Миэп рф: Абитуриенту

Содержание

Международному институту экономики и права в 2022 году исполняется 30 лет

Три десятилетия – повод для обобщения, анализа достигнутых результатов и подведения итогов в сфере образовательной деятельности Международного института экономики и права.

История МИЭП берёт своё начало в период смены общественно-политической системы Российского государства и перехода всех сфер жизни на рыночные отношения. Международный институт экономики и права был основан в числе первых пяти негосударственных высших учебных заведений России и ведёт образовательную деятельность c 1992 года.

Международный институт экономики и права имеет солидный научный потенциал, лучшие профессорско-преподавательские кадры Москвы и зарубежных преподавателей – партнёров ВУЗа, специалистов в области юриспруденции, экономики, менеджмента, информатики, иностранных языков. В МИЭП обучаются многие тысячи студентов из России, ближнего и дальнего зарубежья. В подготовке специалистов мирового уровня наш институт активно сотрудничает с научными организациями и учебными заведениями многих стран, поддерживает двусторонние контакты с научными и образовательными учреждениями.

МИЭП — один из первых ВУЗов России, которым Федеральная служба по надзору в сфере образования и науки РФ предоставила право на реализацию образовательных программ с использованием дистанционных технологий. Классическое обучение в МИЭП дополнено современными дистанционными технологиями. Нашим студентам, независимо от места их проживания или нахождения, предоставлены постоянный доступ к образовательным ресурсам сайта МИЭП и возможность общения в режиме онлайн с преподавателями кафедр института, расположенного в Москве – в одном из крупнейших мировых научных и вузовских центров. Неоднократно деятельность МИЭП получала высокие оценки профильных министерств и ведомств РФ.

Более 70 000 наших выпускников уверенно реализуют полученные знания на практике, успешно работают как в бизнесе, так и на ответственных государственных постах. По данным кадровых рейтингов, МИЭП входит в число лидеров по трудоустройству выпускников среди вузов Российской Федерации.

Достижения МИЭП стали возможны благодаря эффективной деятельности всего многотысячного коллектива нашего ВУЗа: сотрудников и преподавателей, которые строили историю института с первых лет его существования, и тех, кто гармонично влился в коллектив в последующие годы; благодаря успехам студентов, проходящих обучение в институте и выпускников, окончивших МИЭП и получивших диплом о высшем образовании.

Мы гордимся нашими достижениями и приглашаем для обучения в МИЭП всех желающих получить фундаментальные знания в области юриспруденции, экономики, менеджмента, государственного и муниципального управления!

МИЭП в регионах

Перечень направлений и профилей для Бакалавриата

40.03.01 «Юриспруденция»
с присвоением квалификации БАКАЛАВР.
Профили подготовки:

  • Государственно-правовой;
  • Гражданско-правовой;
  • Уголовно-правовой;
  • Международно-правовой.

38.03.01 «Экономика»
с присвоением квалификации БАКАЛАВР.
Профили подготовки:

  • Финансы и кредит;
  • Экономика предприятий и организаций;
  • Налоги и налогообложение;
  • Бухгалтерский учет, анализ и аудит;
  • Мировая экономика.

38.03.02 «Менеджмент»
с присвоением квалификации БАКАЛАВР.


Профили подготовки:

  • Маркетинг;
  • Управление проектами;
  • Управленческий и финансовый учет;
  • Финансовый менеджмент.

38.03.04 «Государственное и муниципальное управление»
с присвоением квалификации БАКАЛАВР.
Профили подготовки:

  • Муниципальное управление

Перечень направлений и профилей для Магистратуры

*:

38.04.01 «Экономика»
с присвоением квалификации МАГИСТР.

Магистерские программы:
  • Международная экономика.
  • Бухгалтерский учёт, анализ и аудит в коммерческих организациях.
  • Финансовые рынки и институты.

38. 04.02 «Менеджмент»
с присвоением квалификации МАГИСТР.

Магистерские программы:
  • Маркетинг.
  • Финансовый менеджмент.
  • Управление проектами.

* Обучение ведется только в головном институте


Формы обучения

Заочная с применением дистанционных образовательных технологий


Дополнительно

Обучение по двум направлениям: oдновременное освоение двух основных образовательных программ высшего профессионального образования в один срок обучения.

Учебно-материальная база: компьютерный мультимедийный класс; современная учебная литература, периодика и учебно-методические пособия, разработанные профессорско-преподавательским составом МИЭП, электронная библиотека, электронная почта, Интернет.

Дополнительные сведения: обучение ведут высококвалифицированные преподаватели (доктора и кандидаты наук) Москвы.

Тысячи выпускников МИЭП успешно работают в государственных и региональных органах, бизнес структурах.
Среди них:
  • Антонов Сергей Александрович
  • Специалист 2-ой категории департамента администрации в ОАО Банк «БелВэб»
  • Василевич Денис Николаевич
  • Директор Унитарного предприятия «Престиж-Сити»
  • Говор Людмила Леонидовна
  • Экономист компании «Serge»
  • Проневич Владислав Олегович
  • Юрист в Обществе с ограниченной ответственностью «Топомат»
  • Стоян Юрий Владимирович
  • Директор Частного унитарного предприятия «Богема»
  • Пищик Игнатий Владимирович
  • Инспектор ДПС ГАИ, лейтенант Дорожной патрульной службы ГАИ Любанского РОВД Минской области
  • Абдо Ромео Абдо
  • Генеральный директор «БНК Эстейт»
  • Жданович Людмила Чеславовна
  • Ведущий юрисконсульт Государственного учреждения «Республиканский Клинический Медицинский Центр» Управления Делами Президента Республики Беларусь
  • Сазонов Вадим Альбердович
  • Начальник цеха РУП «Белмедпрепараты»
  • Шевчёнок Александр Николаевич
  • Начальник производства ЗАО «БеллаПак»
  • Семёнова Татьяна Владимировна
  • Главный редактор газеты «ЖенСовет»
  • Шафаренко Андрей Владимирович
  • Начальник участка малой механизации РУП РЦТ Управления Делами Президента Республики Беларусь
  • Львова Ольга Евгеньевна
  • Заместитель директора по идеологической работе, Начальник отдела кадров ООО «Фармтехнологии»
  • Ющенко Михаил Васильевич
  • Начальник юридического отдела СП ЗАО «Милавица»
  • Вежновец Константин Николаевич
  • Преподаватель в кинологическом центре Вооруженных сил Республики Беларусь

Вы мечтаете о современном высшем образовании?

Тогда Вам – в Международный институт экономики и права (МИЭП)!

Обучение ведётся по заочной форме, а условия обучения самые что ни на есть подходящие.

Заочное обучение в МИЭП имеет не только свои особенности, но и преимущества перед другими вузами:

  • МИЭП – московский вуз. Студенты, обучающиеся в регионах, являются студентами головного института: в дипломе указывается город Москва.
  • МИЭП имеет лицензию и государственную аккредитацию: выпускные экзамены принимает государственная комиссия, а выпускники получают диплом государственного образца.
  • В МИЭП используется столичный научный потенциал.
  • Студенты МИЭП в своём городе имеют постоянную возможность консультаций с московскими преподавателями.
  • Студенты имеют доступ к электронной библиотеке МИЭП, в которой собрана современная научная и учебная литература, вышедшая в свет в московских издательствах за последние два года. Также обучающимся предоставляются разработанные в МИЭП уникальные авторские учебно-методические пособия по каждой дисциплине.
  • В МИЭП используются самые современные дистанционные технологии. Нашим студентам доступны образовательные ресурсы сайта, интернет-ресурсы, рекомендуемые институтом, текстовые материалы.

Значительная часть студентов МИЭП – люди работающие, поэтому обучение с применением дистанционных технологий позволяет совмещать трудовую жизнь с учёбой.

Обучение с применением дистанционных технологий даёт студентам МИЭП преимущество получать образование, самостоятельно планируя личное время.

Вперёд, в МИЭП!

МИЭП, Международный институт экономики и права — Учёба.ру

Высшее образование онлайн

Федеральный проект дистанционного образования.

Я б в нефтяники пошел!

Пройди тест, узнай свою будущую профессию и как её получить.

Химия и биотехнологии в РТУ МИРЭА

120 лет опыта подготовки

Международный колледж искусств и коммуникаций

МКИК — современный колледж

Английский язык

Совместно с экспертами Wall Street English мы решили рассказать об английском языке так, чтобы его захотелось выучить.

15 правил безопасного поведения в интернете

Простые, но важные правила безопасного поведения в Сети.

Олимпиады для школьников

Перечень, календарь, уровни, льготы.

Первый экономический

Рассказываем о том, чем живёт и как устроен РЭУ имени Г.В. Плеханова.

Билет в Голландию

Участвуй в конкурсе и выиграй поездку в Голландию на обучение в одной из летних школ Университета Радбауд.

Цифровые герои

Они создают интернет-сервисы, социальные сети, игры и приложения, которыми ежедневно пользуются миллионы людей во всём мире.

Работа будущего

Как новые технологии, научные открытия и инновации изменят ландшафт на рынке труда в ближайшие 20-30 лет

Профессии мечты

Совместно с центром онлайн-обучения Фоксфорд мы решили узнать у школьников, кем они мечтают стать и куда планируют поступать.

Экономическое образование

О том, что собой представляет современная экономика, и какие карьерные перспективы открываются перед будущими экономистами.

Гуманитарная сфера

Разговариваем с экспертами о важности гуманитарного образования и областях его применения на практике.

Молодые инженеры

Инженерные специальности становятся всё более востребованными и перспективными.

Табель о рангах

Что такое гражданская служба, кто такие госслужащие и какое образование является хорошим стартом для будущих чиновников.

Карьера в нефтехимии

Нефтехимия — это инновации, реальное производство продукции, которая есть в каждом доме.

Международный институт энергетической политики и дипломатии

Информация

English version

Международный институт энергетической политики и дипломатии (МИЭП) МГИМО МИД России — единственный в России и мире учебный центр, осуществляющий подготовку уникальных востребованных специалистов в области энергетической дипломатии и геополитики, развития инновационной и цифровой экономики, международного сотрудничества.

Особенности подготовки кадров в МИЭП МГИМО:

  • сочетание фундаментального образования в сфере международных отношений, мировой экономики, международного права, менеджмента, финансов, связей с общественностью и практико-ориентированной подготовки в области энергетической дипломатии и геополитики, международного сотрудничества, развития инновационной и цифровой экономики;
  • эффективная профессионально ориентированная подготовка в партнерстве с ведущими корпорациями «Роснефть», «Транснефть», «Норильский никель», Газпромбанк и др.;
  • мастер-классы руководителей компаний, ведущих российских и мировых экспертов, практики и стажировки в ключевых государственных и международных структурах, ведущих корпорациях мира;
  • углубленная специализированная языковая подготовка в области энергетической дипломатии и геополитики для работы в иноязычной профессиональной среде, возможность изучения 53 иностранных языков;
  • международные магистерские программы двух дипломов и программы МВА, реализуемые в партнерстве с ведущими университетами и бизнес-школами Великобритании, Германии, Италии, Норвегии;
  • участие студентов в международных форумах, конференциях совместно с ООН, ОПЕК, МАГАТЭ и др. ;
  • активное участие студентов в выполнении аналитических проектов на базе Центра стратегических исследований в области энергетики и цифровой экономики МИЭП МГИМО совместно с ведущими учеными Российской академии наук, международными организациями, по заказам крупных компаний и государственных структур.
Образовательные программы Международного института энергетической политики и дипломатии

Программы бакалавриата МИЭП:

  • «Международные отношения и энергетическая дипломатия»
  • «Международное право и юридическое обеспечение международного энергетического сотрудничества»
  • «Мировая экономика и международное энергетическое сотрудничество»
  • «Международный бизнес и международное энергетическое сотрудничество»
  • «Связи с общественностью и международное энергетическое сотрудничество»

Международные и практико-ориентированные магистерские программы МИЭП в партнерстве с ведущими университетами Европы и крупнейшими корпорациями:

  • «Международная энергетическая экономика и деловое администрирование» (в партнерстве с Лейпцигским университетом, Германия)
  • «Экономика нефтегазовой отрасли и проблемы энергетической политики» (в партнерстве с Университетом Боккони, Италия)
  • «Устойчивое развитие и стратегическое управление в энергетике» по направлению «Менеджмент» (в партнерстве с Университетом Сент-Эндрюс, Великобритания)
  • «Международный нефтегазовый бизнес» (в партнерстве с Университетом Норд и Высшей школой бизнеса, Норвегия)
  • «Экономические стратегии международных нефтегазовых компаний» (в сотрудничестве с ПАО «НК «Роснефть»)
  • «Международный менеджмент в области транспорта нефти и нефтепродуктов» (в сотрудничестве с ПАО «Транснефть»)
  • «Международный банковский бизнес» (в сотрудничестве с Газпромбанком)
  • «Стратегический менеджмент международных минерально-сырьевых компаний»
  • «Правовое обеспечение международных проектов и энергетического бизнеса»

Программы МВА:

  • «Международный бизнес в нефтегазовой отрасли» (в партнерстве с Высшей школой бизнеса Университета Норд, Норвегия, и Туринским политехническим университетом, Италия)
  • «Управление и регулирование экономической деятельности в международной электроэнергетике»

Программы МИЭП в Одинцовском филиале МГИМО:

Бакалавриат:

  • «Мировая экономика и инновации»
  • «Международный бизнес и управление инновациями»

Магистратура:

  • «Экономика и управление инновациями»

Последнее обновление — июнь 2020

Полный текст

Скрыть текст

«НОРНИКЕЛЬ» и МИЭП вручают дипломы молодым бакалаврам МГИМО

20 июня состоялась торжественная церемония, посвященная вручению дипломов выпускникам бакалавриата Международного института энергетической политики и дипломатии МГИМО МИД России.  

