отправить окончательную форму предварительного определения в DOER, отправьте черновую версию формы в CEE по адресу [email protected]. CEE рассмотрит документ вместе с персоналом по распространению сельскохозяйственных знаний и ответит заявителю с любыми рекомендациями или комментариями относительно предложенного в течение 10 дней.После того как CEE рассмотрит форму, отправьте заполненную форму в DOER по адресу [email protected]. DOER рассмотрит все запросы в Департаменте сельскохозяйственных ресурсов штата Массачусетс.
Заявление о предварительном заключении АСТГУ
Инструмент анализа градации ASTGU
Веб-семинар, объясняющий, как использовать инструмент анализа затенения
Определение единиц сельскохозяйственного тарифа на солнечную энергию Руководство
Проекты, стремящиеся к сумматору генераторных установок на действующих месторождениях, должны подать заявку на получение письма о предварительном определении от DOER в [email protected]. DOER рассмотрит все запросы в Департаменте охраны окружающей среды; ниже приведены рекомендации по процессу получения письма. Обновлено в мае 2020 г.
Определение действующего руководства
Генераторные установки по тарифу на солнечную энергию, желающие участвовать в программе с низким доходом, совместно используемой солнечной батареей с низким доходом или иметь мощность 25 кВт или менее и низкий доход, могут найти критерии приемлемости в следующем Руководстве. Обновлено в сентябре 2021 г.
Руководящие принципы для малоимущих генерирующих единиц
Единицы по совместному использованию и совместному использованию солнечной энергии с низким уровнем дохода, желающие участвовать в программе муниципального объединения или распределительной компании, могут найти дополнительные требования в следующем Руководстве. Обновлено Сентябрь 2021 г. .
Руководство по альтернативным программам для общинных установок по совместному использованию солнечной энергии и малообеспеченных общинных установок по совместному использованию солнечной энергии
.}


0 0	Комментарии 0 3 1
Водный растворимость	> 100 мкм	Важен для проведения анализов in vitro и для in vivo доставки лекарственного средства
Микросомальная стабильность Cl _int	<30 мкл·мин ^-1 ·мг ^-1 белок	Микросомы печени содержат связанные с мембраной ферменты, метаболизирующие лекарственные средства. Этот анализ измеряет клиренс соединения и может дать представление о том, как быстро он будет выведен
Проницаемость Caco-2 P _app	>1 × 10 ⁻⁶ см ⁻¹ (асимметрия <2) всасывание из кишечника
MDR1-MDCK проницаемость P _app	>10 × 10 ⁻⁶ см ⁻¹ (асимметрия <2)	белок lux effDR1, трансфицированный MCDCK Гликопротеин P (P-gp).Важный переносчик оттока во многих тканях, включая кишечник, почки и головной мозг, P-gp можно использовать для прогнозирования проницаемости кишечника и головного мозга	Клетки HepG2 человека могут выступать в качестве суррогата эффектов токсичности на печень человека, что является важной причиной неудачи лекарств в клинике
Цитотоксичность в подходящей клеточной линии	Отсутствие эффекта при 50 × IC ₅₀ или EC ₅₀	Уменьшить вероятность клеточной токсичности in vivo

ADME	поглощение, распределение, метаболизм и экскрецию
ДМПК	метаболизма препарата фармакокинетика
ДМСО	диметилсульфоксид
GPCRs	G-белка -Последние рецепторы
HTS	высокая пропускная способность
MAB
PD
PD	Pharmacodynamic
PK	PharmacoKinetic
SAR	Структурные отношения