В 2017 году дипломы бакалавров получили 193 выпускника, 38 выпускникам вручены дипломы с отличием.

Наряду с выпускниками и преподавателями, в мероприятии приняли участие представители ведущих российских корпораций, которые связывают с МГИМО долговременные партнерские отношения.

По словам вице-президента «Норникеля» — заведующего Базовой кафедрой корпоративной безопасности МИЭП МГИМО РФ Владислава Гасумянова, компания крайне заинтересована в подготовке молодых кадров, способных вывести отечественный бизнес к новым горизонтам развития. 

«Влияние российских корпораций на мировую экономику, их роль в глобальных экономических процессах уже не отрицается никем. Стабильность рынков, их сбалансированное развитие невозможно без учета национальных экономических интересов. Инвестиции в человеческий капитал всегда были и будут приоритетом «Норникеля». И если система подготовки специалистов производственного профиля в целом отлажена, то профессионалы в сфере международной экономической политики, представляющие всю сложность и актуальность работы на глобальных сырьевых рынках, по прежнему остаются «штучным товаром». Мы искренне рады, что МГИМО МИД России с нашим участием восполняет этот пробел, обучая и выпуская будущих «полномочных представителей» российской экономики», отметил Владислав Гасумянов.

Директор – научный руководитель МИЭП МГИМО МИД России, член-корреспондент РАН Валерий Салыгин тепло поздравил выпускников.

«Я убежден, – сказал профессор В.И.Салыгин, – что в будущем вас ждет интересная работа, участие в ключевых энергопроектах как в России, так и за рубежом, в различных регионах мира. И я искренне верю, что знания, которые вы получили в МИЭП МГИМО, свою студенческую дружбу, которую вы здесь приобрели, вы сохраните на долгие годы».


СПРАВКА

Базовая кафедра корпоративной безопасности ПАО «ГМК «Норильский никель» создана решением Ученого совета МГИМО МИД России от 14 февраля 2017 г.

Основные направления деятельности: подготовка специалистов в области экономической, корпоративной, информационной, объектовой, внутренней безопасности, а также международного сотрудничества в профильной сфере.

Международный институт энергетической политики и дипломатии (МИЭП) МГИМО МИД России создан в 2000 г. Ведет подготовку кадров со специализацией в сфере энергетической дипломатии и международного энергетического сотрудничества и углубленной профессионально ориентированной языковой подготовкой. Обучение ведется по пяти направлениям: «Международные отношения», «Юриспруденция», «Экономика», «Менеджмент», «Реклама и связи с общественностью».

В структуру МИЭП МГИМО входят базовые кафедры ведущих российских корпораций: ПАО «НК «Роснефть», ПАО «Транснефть», ПАО «ГМК «Норильский никель», АО «Росгеология», а также «Газпромбанк» (АО).

На базе МИЭП МГИМО действуют Центр стратегических исследований и геополитики в области энергетики, научно-студенческие клубы «Мировая энергетическая политика» и «Арктика».

16 выпускников целевой программы Холдинга МРСК в Международном институте энергетической политики и дипломатии (МИЭП) МГИМО (У) МИД РФ успешно защитили квалификационные работы

Согласие на обработку персональных данных

В соответствии с требованиями Федерального Закона от 27. 07.2006 №152-ФЗ «О персональных данных» принимаю решение о предоставлении моих персональных данных и даю согласие на их обработку свободно, своей волей и в своем интересе.

Наименование и адрес оператора, получающего согласие субъекта на обработку его персональных данных:

ОАО «МРСК Урала», 620026, г. Екатеринбург, ул. Мамина-Сибиряка, 140 Телефон: 8-800-2200-220.

Цель обработки персональных данных:

Обеспечение выполнения уставной деятельности «МРСК Урала».

Перечень персональных данных, на обработку которых дается согласие субъекта персональных данных:

  • — фамилия, имя, отчество;
  • — место работы и должность;
  • — электронная почта;
  • — адрес;
  • — номер контактного телефона.

Перечень действий с персональными данными, на совершение которых дается согласие:

Любое действие (операция) или совокупность действий (операций) с персональными данными, включая сбор, запись, систематизацию, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передачу, обезличивание, блокирование, удаление, уничтожение.

Персональные данные в ОАО «МРСК Урала» могут обрабатываться как на бумажных носителях, так и в электронном виде только в информационной системе персональных данных ОАО «МРСК Урала» согласно требованиям Положения о порядке обработки персональных данных контрагентов в ОАО «МРСК Урала», с которым я ознакомлен(а).

Согласие на обработку персональных данных вступает в силу со дня передачи мною в ОАО «МРСК Урала» моих персональных данных.

Согласие на обработку персональных данных может быть отозвано мной в письменной форме. В случае отзыва согласия на обработку персональных данных.

ОАО «МРСК Урала» вправе продолжить обработку персональных данных при наличии оснований, предусмотренных в п. 2-11 ч. 1 ст. 6 Федерального Закона от 27.07.2006 №152-ФЗ «О персональных данных».

Срок хранения моих персональных данных – 5 лет.

В случае отсутствия согласия субъекта персональных данных на обработку и хранение своих персональных данных ОАО «МРСК Урала» не имеет возможности принятия к рассмотрению заявлений (заявок).

Сдача тестов МИЭП

Если оценка для вас – это не просто цифра, но и Ваша репутация.

Консультация по написанию дипломных и курсовых работ на заказ студентам высших учебных заведений.

Процесс подготовки различных видов студенческих работ может быть затруднителен для многих учащихся.
Это, как известно, является весьма сложной задачей, которую, к сожалению, нельзя игнорировать.

Студент обязан показать свои знания и желание двигаться вперед, периодически предоставляяи различные авторские сочинения в письменной форме: рефераты, курсовые работы, дипломные и творческие.
Следовательно, нужно оставаться в постоянном напряжении, чтобы получить оценки, которыми можно гордиться. VK:67768

Основным преимуществом нашего сервиса является то, что мы знаем проблемы, с которыми Вы сталкиваетесь и ежедневно помогаем тысячам студентов.

Препятствия, мешающие написать дипломную/курсовую работу самостоятельно:

  • Вы не знаете, где найти все необходимые практические и теоретические материалы.
    Одна вещь, которая заставляет материал выглядеть действительно мощно – это исследование.
    Без исследования, труд будет обычным. Так что, если вы не можете провести тщательное исследование, то вы, соответственно, не сможете написать качественную работу.
  • Из-за отсутствия интереса, вы не уверены, что хотите начинать пыхтеть над задачей.
    Это самая распространенная проблема, с которой сталкиваются студенты, когда они начинают планировать.
    Если вы не заинтересованы в теме, то Вы не сможете вообще что-нибудь написать.
  • Вы сомневаетесь, что сможете написать грамотную и интересную работу.
    Вам осталась не самая простая тема курсовой и у Вас нет возможности поменять ее.
    Если требования к курсовой кажутся Вам слишком жесткими, то вряд ли Вы добьетесь успеха в ее написании.
  • Вы постоянно заняты делами и не знаете, как выкроить время для учебы.
    Многие студенты имеют напряженный график, поэтому заниматься учебой просто невозможно.
    Но если Вы все-таки рискнете готовить курсовую или дипломную работу после трудового дня, то Вас ждет постоянный недосып и нервное истощение.
  • Вы не уверены, что успеете вовремя подготовить диплом.
    Самостоятельная работа обычно происходит достаточно медленно, так как студент должен найти хорошие теоретические материалы, прочитать их и сделать выводы в письменной форме.
    Начинать следует в начале учебного года, иначе Вы не уложитесь в конкретные сроки.

Эти проблемы могут раздражать любого студента. Если Вы не можете найти правильное решение, Вы будете страдать вместе с вашими оценками.

Итак, что нужно сделать, чтобы немедленно прекратить страдания?
Ответ: заказать консультацию по работе у сервиса Fiveorfive и позволить ему решить Вашу проблему быстро и эффективно!

Не беспокойтесь, мы предлагаем квалифицированную помощь, которая позволяет нашим клиентам взаимодействовать нашей компанией в очень удобной форме.
Вам не придется беспокоиться ни о чем, потому что после того, как вы сообщите нам о том, что Вы хотите получить, мы сразу же приступим к выполнению заказа.

Ждать больше нет смысла – позвольте нам помочь Вам с подготовкой курсовика уже сегодня!

Оформляйте заказ на консультацию по дипломной и курсовой работам прямо сейчас:

  • Мы внимательно следим за соблюдением всех инструкций и сроков.
    Таким образом, вы получите уникальную консультацию в кратчайшие сроки.
  • Наша команда будет собирать данные для исследования точно так, как вы хотите.
  • Мы проверяем текст на плагиат и качество с помощью целого набора инструментов.
  • Наряду с содержанием, мы будем заботиться о корректном форматировании в word’е.
  • Бесплатные правки позволяют получить готовый вариант, который полностью готов к сдаче и оценке.
  • Вне зависимости от объема и глубины материала, она будет завершена своевременно.

В отличие от других сервисов, мы не завышаем цены.
Наша система ценообразования наглядна и понятна.
Мы уверены, что Вы найдете ее доступной.

Воспользуйтесь нашим сервисом уже сегодня и избегите проблем с учебой!

границ | Расширение известного функционального репертуара белка

pp71 цитомегаловируса человека

Введение

Вирусы герпеса, такие как цитомегаловирус человека (ЦМВ), имеют два различных типа инфекции: продуктивный (литический) и латентный. Ключевым шагом в определении того, какой тип инфекции будет инициирован при заражении, является транскрипция вирусных генов немедленного раннего (IE), которые должны быть активированы для инициации продуктивной инфекции, но подавлены, когда устанавливается латентный период.Промотор, который управляет транскрипцией основных генов IE, Major Immediate Early Promoter (MIEP), не является полностью конститутивно активным в контексте вирусного генома, а скорее трансактивируется кодируемым вирусом белком, который упакован внутри слоя тегумента. инфекционных вирионов и совместно доставляется клеткам при проникновении вириона. Для HCMV таким трансактиватором тегумента является белок pp71, который стимулирует MIEP в репортерных анализах (Liu and Stinski, 1992) и транслоцируется в ядро ​​в литически инфицированных клетках (Hensel et al., 1996) для активации MIEP и индукции транскрипции генов, кодирующих вирусные белки IE1 и IE2. Рекомбинантный HCMV с нулевым pp71 (Bresnahan and Shenk, 2000) имеет серьезный дефект в экспрессии гена IE и продуктивной репликации. Во время продуктивной литической инфекции доставляемый тегументом pp71 инициирует и поддерживает транскрипцию MIEP достаточно долго, чтобы белок IE1, синтезированный de novo , способствовал пролонгированной экспрессии генов литической фазы (Vardi et al., 2018) и завершению продуктивной репликации.

Но pp71 является не просто активатором транскрипции IE в начале литических инфекций. Этот белок также контролирует состояние вирусного хроматина, уклонение от внутреннего, врожденного и адаптивного иммунитета, установление латентности, клеточный цикл и, вероятно, другие вирусные и клеточные процессы, которые способствуют инфекциям HCMV (рис. 1). Здесь обсуждаются многочисленные действия pp71 с особым вниманием к особенностям, недавно обнаруженным или недостаточно рассмотренным в предыдущих обзорах (Kalejta, 2004, 2008a,b; Saffert and Kalejta, 2008; Penkert and Kalejta, 2011, 2012).

Рисунок 1 . Обзор основных ролей pp71 во время инфекции HCMV. Основные функции pp71 включают контроль экспрессии вирусных генов, уклонение от иммунитета и регуляцию клеточного цикла. pp71 регулирует экспрессию вирусных генов, предотвращая сборку транскрипционно-репрессивного гетерохроматина на вирусных геномах, ингибируя внутренние клеточные факторы и стимулируя трансляцию. pp71 способствует уклонению от иммунного ответа, подавляя компоненты внутреннего, врожденного и адаптивного иммунного ответа.pp71 также контролирует прогрессирование клеточного цикла путем ингибирования семейства Rb белков-супрессоров опухолей и онко-микроРНК miR21.

pp71 Модификации, взаимодействия, функции и действия

pp71, кодируемый геном UL82, представляет собой фосфорилированный белок с кажущейся молекулярной массой 71 кДа. Он фосфорилирован по нескольким остаткам (Shen et al., 2008), и эти остатки, фосфорилированные или нет, контролируют субклеточную локализацию эктопически экспрессируемого pp71.Неясно, как фосфорилирование влияет на локализацию или функцию pp71 при естественной экспрессии из вирусного генома во время инфекции. Рр71 также является SUMOилированным (Hwang and Kalejta, 2009), хотя роль этой модификации не была продемонстрирована. Также недавно сообщалось, что pp71 подвергается S-нитрозилированию белка, что может изменить его способность нарушать врожденную иммунную защиту хозяина (см. ниже) (Nukui et al., 2020). О других посттрансляционных модификациях pp71 не сообщалось.

Белки, которые взаимодействуют с pp71, были определены несколькими методами, включая двухгибридный скрининг дрожжей, масс-спектрометрию с вытягиванием и ко-иммунопреципитацию.Функции большинства вирусных (Phillips and Bresnahan, 2011; Nobre et al., 2019) и клеточных (Hofmann et al., 2002; Lee et al., 2012; Nobre et al. , 2019) взаимодействий неизвестны. Основные взаимодействующие факторы pp71, функции которых установлены и описаны ниже, включают Daxx, STING и семейство опухолевых супрессоров ретинобластомы (Rb).

Основными функциями pp71, по-видимому, являются контроль транскрипции вирусного ИЭ, регуляция клеточного цикла и уклонение от иммунитета.pp71 не обладает известной ферментативной активностью, хотя этот белок обладает гомологией с членами семейства dUTPase, но не имеет остатков, критических для каталитической функции (Davison and Stow, 2005). Ферментативной функцией, наиболее связанной с pp71, является протеолиз, при котором pp71 опосредует протеасомозависимую деградацию по крайней мере части белков, с которыми он связывается, включая Daxx (Saffert and Kalejta, 2006), BclAF1 (Lee et al., 2012) , и члены семейства Rb (Kalejta et al., 2003). В то время как для опосредованной pp71 деградации требуется убиквитин-связывающая регуляторная частица 19S протеасомы (Winkler et al., 2013), его субстраты разлагаются убиквитин-независимым образом (Kalejta, Shenk, 2003a; Hwang, Kalejta, 2007). Степень деградации других интеракторов pp71 и механизм убиквитин-независимой деградации еще предстоит выяснить.

В дополнение к опосредованию протеолиза других белков, сам pp71 подвергается протеолизу с помощью Granzyme M (Van Domselaar et al., 2010). Гранзимы секретируются иммунными клетками. Их проникновение в инфицированные клетки поддерживается совместно секретируемым перфорином.Внутри инфицированных клеток гранзимы расщепляют белковые субстраты и в конечном итоге приводят к гибели клеток путем апоптоза. Расщепление pp71 гранзимом М ингибирует его способность активировать репортерную конструкцию MIEP (Van Domselaar et al., 2010) и, таким образом, предположительно будет ингибировать продуктивную репликацию HCMV. Granzyme M расщепляет pp71 после аминокислоты лейцина в положении 439 (Van Domselaar et al., 2010) в области pp71, не имеющей известного функционального значения. Вирус, в котором лейцин в положении 439 pp71 заменен аланином (HCMV-pp71-L439A), чтобы сделать его нерасщепляемым Granzyme M, растет без комплементации в фибробластах in vitro (Лаура Винклер и Роб Калейта, неопубликованные наблюдения) , что приводит к вопросам, почему этот остаток, который придает иммунную восприимчивость, не подвергается отбору. Возможно, расщепление, опосредованное гранзимом М, инактивирует pp71 в контексте вирусной латентности, во время которой функция pp71 вредна для вируса (см. ниже). HCMV может использовать протеолиз pp71 как средство для определения того, является ли локальная иммунная среда негостеприимной для продуктивной репликации, и, если это так (если pp71 расщепляется гранзимом М), избегать реактивации. Следовательно, возможно, лейцин в положении 439 pp71 действительно был выбран для, а не против отбора.

Вход и снятие покрытия

Хотя он не играет известной или ожидаемой роли в процессе проникновения HCMV, судьба белка pp71, доставляемого в клетки инфекционными вирионами, играет важную роль в определении исхода инфекции HCMV.В дифференцированных клетках, таких как фибробласты и эпителиальные клетки, доставляемый тегументом pp71 быстро мигрирует в ядро ​​и остается в нем (Hensel et al., 1996; Weng et al., 2018). Однако в моделях недифференцированных клеточных линий, используемых для изучения латентности (Lee et al. , 2019), а также в первичных гемопоэтических клетках-предшественниках CD34+, которые поддерживают латентность in vitro и in vivo , доставляемый тегументом pp71 остается в ловушке. в эндосомах, через которые проникает вирус, никогда не достигая ядра (Lee and Kalejta, 2019).Эти различные субклеточные локализации pp71, доставляемого тегументом, оказывают сильное влияние на способность белка влиять на вирусную транскрипцию (см. разделы «Хроматин и транскрипция» и «Латентность» ниже).

Хроматинизация и транскрипция

pp71 играет ключевую роль в стимулировании транскрипции вирусных генов IE в начале продуктивной репликации. Рекомбинантные вирусы, лишенные pp71, имеют нарушенную экспрессию гена IE и выраженный дефект репликации, особенно при низкой множественности заражения (Bresnahan, Shenk, 2000; Cantrell, Bresnahan, 2005).Хотя было показано, что pp71 трансактивирует MIEP (Liu and Stinski, 1992), механизм, который он использовал для этого, оставался неуловимым более десяти лет. Прорыв в том, как pp71 трансактивирует транскрипцию IE, произошел, когда было обнаружено, что pp71 взаимодействует с клеточным белком Daxx (Hofmann et al., 2002). Daxx, наряду с PML и Sp100, является важным компонентом ядерных тел PML (PML-NB), первоначально наблюдаемых как ядерные точки, реагирующие с аутоантигеном (Rothfield and Rodnan, 1968; Bernstein et al., 1984; Fritzler et al., 1984) и антитела Sp100 (Szostecki et al., 1990). В то время, когда было обнаружено, что pp71 взаимодействует с Daxx, PML-NB представляли собой загадку, потому что, хотя структуры в конечном итоге разрушались во время продуктивных инфекций герпесвирусами (Maul et al., 1993; Kelly et al., 1995) и аденовирусами (Korioth et al., 1995). al., 1995), вирусные геномы, по-видимому, специфически локализуются в этих структурах (Ishov and Maul, 1996) и инициируют вирусную транскрипцию рядом с ними (Ishov et al., 1997).Таким образом, PML-NB имели свойства, которые можно было рассматривать как провирусные, и другие, которые можно было рассматривать как противовирусные (Maul, 1998). Важно, что мутанты pp71, которым не удалось взаимодействовать с Daxx, также не смогли активировать репортер MIEP (Hofmann et al., 2002), показывая, что взаимодействие между pp71 и Daxx является критическим для функции трансактивации pp71. Повышение репортерной активности MIEP и локализации pp71 в PML-NB наблюдалось при совместной трансфекции Daxx и pp71, что привело к модели, в которой Daxx играл провирусную роль, рекрутируя pp71 в PML-NB, где pp71 трансактивировал экспрессию вирусного гена. (Хофманн и др., 2002). Впоследствии была подтверждена совместная локализация pp71 и Daxx в PML-NB (Ishov et al., 2002; Marshall et al., 2002), что привело к предположению, что pp71 способствует отложению генома HCMV и последующей транскрипции в PML-NB.

Хотя в ранних исследованиях были созданы модели, в которых ПМЛ-НБ действовали провирусным образом, поддерживая инфекцию ЦМВ (Hofmann et al., 2002; Ishov et al., 2002; Marshall et al., 2002), были также данные что указывает на то, что белки PML-NB могут быть противовирусными. Ингибирование клеточных гистоновых деацетилаз (HDAC), некоторые из которых частично локализованы в PML-NB, улучшало экспрессию генов литической фазы герпесвируса (Murphy et al., 2002; Tang and Maul, 2003). Более того, было обнаружено, что Daxx рекрутирует HDACs в интегрированные копии репортеров на основе Avian Sarcoma Virus (ASV) и репрессирует их транскрипцию (Greger et al., 2005). Кроме того, было замечено, что компоненты PML-NB повторно локализуются в поступающих геномах вируса простого герпеса типа 1 (HSV-1) (Everett and Murray, 2005), в отличие от вирусных геномов, ищущих существующие PML-NB.Действительно, более поздние работы (Diner et al., 2016; Everett, 2016) подтвердили, что белки PML-NB, а также ДНК-сенсор IFI16 мобилизуются к поступающим вирусным геномам во время инфекций HSV-1 и HCMV. Таким образом, ранние исследования также подразумевали ингибирующую роль белков PML-NB в отношении репликации вируса.

Помимо связывания Daxx, независимая работа показала, что pp71 также связывается с другими клеточными репрессорами транскрипции, а именно с опухолевыми супрессорами семейства Rb, Rb, p107 и p130, и индуцирует их протеасомозависимую, убиквитиннезависимую деградацию (Kalejta and Shenk , 2003a,b; Kalejta et al. , 2003). Когда было изучено влияние pp71 на устойчивые уровни Daxx, стало ясно, что pp71 достаточно для деградации Daxx при эктопической экспрессии в клетках и необходимо для деградации Daxx во время инфицирования HCMV (Saffert and Kalejta, 2006). Кроме того, нокдаун Daxx способствовал экспрессии гена IE HCMV (Cantrell and Bresnahan, 2006; Preston and Nicholl, 2006; Saffert and Kalejta, 2006; Woodhall et al., 2006). Эти эксперименты были одними из первых, в которых использовалась РНК-интерференция для изучения инфекции HCMV (Wiebusch et al., 2004; Wills et al., 2005) и предоставил первое убедительное доказательство того, что белок PML-NB (Daxx) не является провирусным, как предполагалось (Hofmann et al., 2002; Ishov et al., 2002), а на самом деле является противовирусное средство. Daxx был описан как ингибитор внутреннего иммунитета против HCMV (Saffert and Kalejta, 2006). Эти негативные эффекты Daxx на инфекции ЦМВ были быстро подтверждены и распространены на дополнительные белки PML-NB (рис. 2) ATRX, BclAF1, PML и Sp100 несколькими независимыми группами (Cantrell and Bresnahan, 2006; Everett et al., 2006; Престон и Николл, 2006 г.; Тавалай и др., 2006 г.; Лукащук и др., 2008; Адлер и др., 2011; Ли и др., 2012). С тех пор ингибирующее действие PML-NB на вирусные инфекции было систематизировано (Everett and Chelbi-Alix, 2007; Scherer and Stamminger, 2016), и теперь мы понимаем, что все вирусы герпеса человека, вероятно, кодируют белок тегумента, который может инактивировать внутреннюю защиту. (Либерман, 2016).

Рисунок 2 . Роль pp71 в контроле экспрессии и латентности вирусных генов.При инфицировании терминально дифференцированных клеток, таких как фибробласты и эпителиальные клетки (слева), тегумент, доставленный pp71, локализуется в ядре, где он инактивирует внутренние защитные белки Daxx, ATRX и BclAF1, ограничивая отложение гистонов и образование гетерохроматина на вирусном геноме, чтобы обеспечить транскрипционная активация генов вирусного ИЭ и продуктивная вирусная инфекция. Напротив, после инфицирования неполностью дифференцированных миелоидных клеток, таких как CD34+ HPC и моноциты (справа), доставленный тегументом pp71 остается захваченным в цитоплазматических эндосомах.В результате Daxx не подвергается деградации и способствует отложению гистонов и сборке репрессивного гетерохроматина на вирусных геномах в сочетании с ATRX и корепрессорным комплексом KAP1/SetDB1/HDAC. Сборка гетерохроматина приводит к репрессии MIEP, что позволяет установить латентность. MIEP: крупный немедленный ранний промоутер. Ac: ацетилирование гистонов. Я: метилирование гистонов.

Вместе Daxx и ATRX образуют комплекс гистоновых шаперонов, который откладывает независимый от репликации вариант гистонов h4.3 на ДНК (Drané et al., 2010; Lewis et al., 2010). Несмотря на отсутствие гистонов внутри вирионов, геномы HCMV быстро собираются в нуклеосомы при проникновении в ядро ​​клеток-хозяев как во время продуктивной, так и во время латентной инфекции (Murphy et al., 2002; Nitzsche et al. , 2008). Этот процесс хроматинизации не требует ни экспрессии вирусных генов, ни репликации вирусной ДНК (Nitzsche et al., 2008; Albright and Kalejta, 2016). Поскольку эта начальная хроматинизация заражающих вирусных геномов опосредуется внутренними защитными белками, она может представлять собой предписанный клеточный ответ, направленный на подавление экспрессии чужеродной или ненуклеосомной ДНК (Penkert and Kalejta, 2012; Knipe, 2015).Гистон h4.3 ассоциирован с геномами HCMV как при продуктивной, так и при латентной инфекции (Albright and Kalejta, 2016). Нокдаун Daxx перед латентной инфекцией моноцитов THP-1 снижал занятость h4.3 вирусных геномов и повышал устойчивые уровни вирусных IE1/2 мРНК, которые обычно остаются низкими или отсутствуют в течение латентного периода (Albright and Kalejta, 2016). Интересно, что зависимые от репликации гистоны h4.1 и h4.2 также откладываются на латентных вирусных геномах Daxx-зависимым образом (Albright and Kalejta, 2016).h4.1 и h4.2 также депонируются на вирусных геномах при продуктивном инфицировании фибробластов (Albright, Kalejta, 2016). В соответствии с ролью pp71 в контроле отложения гистонов на вирусных геномах, рекомбинантный pp71-null вирус увеличивает занятость гистона h4 во время инфекции фибробластов (Albright and Kalejta, неопубликованные наблюдения).

Помимо своей роли шаперона гистонов, Daxx также взаимодействует с деацетилазами гистонов (HDAC), а также с корепрессором KAP1 и гистонметилтрансферазой h4K9 SetDB1, способствуя образованию гетерохроматина и репрессии транскрипции (Elsässer et al., 2015; Хелпер и др., 2017). Как во время продуктивной, так и во время латентной инфекции HCMV гистоны, связанные с вирусными геномами, изначально несут метки транскрипционно-репрессивного гетерохроматина, включая гипоацетилированные гистоны и метилирование в h4K9 и h4K27 (Murphy et al., 2002; Groves et al., 2009; Sourvinos et al., 2014; Ли и др., 2015). Нокдаун Daxx приводил к повышенным уровням ацетилированных гистонов и снижению уровней меток метилирования h4K9, связанных с геномами HCMV, как во время литического периода (Woodhall et al. , 2006) и латентной (Олбрайт и Калейта, неопубликованные наблюдения) инфекции ЦМВ. Как KAP1, так и SetDB1 связаны с латентными вирусными геномами, и нокдаун KAP1 приводил к снижению h4K9me3 и повышению уровней транскриптов IE1/2 и продуктивной репликации после инфицирования CD34+ HPC, в которых HCMV обычно устанавливает латентную инфекцию (Rauwel et al., 2015). . Т.о., ингибирование отложения гистонов и образования гетерохроматина с помощью pp71-опосредованной инактивации Daxx и ATRX, по-видимому, способствует созданию структуры вирусного хроматина, благоприятной для транскрипции, и является одним из способов, которым pp71 стимулирует экспрессию генов продуктивной фазы.

В дополнение к опосредованию деградации Daxx, pp71 также индуцирует SUMOylation Daxx (Hwang and Kalejta, 2009). Значение Daxx SUMOylation для инфекции HCMV неясно, поскольку эта модификация Daxx не требуется для деградации Daxx с помощью pp71 и, по-видимому, не оказывает существенного влияния на индукцию экспрессии гена IE, по крайней мере, в фибробластах (Hwang and Kalejta, 2009) . Однако Daxx SUMOylation предотвращает его связывание с NFkB и ингибирование ацетилирования и активации NFkB (Croxton et al., 2006; Парк и др., 2007 г.; Ким и др., 2017). MIEP HCMV содержит несколько сайтов связывания для NFkB (Meier and Stinski, 1996), а NFkB является общепризнанным активатором активности MIEP (DeMeritt et al., 2004; Liu et al., 2010; Yuan et al., 2015; Hancock). and Nelson, 2017), хотя сайты связывания NFkB в MIEP не требуются для продуктивной репликации в фибробластах (Gustems et al., 2006). Таким образом, pp71-опосредованное Daxx SUMOylation может способствовать NFkB-опосредованной активации MIEP, что может быть важно для эффективной экспрессии гена IE в определенных контекстах.

Задержка

Daxx-опосредованное замалчивание MIEP, которое ингибирует продуктивную литическую инфекцию (см. выше), фактически поддерживает установление латентности (Рис. 2). Во время латентного периода продуктивная репликация частично ингибируется за счет поддержания низкой или отсутствующей транскрипции и трансляции вирусных генов IE1 и IE2 (Sinclair and Reeves, 2013). Нокдаун Daxx активирует экспрессию генов продуктивной фазы во время латентного периода в недифференцированных миелоидных клетках (Saffert and Kalejta, 2007; Saffert et al., 2010), указывая на то, что Daxx подавляет экспрессию гена IE, чтобы поддерживать латентность HCMV. Следует отметить, что временного нокдауна Daxx было недостаточно для стимулирования экспрессии гена IE из штамма Toledo HCMV в модели латентности NT2 (Groves and Sinclair, 2007), вероятно, потому, что штаммы с низким пассажем сохраняют дополнительные вирусные факторы, способные подавлять MIEP, независимую активности Daxx и HDAC, которые могут маскировать эффекты нокдауна Daxx (Saffert et al., 2010; Lee et al., 2015). Таким образом, несмотря на то, что Daxx является противовирусным против продуктивной инфекции, он на самом деле является провирусным для установления латентного периода (Saffert and Kalejta, 2008).Однако эта провирусная роль Daxx (и, возможно, других белков PML-NB) во время латентного периода должна быть преодолена, чтобы позволить реактивацию к продуктивной репликации. Интересно, что вирусный белок, кодируемый цепью ДНК, комплементарной и частично перекрывающейся с геном UL82, который кодирует pp71, по-видимому, отвечает за инактивацию PML-NB во время реактивации. Белок LUNA (латентный уникальный природный антиген) (Bego et al., 2011) экспрессируется из транскрипта, антисмыслового по отношению к вирусным генам UL81 и UL82 (Bego et al., 2005), который, несмотря на название, не является уникальным для латентного периода, а экспрессируется и при литической инфекции (Keyes et al., 2012). LUNA необходима для реактивации (Keyes et al., 2012) и обладает деСУМОилазной активностью, которая разрушает PML-NB во время реактивации (Poole et al., 2018). Открытие того, что PML-NB разрушаются во время реактивации, подтверждает предыдущие результаты, показывающие, что основной компонент PML-NB, Daxx, подавляет экспрессию генов продуктивной фазы вируса во время латентного периода (Saffert and Kalejta, 2007, 2008; Saffert et al., 2010).

Daxx способен подавлять продуктивную фазу транскрипции HCMV во время латентного периода, поскольку он защищен от деградации доставляемым тегументом pp71, который остается в цитоплазме недифференцированных клеток, поддерживающих латентный период HCMV (Saffert and Kalejta, 2007; Saffert et al. , 2010). ; Олбрайт и Калейта, 2013; Пенкерт и Калейта, 2013; Ли и Калейта, 2019; Ли и др., 2019). Цитоплазматическая локализация pp71, доставляемого тегументом, была продемонстрирована во всех типах клеток, которые поддерживают экспериментальную латентность HCMV in vitro (Lee et al., 2019), включая первичные CD34+ гемопоэтические клетки-предшественники (Saffert et al., 2010; Lee and Kalejta, 2019). Ядерный импорт pp71, доставляемого тегументом, блокируется (Penkert and Kalejta, 2010), и белок остается связанным с эндосомами, через которые вирионы HCMV проникают в недифференцированные миелоидные клетки, в которых устанавливается латентность (Lee and Kalejta, 2019; Lee et al. , 2019). В то время как содержащие геном капсиды высвобождаются из эндосом, через которые вирус проникает как в дифференцированные клетки (продуктивная инфекция), так и в недифференцированные клетки (латентность) (Lee and Kalejta, 2019; Lee et al., 2019), оказывается, что еще не идентифицированный фактор, экспрессируемый только в дифференцированных клетках (Penkert and Kalejta, 2010), необходим для того, чтобы pp71 избежал эндосом, мигрировал в ядро, трансактивировал MIEP и инициировал продуктивную инфекцию. Важность опосредованной pp71 деградации Daxx и последующей инициации вирусной транскрипции для успешной продуктивной репликации и предотвращения этих событий для установления латентности делает понимание механизма цитоплазматической секвестрации pp71 первостепенным.

Хотя ясно, что pp71 играет решающую роль в инициации экспрессии вирусного гена IE в начале литической инфекции de novo , еще предстоит определить, играет ли он аналогичную роль во время реактивации из латентного периода. Как обсуждалось выше, доставляемый тегументом pp71 локализуется в эндосомах внутри не полностью дифференцированных клеток, в которых HCMV устанавливает и поддерживает латентность (Lee and Kalejta, 2019; Lee et al., 2019). Предположительно, HCMV может сохранять латентность в течение недель, месяцев или лет до реактивации.Маловероятно, чтобы pp71, доставленный тегументом, оставался бы присутствующим и способным индуцировать реактивацию после такого продолжительного периода времени. Интересно, что исследования реактивации HSV1 предполагают наличие двухфазного процесса реактивации, при котором за временной низкоуровневой дерепрессией всего вирусного генома следует классический регулируемый во времени каскад литической экспрессии генов, приводящий к амплификации вирусного генома и продуктивная репликация (Du et al. , 2011; Kim et al., 2012; Cliffe et al., 2015). Если такой процесс также происходит во время реактивации HCMV, он может обеспечить экспрессию de novo pp71, которая делает белок способным транслоцироваться в ядро ​​(Saffert and Kalejta, 2007; Saffert et al., 2010), индуцируя деградацию Daxx. и трансактивация MIEP для облегчения устойчивой экспрессии генов литической фазы и полноценной реактивации. Такой сценарий будет аналогичен сценарию трансактиватора тегумента HSV-1 VP16, который экспрессируется de novo до реактивации и локализуется в ядре, чтобы способствовать эффективной реактивации (Thompson et al., 2009; Ким и др., 2012). Однако также возможно, что активация экспрессии гена IE во время реактивации HCMV происходит посредством механизмов, которые обходят требование pp71, либо потому, что LUNA-опосредованного нарушения PML-NB (Poole et al., 2018) достаточно для подавления MIEP и / или за счет использования альтернативных промоторных последовательностей для управления транскрипцией IE1/2 во время реактивации (Collins-McMillen et al. , 2019), зависимость которых от pp71 неизвестна. Определение роли pp71 во время реактивации, если таковая имеется, требует дополнительного исследования.

Перевод

Недавно было продемонстрировано, что

pp71 связывает РНК (Lenarcic et al., 2015), открытие, предвосхищенное онтологией его взаимодействующих белков (Lee et al., 2012). Фактически, было обнаружено, что один член интерактома pp71, RNA helicase DHX9, имеет усиленную ассоциацию с РНК в инфицированных HCMV клетках (Lenarcic et al., 2015), хотя необходимость pp71 для этого усиленного взаимодействия не проверялась. pp71 был обнаружен в полисомах и усиливал общую трансляцию белка в временно трансфицированных клетках HeLa (Lenarcic et al., 2015). Коэкспрессия UL35a, белка HCMV, который взаимодействует с pp71 (Schierling et al., 2004; Salsman et al., 2011), дополнительно увеличивает синтез белка. Интересно, что коэкспрессия pp71 индуцирует более медленную мигрирующую форму UL35a, что может согласовываться с SUMOилированием (Lenarcic et al. , 2015), указывая на то, что, как и его другой партнер по связыванию Daxx (Hwang and Kalejta, 2009, 2011), pp71 может индуцировать SUMOилирование UL35a. Функция связывания pp71 с DHX9 или РНК во время вирусной инфекции еще предстоит изучить.

Уклонение от иммунитета

Иммунная система человека состоит из внутренней, врожденной и адаптивной ветвей, и pp71 регулирует все три (рис. 3). Внутренний иммунитет (Bieniasz, 2004) опосредуется конститутивно экспрессируемыми белками, которые действуют прямым противовирусным образом. Для герпесвирусов, таких как HCMV, основной мерой внутренней иммунной защиты является опосредованная белком PML-NB хроматинизация и транскрипционное молчание вирусных геномов (Tavalai and Stamminger, 2009). Действительно, Daxx был первой внутренней иммунной защитой, нацеленной на вирус герпеса (Saffert and Kalejta, 2006), и нейтрализуется pp71-опосредованной протеасомозависимой, убиквитин-независимой деградацией (Hwang and Kalejta, 2007), как описано выше (см. Хроматин и транскрипция»).

Рисунок 3 . Роль pp71 в уклонении от иммунного ответа хозяина. pp71 противодействует внутренним, врожденным и адаптивным иммунным ответам. Входящие вирусные геномы становятся мишенью внутренней иммунной защиты, опосредованной белками PML-NB, что приводит к гетерохроматинизации и подавлению транскрипции. pp71 способствует уклонению от внутренней защиты путем инактивации компонентов PML-NB Daxx, ATRX и BclAF1 (см. рис. 2). Путь врожденного иммунного восприятия cGAS-STING-TBK1 запускается cGAS-распознаванием двухцепочечной ДНК, такой как вирусные геномы, которая передает сигналы через STING и TBK1, что в конечном итоге приводит к усилению интерферон-стимулируемых генов и воспалительных цитокинов.pp71 ингибирует этот путь, блокируя транслокацию STING из ER в аппарат Гольджи, где он взаимодействует с TBK1. Адаптивный иммунный ответ включает презентацию вирусных антигенов на клеточной поверхности через молекулы MHC класса I. pp71 ингибирует эту презентацию, нарушая перенос MHC класса I. Сам pp71 становится мишенью для иммунной системы посредством расщепления Granzyme M (GrzM). cGAMP: циклический GMP-AMP.

Врожденный иммунитет представляет собой широкий набор реакций, активируемых после того, как вирусные инфекции обнаруживаются посредством их патоген-ассоциированных молекулярных паттернов (PAMP) с помощью рецепторов распознавания паттернов (PRR) (Chan and Gack, 2016; Ni et al., 2018). Основная врожденная иммунная защита, активируемая при заражении ДНК-вирусом, опосредована путем cGAS-STING-TBK1 (Ahn and Barber, 2019). Циклическая GMP-AMP-синтаза (cGAS) синтезирует циклический GMP-AMP (cGAMP) при связывании с двухцепочечной ДНК, например, при инфицировании вирусных геномов. cGAMP, в свою очередь, связывает и активирует стимулятор генов интерферона (STING), вызывая фосфорилирование и активацию TANK-связывающей киназы-1 (TBK1). Затем TBK1 активирует клеточные факторы транскрипции, чтобы способствовать экспрессии ряда противовирусных, интерферон-стимулируемых генов и воспалительных цитокинов. pp71 нарушает этот путь, связываясь со STING и предотвращая его необходимую субклеточную транслокацию из ER в Golgi и его взаимодействие с TBK1 (Fu et al., 2017). Рр71-опосредованная инактивация STING имеет количественно меньший положительный эффект на репликацию HCMV, чем pp71-опосредованная инактивация Daxx (Cantrell and Bresnahan, 2006), вероятно, потому, что существует множество белков HCMV, которые инактивируют STING и другие врожденные иммунные пути (Stempel et al., 2006). al., 2019), но pp71 является единственным известным белком HCMV, противодействующим ингибирующим эффектам Daxx.Недавно сообщалось, что pp71 модифицируется S-нитрозилированием по цистеину 218 в его Rb-связывающем мотиве LxCxD (Nukui et al., 2020). Модификация этого остатка, по-видимому, ухудшает способность pp71 нацеливаться на путь cGAS-STING-TBK1, поскольку мутант pp71, который не может быть S-нитрозилирован в этом сайте, более сильно подавляет STING-опосредованные врожденные иммунные ответы в контексте как эктопической экспрессии, так и продуктивная вирусная инфекция (Nukui et al. , 2020). Как обсуждалось выше (см. «Модификации, взаимодействия, функции и активность pp71»), pp71 может расщепляться с помощью Granzyme M (Van Domselaar et al., 2010), протеаза, секретируемая клетками врожденной и адаптивной иммунной систем. Появляющиеся данные указывают на то, что опосредованное гранзимом М расщепление pp71 также частично восстанавливает путь cGAS-STING-TBK1 в клетках, инфицированных HCMV (Niels Bovenschen, личное сообщение), открывая дополнительные средства, с помощью которых врожденный и адаптивный иммунитет может препятствовать продуктивной репликации HCMV.

Адаптивный иммунитет — это высокоспецифический ответ на уникальные антигены, кодируемые патогенами, который не только действует прямым противовирусным путем, уничтожая вирусные частицы и инфицированные клетки, но и создает иммунологическую память, которая может реагировать быстрее и сильнее при повторном заражении вирусом. тот же возбудитель.У HCMV есть несколько способов избежать или нейтрализовать адаптивный иммунный ответ (Noriega et al. , 2012). Одним из таких методов является опосредованное pp71 подавление экспрессии на клеточной поверхности молекул Major Histocompatibility Complex (MHC) класса I (Trgovcich et al., 2006). Молекулы MHC класса I представляют собой внутренние пептиды на поверхности клетки. Если задействована цитотоксическая Т-клетка адаптивной иммунной системы, которая распознает представленный эпитоп, клетка погибает, останавливая вирусную инфекцию. pp71 может предотвращать перенос MHC класса I в аппарат Гольджи или через него, тем самым предотвращая его экспрессию на клеточной поверхности (Trgovcich et al., 2006). Неясно, может ли аналогичный механизм использоваться для изменения переноса компонента врожденного иммунитета STING и компонента адаптивного иммунитета MHC класса I. Интересно, что доставляемый тегументом pp71 увеличивает презентацию MHC класса I пептидов, полученных из HCMV непосредственно на ранней стадии. белок IE1 (Hesse et al., 2013), ген которого трансактивирован pp71. Возможно, pp71-опосредованное иммуносупрессивное подавление экспрессии клеточной поверхности MHC класса I уменьшает иммуностимулирующий эффект pp71-опосредованной активации вирусной транскрипции.

Клеточный цикл

pp71 переводит покоящиеся клетки G0 в S-фазу (Kalejta et al., 2003), индуцируя протеасомозависимую, убиквитин-независимую деградацию Rb-семейства опухолевых супрессоров (Kalejta and Shenk, 2003a), Rb, p107 и p130 (рис. 4). Rb-связывающий мотив LxCxD внутри pp71 необходим для индукции этого клеточного цикла. pp71 также ускоряет клетки через фазу G1 клеточного цикла (Kalejta and Shenk, 2003b) посредством механизма, в значительной степени независимого от его мотива LxCxD.Способность pp71 стимулировать развитие клеточного цикла несколькими способами может иметь важное значение для эффективной продуктивной репликации вируса и может способствовать пролиферативным заболеваниям, связанным с инфекцией HCMV, включая сердечно-сосудистые заболевания и рак.

Рисунок 4 . Роль pp71 в регуляции клеточного цикла. Члены семейства Rb блокируют переход клеточного цикла из G1 в S-фазу. pp71 способствует продвижению клеточного цикла из G1 в S-фазу путем связывания и индукции зависимой от протеасомы, независимой от убиквитина деградации белков Rb. МикроРНК miR21 может способствовать прогрессированию клеточного цикла путем подавления белков-супрессоров опухолей. Экспрессия pp71 может ингибировать уровни miR21 для точной настройки контроля клеточного цикла.

Белок Rb расщепляется pp71 в начале продуктивной инфекции HCMV (Hume et al., 2008), но повторно накапливается в более позднее время в виде ряда более медленно мигрирующих форм из-за фосфорилирования вирусной циклин-зависимой киназой, подобной (v- Cdk) белок UL97 (Hume et al., 2008; Prichard et al., 2008). Значение повторного появления Rb было неизвестно, пока не было продемонстрировано, что HCMV менее эффективно реплицируется в клетках с нокдауном Rb (VanDeusen and Kalejta, 2015a,b).Другой субстрат pp71, Daxx, также деградирует в ранние сроки, но вновь появляется позже при инфекции (Saffert and Kalejta, 2006). Однако, в отличие от Rb, нокдаун Daxx слегка усиливает продуктивную репликацию HCMV дикого типа (Cantrell and Bresnahan, 2006). В настоящее время неясно, глобально нарушена ли способность pp71 разлагать субстраты на поздних стадиях инфекции, или же некоторые субстраты pp71 просто повторно накапливаются (например, pp71 не может связывать фосфорилированные виды Rb, поэтому фосфорилирование, опосредованное UL97, может защищать Rb от pp71). -опосредованная деградация).

miR21 представляет собой микроРНК, тесно связанную с раком человека (Wu et al., 2015). Большинство мишеней miR21 являются белками-супрессорами опухолей, и поэтому они считаются онко-миР, хотя они также подавляют стимулирующую клеточный цикл фосфатазу CDC25A (Wang et al., 2009). Уровни miR21 снижены на 20% в клетках глиобластомы U-251MG, сконструированных для эктопической экспрессии pp71 (Fu et al., 2015). Роль miR21 или ее подавление с помощью pp71 во время инфекции HCMV остается неизвестной.

Патогенез

геномов и белков HCMV можно обнаружить в опухолях мультиформной глиобластомы (GBM) (Cobbs et al., 2002; Дзюжинский и др., 2012; Ранганатан и др., 2012 г.; Liu et al., 2017), а химические или иммунологические методы, направленные на ЦМВ, изучаются в качестве дополнительной терапии ГБМ (Foster et al., 2017). Хотя pp71, подобно онкобелкам других ДНК-опухолевых вирусов (Kalejta, 2004), инактивирует опухолевые супрессоры Rb (Kalejta and Shenk, 2003a,b; Kalejta et al. , 2003), нет никаких доказательств того, что HCMV в целом или pp71 в в частности, стимулирует деление онкогенных клеток в вирус-позитивных ГБМ. Однако в клетках ГБМ экспрессия pp71 активирует путь NFkB, что приводит к увеличению экспрессии генов, участвующих в воспалительной реакции, ремоделировании тканей и ангиогенезе (Matlaf et al., 2013). Такой ответ теоретически может способствовать выживанию опухолевых клеток и их метастазированию. Интересно, что мутации Daxx, ATRX или гистона h4.3, которые они откладывают, широко распространены в детских глиобластомах (Schwartzentruber et al., 2012). Поскольку серопозитивность HCMV увеличивается с возрастом (Bate et al., 2010), возможно, pp71-опосредованная инактивация Daxx исключает необходимость мутации этого пути у взрослых с HCMV-позитивными опухолями. Недавно было показано, что Daxx и опухолевой супрессор гомолога фосфатазы и тензина (PTEN) имеют синтетическую летальную связь при глиобластомах, где нокдаун Daxx нарушал рост опухоли в PTEN-отрицательных, но не PTEN-положительных опухолевых клетках (Benitez et al. , 2017). Таким образом, было бы интересно определить, существует ли обратная связь между положительной реакцией на HCMV и мутацией PTEN у взрослых с ГБМ.

До 1% новорожденных инфицированы врожденными инфекциями HCMV, которые могут вызывать пожизненные неврологические проблемы, включая микроцефалию, психические дефекты и потерю слуха (Britt, 2018; Permar et al., 2018). Вирус может инфицировать нервные клетки-предшественники, где экспрессия pp71 приводит к небольшому снижению устойчивых уровней JAG1 и NICD1, компонентов пути Notch (Li et al., 2015). Неясно, влияет ли наблюдаемое умеренное подавление на функцию пути Notch для пролиферации или дифференцировки в этих клетках, или приводит ли это подавление с помощью pp71 к каким-либо последствиям во время врожденных инфекций.

Наконец, в дополнение к патогенезу, подходы к вакцинам, основанные на исследованиях функций pp71, являются многообещающими новыми средствами для лечения или предотвращения патогенеза, вызванного HCMV. В качестве потенциальных вакцин разрабатываются векторы на основе цитомегаловируса резуса (RhCMV) (Hansen et al., 2011) для множественных инфекций, включая вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), вызывающий СПИД. Векторы RhCMV, экспрессирующие антигены вируса иммунодефицита обезьян (SIV), контролировали и даже устраняли патогенные инфекции SIV у макак-резусов (Hansen et al., 2013). Удаление гомолога pp71 в геноме RhCMV (Rh210) привело к получению вакцинного вектора, который хорошо реплицировался in vitro , но плохо реплицировался in vivo . Однако иммуногенность вакцины и ее защита от инфекции SIV оставались такими же, как у вакцины дикого типа (Hansen et al., 2019; Маршалл и др., 2019). Таким образом, создание аттенуированного вируса путем удаления вирусного ингибитора внутреннего иммунитета, по-видимому, позволило создать более безопасный вакцинный вектор.

Резюме

Значительные усилия со стороны многих лабораторий установили, что pp71 является многофункциональным белком, который регулирует различные клеточные и вирусные процессы. Стимуляция транскрипции вирусного ИЭ посредством инактивации внутренней иммунной защиты посредством деградации Daxx является критической функцией pp71 во время продуктивной репликации, но отсутствует во время латентного периода из-за цитоплазматической секвестрации pp71, доставляемого тегументом.Другие функции pp71 в регуляции прогрессирования клеточного цикла и уклонении от врожденных и адаптивных иммунных ответов, по-видимому, в значительной степени необязательны для продуктивной репликации вируса в фибробластах, вероятно, из-за функциональной избыточности, обеспечиваемой другими вирусными белками. Эти функции pp71 могут играть более важную роль в других типах клеток или контекстах инфекции. Детали механизмов многих функций pp71 остаются неясными. Хотя ясно, что pp71 разрушает по крайней мере подмножество своих мишеней зависимым от протеасом и независимым от убиквитина образом, детали этого процесса еще предстоит осветить.Субклеточная локализация pp71 явно является важной контрольной точкой в ​​регуляции его функции, которая, по-видимому, диктуется как фосфорилированием, так и плохо определенным процессом снятия оболочки вириона, но специфики не хватает. Продолжающееся изучение функций и регуляции pp71 обещает раскрыть новые взгляды на восприятие поступающих вирусных геномов, хроматинизацию вирусного генома и эпигенетическую модификацию, а также на то, как модуляция прогрессирования клеточного цикла и каждого плеча иммунной системы способствует значительному патогенезу. связаны с HCMV-инфекцией.

Вклад авторов

Все перечисленные авторы внесли существенный, непосредственный и интеллектуальный вклад в работу и одобрили ее для публикации.

Финансирование

Работа в лаборатории авторов финансируется Национальными институтами здравоохранения (АИ130089 и АИ139180 в РК).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Ссылки

Адлер М., Тавалаи Н., Мюллер Р. и Штаммингер Т. (2011). Немедленно-ранняя экспрессия генов цитомегаловируса человека ограничена компонентом Sp100 ядерного домена 10. Дж. Генерал Вирол . 92, 1532–1538. doi: 10.1099/vir.0.030981-0

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Олбрайт, Э. Р., и Калейта, Р. Ф. (2013). Миелобластные клеточные линии имитируют некоторые, но не все аспекты экспериментальной латентности цитомегаловируса человека, определенные в первичных клеточных популяциях CD34 + . Дж. Вирол . 87, 9802–9812. doi: 10.1128/ОВИ.01436-13

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Олбрайт, Э. Р., и Калейта, Р. Ф. (2016). Канонические и вариантные формы гистона h4 откладываются в геном цитомегаловируса человека во время литических и латентных инфекций. Дж. Вирол . 90, 10309–10320. doi: 10.1128/ОВИ.01220-16

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бейт, С. Л., Доллард, С.C. и Кэннон, MJ (2010). Серораспространенность цитомегаловируса в Соединенных Штатах: национальные обследования состояния здоровья и питания, 1988–2004 гг. клин. Заразить. Дис. Выключенный. Опубл. Заразить. Дис. соц. Я . 50, 1439–1447. дои: 10.1086/652438

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бего, М., Мацеевски, Дж., Хайбуллина, С., Пари, Г., и Сент-Джеор, С. (2005). Характеристика антисмыслового транскрипта, охватывающего локус UL81-82 цитомегаловируса человека. Дж. Вирол . 79, 11022–11034. doi: 10.1128/ОВИ.79.17.11022-11034.2005

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бего, М. Г., Киз, Л. Р., Мачеевский, Дж., и Сент-Джеор, С. К. (2011). Белок LUNA, ассоциированный с латентностью цитомегаловируса человека, экспрессируется во время HCMV-инфекций in vivo . Арх. Вирол . 156, 1847–1851 гг. doi: 10.1007/s00705-011-1027-7

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бенитес, Дж.A., Ma, J., D’Antonio, M., Boyer, A., Camargo, M.F., Zanca, C., et al. (2017). PTEN регулирует онкогенез глиобластомы через хроматин-ассоциированные комплексы DAXX и гистона h4. 3. Нац. Коммуна . 8:15223. doi: 10.1038/ncomms15223

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бернштейн Р.М., Нойбергер Дж.М., Банн С.С., Каллендер М.Е., Хьюз Г.Р. и Уильямс Р. (1984). Разнообразие аутоантител при первичном билиарном циррозе и хроническом активном гепатите. клин. Опыт . Иммунол . 55, 553–560.

Академия Google

Бреснахан, В. А., и Шенк, Т. Е. (2000). Белок вириона UL82 активирует экспрессию генов непосредственного раннего вируса в клетках, инфицированных цитомегаловирусом человека. Проц. Натл. акад. науч. США . 97, 14506–14511. doi: 10.1073/pnas.97.26.14506

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кантрелл, С. Р., и Бреснахан, В. А. (2005). Взаимодействие между продуктом гена цитомегаловируса человека UL82 (pp71) и hDaxx регулирует экспрессию немедленно-раннего гена и репликацию вируса. Дж. Вирол . 79, 7792–7802. doi: 10. 1128/ОВИ.79.12.7792-7802.2005

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кантрелл, С. Р., и Бреснахан, В. А. (2006). Продукт гена UL82 (pp71) цитомегаловируса человека (ЦМВ) снимает опосредованную hDaxx репрессию репликации ЦМВ. Дж. Вирол . 80, 6188–6191. doi: 10.1128/ОВИ.02676-05

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Клифф, А. Р., Арбакл, Дж. Х., Фогель, Дж.Л., Геден М.Дж., Ротбарт С.Б., Кьюсак С.Л. и соавт. (2015). Путь нейронального стресса, опосредующий переключение гистонового метила/фосфо, необходим для реактивации вируса простого герпеса. Сотовый. Хозяин. Микроб. 18, 649–658. doi: 10.1016/j.chom.2015.11.007

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Коббс, К.С., Харкинс, Л., Саманта, М., Гиллеспи, Г.Ю., Бхарара, С., Кинг, П.Х., и соавт. (2002). Цитомегаловирусная инфекция человека и его экспрессия в злокачественной глиоме человека. Рак Res . 62, 3347–3350.

Реферат PubMed | Академия Google

Collins-McMillen, D., Rak, M., Buehler, J.C., Igarashi-Hayes, S., Kamil, J.P., Moorman, N.J., et al. (2019). Альтернативные промоторы запускают реактивацию цитомегаловируса человека из латентного периода. Проц. Натл. акад. науч. США . 116, 17492–17497. doi: 10.1073/pnas.13116

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Крокстон, Р., Путо, Л. А., де Белль, И., Томас М., Тории С., Ханаи Ф. и соавт. (2006). Daxx подавляет экспрессию подмножества антиапоптотических генов, регулируемых ядерным фактором-каппаВ. Рак Res . 66, 9026–9035. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-06-1047

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

ДеМеритт, И.Б., Милфорд, Л.Е., и Юрочко, А.Д. (2004). Активация пути NF-kappaB в клетках, инфицированных цитомегаловирусом человека, необходима для эффективной трансактивации основного раннего промотора. Дж. Вирол . 78, 4498–4507. doi: 10.1128/jvi.78.9.4498-4507.2004

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Дайнер, Б. А., Лам, К. К., Тотчер, Дж. Э., и Кристеа, И. М. (2016). Сенсоры вирусной ДНК IFI16 и циклическая GMP-AMP-синтаза обладают различными функциями в регуляции экспрессии вирусных генов, иммунной защиты и апоптотических реакций во время герпесвирусной инфекции. мБио 7:e01553-16. doi: 10.1128/mBio.01553-16

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Дране, П., Уарархни, К., Депо, А., Шуаиб, М., и Хамиче, А. (2010). Ассоциированный со смертью белок DAXX является новым шапероном гистонов, участвующим в независимом от репликации отложении h4.3. ген. Дев . 24, 1253–1265. doi: 10.1101/gad.566910

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ду Т., Чжоу Г. и Ройзман Б. (2011). Экспрессия гена HSV-1 из реактивированных ганглиев нарушена и сопровождается подавлением латентно-ассоциированного транскрипта и микроРНК. Проц. Натл. акад. науч. США . 108, 18820–18824. doi: 10.1073/pnas.1117203108

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Дзюжински, К., Чанг, С.М., Хеймбергер, А.Б., Калейта, Р.Ф., МакГрегор Даллас, С.Р., Смит, М., и соавт. (2012). Консенсус о роли цитомегаловируса человека в глиобластоме. Нейро. Онкол . 14, 246–255. doi: 10.1093/neuonc/nor227

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Эльзессер, С.Дж., Нох, К.-М., Диас, Н., Аллис, К.Д., и Банашински, Л.А. (2015). Гистон h4.3 необходим для подавления эндогенного ретровирусного элемента в эмбриональных стволовых клетках. Природа 522, 240–244. doi: 10.1038/nature14345

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Эверетт, Р. Д. (2016). Динамический ответ компонентов ядерного тела IFI16 и промиелоцитарного лейкоза на инфекцию вирусом простого герпеса 1. Дж. Вирол . 90, 167–179. doi: 10.1128/ОВИ.02249-15

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Эверетт, Р. Д., и Мюррей, Дж. (2005). Компоненты ND10 перемещаются в места, связанные с нуклеопротеиновыми комплексами вируса простого герпеса типа 1 во время вирусной инфекции. Дж. Вирол . 79, 5078–5089. doi: 10.1128/ОВИ.79.8.5078-5089.2005

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Эверетт Р. Д., Рехтер С., Папиор П., Тавалаи Н., Штаммингер Т. и Орр А.(2006). ПМЛ способствует клеточному механизму подавления инфекции вирусом простого герпеса 1 типа, который инактивируется ICP0. Дж. Вирол . 80, 7995–8005. doi: 10.1128/ОВИ.00734-06

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Фостер, Х., Уласов, И.В., и Коббс, К.С. (2017). Иммуномодуляция, опосредованная цитомегаловирусом человека: влияние на прогрессирование глиобластомы. Биохим. Биофиз. Acta Rev. Рак 1868, 273–276. doi: 10.1016/j.bbcan.2017.05.006

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Фрицлер, М.Дж., Валенсия, Д.В., и Маккарти, Г.А. (1984). Пятнистые антинуклеарные антитела, напоминающие антицентромерные антитела. Ревматоидный артрит . 27, 92–96. дои: 10.1002/арт.1780270114

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Fu, Y.-R., Liu, X.-J., Li, X.-J., Shen, Z.Z., Yang, B., Wu, C.-C., et al. (2015). МикроРНК миР-21 ослабляет репликацию цитомегаловируса человека в нервных клетках путем нацеливания на Cdc25a. Дж. Вирол . 89, 1070–1082. doi: 10.1128/ОВИ.01740-14

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Fu, Y.-Z., Su, S., Gao, Y.-Q., Wang, P.-P., Huang, Z.-F., Hu, M.-M., et al. (2017). Белок UL82 тегумента цитомегаловируса человека ингибирует STING-опосредованную передачу сигналов, чтобы избежать противовирусного иммунитета. Сотовый. Хозяин. Микроб. 21, 231–243. doi: 10.1016/j.chom.2017.01.001

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Грегер, Дж.Г., Кац Р.А., Ишов А.М., Мол Г.Г. и Скалка А.М. (2005). Клеточный белок daxx взаимодействует с интегразой вируса саркомы птиц и вирусной ДНК, подавляя транскрипцию вируса. Дж. Вирол . 79, 4610–4618. doi: 10.1128/ОВИ.79.8.4610-4618.2005

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Гровс, И. Дж., Ривз, М. Б., и Синклер, Дж. Х. (2009). Литическая инфекция пермиссивных клеток цитомегаловирусом человека регулируется внутренней «пре-немедленной-ранней» репрессией экспрессии вирусного гена, опосредованной посттрансляционной модификацией гистонов. Дж. Генерал Вирол . 90, 2364–2374. doi: 10.1099/vir.0.012526-0

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Гровс, И. Дж., и Синклер, Дж. Х. (2007). Нокдаун hDaxx в обычно непермиссивных недифференцированных клетках не делает возможной экспрессию генов цитомегаловируса человека непосредственно-ранняя. Дж. Генерал Вирол . 88, 2935–2940. doi: 10.1099/vir.0.83019-0

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Густемс, М., Borst, E., Benedict, C.A., Pérez, C., Messerle, M., Ghazal, P., et al. (2006). Регуляция цикла транскрипции и репликации цитомегаловируса человека нечувствительна к генетической элиминации родственных сайтов связывания NF-κB в энхансере. Дж. Вирол . 80, 9899–9904. doi: 10.1128/ОВИ.00640-06

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Hansen, S.G., Ford, J.C., Lewis, M.S., Ventura, A.B., Hughes, C.M., Coyne-Johnson, L., et al. (2011).Глубокий ранний контроль над высокопатогенным ВИО с помощью эффекторной Т-клеточной вакцины памяти. Природа 473, 523–527. doi: 10.1038/nature10003

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Hansen, S.G., Marshall, E.E., Malouli, D., Ventura, A.B., Hughes, C.M., Ainslie, E., et al. (2019). Живая аттенуированная RhCMV/SIV-вакцина демонстрирует долгосрочную эффективность против заражения гетерологичным SIV. науч. Перевод Мед . 11:eaaw2607. doi: 10.1126/scitranslmed.aaw2607

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Hansen, S.G., Piatak, M., Ventura, A.B., Hughes, C.M., Gilbride, R.M., Ford, J.C., et al. (2013). Иммунный клиренс высокопатогенной ВИО-инфекции. Природа 502, 100–104. doi: 10.1038/nature12519

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Hensel, G.M., Meyer, H.H., Buchmann, I., Pommerehne, D., Schmolke, S., Plachter, B., et al. (1996). Внутриклеточная локализация и экспрессия фосфопротеина матрикса цитомегаловируса человека pp71 (ppUL82): свидетельство его транслокации в ядро. Дж. Генерал Вирол . 77 (часть 12), 3087–3097. дои: 10.1099/0022-1317-77-12-3087

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Hesse, J. , Reyda, S., Tenzer, S., Besold, K., Reuter, N., Krauter, S., et al. (2013). Цитомегаловирус человека pp71 стимулирует презентацию пептидов, происходящих из IE1, в главном комплексе гистосовместимости класса I непосредственно в ранние сроки инфекции. Дж. Вирол . 87, 5229–5238. doi: 10.1128/ОВИ.03484-12

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хелпер, Д., Хуанг, Х., Джейн, А.Ю., Патель, Д.Дж., и Льюис, П.В. (2017). Структурное и механистическое понимание ATRX-зависимых и -независимых функций гистонового шаперона DAXX. Нац. Коммуна . 8:1193. doi: 10.1038/s41467-017-01206-y

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хофманн, Х., Синдре, Х., и Штаммингер, Т. (2002). Функциональное взаимодействие между белком pp71 цитомегаловируса человека и PML-взаимодействующим белком человека Daxx. Дж.Вирол . 76, 5769–5783. doi: 10.1128/jvi.76.11.5769-5783.2002

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хьюм, А. Дж., Финкель, Дж. С., Камил, Дж. П., Коэн, Д. М., Калбертсон, М. Р., и Калейта, Р. Ф. (2008). Фосфорилирование белка ретинобластомы вирусным белком с функцией циклинзависимой киназы. Наука 320, 797–799. doi: 10.1126/наука.1152095

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хван, Дж.и Калейта, РФ (2007). Зависимая от протеасом, убиквитин-независимая деградация Daxx вирусным белком pp71 в клетках, инфицированных цитомегаловирусом человека. Вирусология 367, 334–338. doi: 10.1016/j.virol.2007.05.037

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хванг, Дж., и Калейта, Р.Ф. (2011). In vivo анализ сумоилирования белка, индуцированного вирусным белком: обнаружение сумоилирования Daxx, индуцированного pp71 HCMV. Методы 55, 160–165.doi: 10.1016/j.ymeth.2011.07.004

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ишов А.М., Стенберг Р. М. и Мол Г.Г. (1997). Непосредственное раннее взаимодействие цитомегаловируса человека с ядерными структурами хозяина: определение непосредственного окружения транскрипта. J. Cell Biol . 138, 5–16. doi: 10.1083/jcb.138.1.5

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ишов А. М., Владимирова О. В., Мол Г.Г. (2002). Daxx-опосредованное накопление белка тегумента человеческого цитомегаловируса pp71 на ND10 способствует инициации вирусной инфекции в этих ядерных доменах. Дж. Вирол . 76, 7705–7712. doi: 10.1128/jvi.76.15.7705-7712.2002

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Калейта, РФ (2004). Цитомегаловирус человека pp71: новый вирусный инструмент для исследования механизмов прогрессирования клеточного цикла и онкогенеза, контролируемых семейством ретинобластомных опухолевых супрессоров. Дж. Сотовый. Биохим . 93, 37–45. doi: 10.1002/jcb.20177

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Калейта, Р. Ф. (2008a). Функции белков тегумента цитомегаловируса человека до непосредственной ранней экспрессии генов. Курс. Верхняя. микробиол. Иммунол . 325, 101–115. дои: 10.1007/978-3-540-77349-8_6

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Калейта, Р. Ф., Бехтель, Дж. Т., и Шенк, Т. (2003).Цитомегаловирус человека pp71 стимулирует прогрессирование клеточного цикла, индуцируя протеасомозависимую деградацию ретинобластомного семейства опухолевых супрессоров. мол. Клетка. Биол . 23, 1885–1895. doi: 10.1128/mcb.23.6.1885-1895.2003

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Калейта, Р. Ф., и Шенк, Т. (2003a). Зависимая от протеасом, убиквитин-независимая деградация семейства Rb опухолевых супрессоров белком цитомегаловируса человека pp71. Проц. Натл. акад. науч. США . 100, 3263–3268. doi: 10.1073/pnas.0538058100

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Калейта, Р. Ф., и Шенк, Т. (2003b). Продукт гена UL82 цитомегаловируса человека (pp71) ускоряет прогрессирование через фазу G1 клеточного цикла. Дж. Вирол . 77, 3451–3459. doi: 10.1128/jvi.77.6.3451-3459.2003

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Келли, К., Ван Дрил, Р.и Уилкинсон, Г.В. (1995). Разрушение ядерных телец, связанных с ПМЛ, при заражении человека цитомегаловирусом. Дж. Генерал Вирол . 76 (часть 11), 2887–2893. дои: 10.1099/0022-1317-76-11-2887

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Киз, Л.Р., Харгетт, Д., Соланд, М., Бего, М.Г., Россетто, К.С., Алмейда-Порада, Г., и соавт. (2012). Белок LUNA ЦМВ необходим для реактивации вируса из латентно инфицированных первичных клеток CD14 + . PLoS ONE 7:e52827.doi: 10.1371/journal.pone.0052827

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Kim, J.A., Choi, M.S., Min, J. S., Kang, I., Oh, J., Kim, J.C., et al. (2017). HSV-1 ICP27 подавляет активность NF-κB, регулируя сумоилирование Daxx. BMB Rep . 50, 275–280. doi: 10.5483/bmbrep.2017.50.5.010

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ким, Дж. Ю., Мандарино, А., Чао, М. В., Мор, И., и Уилсон, А. С. (2012).Временная инверсия молчания эписом предшествует VP16-зависимой транскрипции во время реактивации латентного HSV-1 в нейронах. ПЛОС Патог . 8, e1002540. doi: 10.1371/journal.ppat.1002540

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Найп, Д. М. (2015). Ядерное зондирование вирусной ДНК, эпигенетическая регуляция вирусной инфекции простого герпеса и врожденный иммунитет. Вирусология 479–480, 153–159. doi: 10.1016/j.virol.2015.02.009

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кориот, Ф., Gieffers, C., Maul, G.G., and Frey, J. (1995). Молекулярная характеристика NDP52, нового белка ядерного домена 10, который перераспределяется при вирусной инфекции и лечении интерфероном. J. Cell Biol . 130, 1–13. doi: 10.1083/jcb.130.1.1

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ли, Дж.-Х., и Калейта, Р.Ф. (2019). Цитомегаловирус человека проникает в первичные CD34 + гемопоэтические клетки-предшественники, где он устанавливает латентность путем макропиноцитоза. Дж. Вирол . 93:e00452-19. doi: 10.1128/ОВИ.00452-19

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ли, Дж.-Х., Паскарелла, Дж. Р., и Калейта, Р. Ф. (2019). Модели клеточных линий латентности человеческого цитомегаловируса точно имитируют проникновение вируса путем макропиноцитоза и эндоцитоза. Дж. Вирол . 93, e01021–19. doi: 10.1128/ОВИ.01021-19

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ли, С. Х., Олбрайт, Э. Р., Ли, Дж.-Х., Джейкобс, Д., и Калейта, Р.Ф. (2015). Клеточная защита от латентной колонизации нарушена белком UL138 цитомегаловируса человека. науч. Дополнение . 1:e1501164. doi: 10.1126/sciadv.1501164

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Lee, S.H., Kalejta, R.F., Kerry, J., Semmes, O.J., O’Connor, C.M., Khan, Z., et al. (2012). Фактор рестрикции BclAF1 нейтрализуется протеасомной деградацией и репрессией микроРНК во время инфицирования человека цитомегаловирусом. Проц. Натл. акад. науч. США . 109, 9575–9580. doi: 10.1073/pnas.1207496109

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ленарчич, Э. М., Зир, Б. Дж., и Мурман, Н. Дж. (2015). Беспристрастный протеомный подход к идентификации белков, связанных с РНК цитомегаловируса человека. Вирусология 481, 13–23. doi: 10.1016/j.virol.2015.02.008

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Льюис, П. В., Эльзессер, С.Дж., Нох, К.-М., Стадлер, С.К., и Аллис, К.Д. (2010). Daxx является специфическим для h4.3 гистоновым шапероном и сотрудничает с ATRX в независимой от репликации сборке хроматина на теломерах. Проц. Натл. акад. науч. США . 107, 14075–14080. doi: 10.1073/pnas.1008850107

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Li, X.-J., Liu, X.-J., Yang, B., Fu, Y.-R., Zhao, F., Shen, Z.-Z., et al. (2015). Цитомегаловирусная инфекция человека нарушает регуляцию локализации и стабильности NICD1 и Jag1 в нейральных клетках-предшественниках. Дж. Вирол . 89, 6792–6804. doi: 10.1128/ОВИ.00351-15

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Лю Б. и Стински М. Ф. (1992). Цитомегаловирус человека содержит белок тегумента, который усиливает транскрипцию с промоторов с расположенными выше ATF и цис-действующими элементами AP-1. Дж. Вирол . 66, 4434–4444. doi: 10.1128/ОВИ.66.7.4434-4444.1992

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Лю, К., Кларк, П.А., Куо, Дж. С., и Калейта, Р. Ф. (2017). Клетки глиобластомы, инфицированные цитомегаловирусом человека, демонстрируют фенотипы, подобные стволовым клеткам. mSphere 2:00137-17. doi: 10.1128/mSphere.00137-17

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Лю, X., Юань, Дж., Ву, А.В., МакГонагилл, П.В., Галле, К.С., и Мейер, Дж.Л. (2010). Индуцированная сложным эфиром форбола активация главного немедленно-раннего (MIE) цитомегаловируса человека посредством PKC-дельта, CREB и NF-kappaB подавляет экспрессию гена MIE в покоящихся инфицированных плюрипотентных клетках человека NTera2. Дж. Вирол . 84, 8495–8508. doi: 10.1128/ОВИ.00416-10

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Лукащук В., Макфарлейн С., Эверетт Р. Д. и Престон К. М. (2008). Белок цитомегаловируса человека pp71 вытесняет ассоциированный с хроматином фактор ATRX из ядерного домена 10 на ранних стадиях инфекции. Дж. Вирол . 82, 12543–12554. doi: 10.1128/ОВИ.01215-08

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Маршалл, Э.Э. , Малули Д., Хансен С.Г., Гилбрайд Р.М., Хьюз С.М., Вентура А.Б. и соавт. (2019). Повышение безопасности вакцинных векторов на основе цитомегаловируса за счет включения внутреннего иммунитета хозяина. науч. Перевод Мед . 11:eaaw2603. doi: 10.1126/scitranslmed.aaw2603

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Marshall, K.R., Rowley, K.V., Rinaldi, A., Nicholson, I.P., Ishov, A.M., Maul, G.G., et al. (2002). Активность и внутриклеточная локализация белка рр71 цитомегаловируса человека. Дж. Генерал Вирол . 83, 1601–1612. дои: 10.1099/0022-1317-83-7-1601

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Матлаф Л.А., Харкинс Л.Е., Безруков В., Коббс К.С. и Сорочану Л. (2013). Белок цитомегаловируса pp71 экспрессируется в глиобластоме человека и способствует проангиогенной передаче сигналов за счет активации фактора стволовых клеток. PLoS ONE 8:e68176. doi: 10.1371/journal.pone.0068176

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Мол, Г. Г. (1998). Ядерный домен 10, сайт транскрипции и репликации ДНК-вируса. BioEssays News Rev. Мол. Клетка. Дев. Биол . 20, 660–667. doi: 10.1002/(SICI)1521-1878(199808)20:8<660::AID-BIES9>3.0.CO;2-M

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Мол, Г.Г., Гульднер, Х.Х., и Спивак, Дж.Г. (1993). Модификация дискретных ядерных доменов, индуцированная продуктом непосредственно раннего гена 1 вируса простого герпеса типа 1 (ICP0). Дж. Генерал Вирол . 74 (часть 12), 2679–2690.дои: 10.1099/0022-1317-74-12-2679

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Мерфи, Дж. К., Фишле, В., Вердин, Э., и Синклер, Дж. Х. (2002). Контроль экспрессии литического гена цитомегаловируса путем ацетилирования гистонов. EMBO J . 21, 1112–1120. doi: 10.1093/emboj/21.5.1112

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ницше, А., Паулюс, К., и Невельс, М. (2008). Временная динамика сборки хроматина цитомегаловируса в продуктивно инфицированных клетках человека. Дж. Вирол . 82, 11167–11180. doi: 10.1128/ОВИ.01218-08

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Nobre, L.V., Nightingale, K., Ravenhill, B.J., Antrobus, R., Soday, L., Nichols, J., et al. (2019). Анализ интерактома цитомегаловируса человека выявляет центры деградации, ассоциации доменов и функции вирусных белков. eLife 8:e49894. doi: 10.7554/eLife.49894

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Норьега, В., Редманн, В., Гарднер, Т., и Торторелла, Д. (2012). Различные стратегии уклонения от иммунитета цитомегаловирусом человека. Иммунол. Рез . 54, 140–151. doi: 10.1007/s12026-012-8304-8

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Нукуи, М., Рош, К.Л., Цзя, Дж., Фокс, П.Л., и Мерфи, Э.А. (2020). Белок S-нитрозилирование человеческого цитомегаловируса pp71 ингибирует его способность ограничивать противовирусные ответы STING. bioRxiv (2020). дои: 10.1101/2020.01.08.899757

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Park, J., Lee, J.H., La, M., Jang, M.J., Chae, G.W., Kim, S.B., et al. (2007). Ингибирование ацетилирования NF-kappaB и его транскрипционной активности с помощью Daxx. Дж. Мол. Биол . 368, 388–397. doi: 10.1016/j.jmb.2007.02.047

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Пенкерт, Р. Р., и Калейта, Р. Ф. (2010). Ядерная локализация pp71, доставляемого тегументом, в клетках, инфицированных цитомегаловирусом человека, облегчается одним или несколькими факторами, присутствующими в терминально дифференцированных фибробластах. Дж. Вирол . 84, 9853–9863. doi: 10.1128/ОВИ.00500-10

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Пермар, С. Р., Шлейсс, М. Р., и Плоткин, С. А. (2018). Расширение нашего понимания защитного материнского иммунитета в качестве руководства для разработки вакцин для снижения врожденных цитомегаловирусных инфекций. Дж. Вирол . 92:e00030-18. doi: 10.1128/ОВИ.00030-18

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Филлипс, С.Л. и Бреснахан, В. А. (2011). Идентификация бинарных взаимодействий между белками вириона цитомегаловируса человека. Дж. Вирол . 85, 440–447. doi: 10.1128/ОВИ.01551-10

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Poole, E.L., Kew, V.G., Lau, JCH, Murray, M.J., Stamminger, T., Sinclair, J.H., et al. (2018). Активность DeSUMOylase, кодируемая вирусом, необходима для реактивации цитомегаловируса из латентного состояния. Представитель ячейки . 24, 594–606.doi: 10.1016/j.celrep.2018.06.048

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Престон, К.М., и Николл, М.Дж. (2006). Роль клеточного белка hDaxx в ранней экспрессии генов цитомегаловируса человека. Дж. Генерал Вирол . 87, 1113–1121. doi: 10.1099/vir.0.81566-0

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Причард, М. Н., Штул, Э., Дейли, С. Л., Перри, А. Л., Фредерик, С. Л., Гилл, Р. Б., и соавт.(2008). Активность киназы UL97 цитомегаловируса человека необходима для гиперфосфорилирования белка ретинобластомы и ингибирует образование ядерных агресом. Дж. Вирол . 82, 5054–5067. doi: 10.1128/ОВИ.02174-07

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ранганатан П., Кларк П. А., Куо Дж. С., Саламат М. С. и Калейта Р. Ф. (2012). Значительная ассоциация множественных геномных локусов цитомегаловируса человека с образцами мультиформной глиобластомы. Дж. Вирол . 86, 854–864. doi: 10.1128/ОВИ.06097-11

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Раувель Б., Джанг С. М., Кассано М., Капопулу А., Барде И. и Троно Д. (2015). Высвобождение цитомегаловируса человека из латентного состояния с помощью переключателя фосфорилирования KAP1/TRIM28. eLife 4:e06068. doi: 10.7554/eLife.06068

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ротфилд, Н. Ф., и Роднан, Г. П. (1968).Сывороточные антинуклеарные антитела при прогрессирующем системном склерозе (склеродермии). Ревматоидный артрит . 11, 607–617. дои: 10.1002/арт.1780110502

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Саффер Р. Т. и Калейта Р. Ф. (2006). Инактивация внутренней клеточной иммунной защиты, опосредованной Daxx, представляет собой механизм, с помощью которого белок pp71 цитомегаловируса человека стимулирует экспрессию вирусных немедленно-ранних генов. Дж. Вирол . 80, 3863–3871.doi: 10.1128/ОВИ.80.8.3863-3871.2006

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Сафферт Р.Т. и Калейта Р.Ф. (2007). Экспрессия генов цитомегаловируса человека подавляется Daxx-опосредованной внутренней иммунной защитой в модели латентных инфекций, установленных in vitro . Дж. Вирол . 81, 9109–9120. doi: 10.1128/ОВИ.00827-07

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Сафферт Р. Т. и Калейта Р.Ф. (2008). Промиелоцитарный лейкоз-нуклеарные белки тела: враги герпесвируса, сообщники или и то, и другое? Будущее Вирол . 3, 265–277. дои: 10.2217/17460794.3.3.265

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Саффер Р. Т., Пенкерт Р. Р. и Калейта Р. Ф. (2010). Клеточный и вирусный контроль над начальными событиями экспериментальной латентности цитомегаловируса человека в клетках CD34+. Дж. Вирол . 84, 5594–5604. doi: 10.1128/ОВИ.00348-10

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Салсман, Дж., Ван, X., и Фраппье, Л. (2011). Формирование ядерного тела и ремоделирование тела PML белком цитомегаловируса человека UL35. Вирусология 414, 119–129. doi: 10.1016/j.virol.2011.03.013

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ширлинг К., Штаммингер Т., Мертенс Т. и Винклер М. (2004). Белки тегумента цитомегаловируса человека ppUL82 (pp71) и ppUL35 взаимодействуют и совместно активируют основной ранний энхансер. Дж. Вирол .78, 9512–9523. doi: 10.1128/ОВИ.78.17.9512-9523.2004

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Шварцентрубер, Дж., Коршунов, А., Лю, X.-Y., Джонс, Д.Т., Пфафф, Э., Джейкоб, К., и др. (2012). Драйверные мутации гистона h4.3 и генов ремоделирования хроматина при детской глиобластоме. Природа 482, 226–231. doi: 10.1038/nature10833

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Шэнь В., Вестгард Э., Хуанг Л., Ward, M.D., Osborn, J.L., Chau, N.H., et al. (2008). Ядерный перенос белка тегумента цитомегаловируса человека pp71 (ppUL82). Вирусология 376, 42–52. doi: 10.1016/j.virol.2008.03.007

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Сурвинос Г., Мору А., Санидас И., Кодрута И., Эзелл С.А., Доксаки С. и соавт. (2014). Понижающая регуляция GFI1 осью EZh3-NDY1/KDM2B-JARID2 и факторами, ассоциированными с цитомегаловирусом человека (ЦМВ), позволяет активировать основной промотор ИЭ ЦМВ и перейти к продуктивной инфекции. ПЛОС Патог . 10:e1004136. doi: 10.1371/journal.ppat.1004136

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Стемпель М., Чан Б. и Бринкманн М. М. (2019). Совместная эволюция окупается: у герпесвирусов есть лицензия на то, чтобы избежать пути восприятия ДНК. Мед. микробиол. Иммунол. (Берл.) 208, 495–512. doi: 10.1007/s00430-019-00582-0

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Шостецки, К., Гульднер, Х.Х., Неттер, Х.Дж., и Уилл, Х. (1990). Выделение и характеристика кДНК, кодирующей ядерный антиген человека, преимущественно распознаваемый аутоантителами, у пациентов с первичным билиарным циррозом печени. Дж. Иммунол. 145 , 4338–4347.

Реферат PubMed | Академия Google

Тан, К., и Мол, Г.Г. (2003). Белок 1 немедленного раннего цитомегаловируса мыши связывается с репрессорами клеток-хозяев, чтобы ослабить супрессивные эффекты на транскрипцию и репликацию вируса во время литической инфекции. Дж. Вирол . 77, 1357–1367. doi: 10.1128/jvi.77.2.1357-1367.2003

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Тавалаи Н., Папиор П., Рехтер С., Лейс М. и Штаммингер Т. (2006). Доказательства роли клеточного белка ND10 PML в опосредовании внутреннего иммунитета против цитомегаловирусных инфекций человека. Дж. Вирол . 80, 8006–8018. doi: 10.1128/ОВИ.00743-06

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Томпсон, Р.Л., Престон, К.М., и Сотелл, Н.М. (2009). De novo синтез VP16 координирует выход из HSV с латентностью in vivo . ПЛОС Патог . 5:e1000352. doi: 10.1371/journal.ppat.1000352

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Trgovcich, J., Cebulla, C., Zimmerman, P., and Sedmak, D.D. (2006). Белок цитомегаловируса человека pp71 нарушает экспрессию главного комплекса гистосовместимости класса I на клеточной поверхности. Дж. Вирол .80, 951–963. doi: 10.1128/ОВИ.80.2.951-963.2006

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ван Домселар, Р., Филиппен, Л. Э., Кадир, Р., Вирц, Э. Дж., Куммер, Дж. А., и Бовеншен, Н. (2010). Нецитотоксическое ингибирование репликации цитомегаловируса за счет опосредованного гранзимом М протеазы NK-клеток расщепления вирусного фосфопротеина 71. J. Immunol. Балтим. Мд. 185, 7605–7613. doi: 10.4049/jimmunol.1001503

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

ВанДеузен, Х.Р. и Калейта Р. Ф. (2015a). Недостатки клеточных процессов, модулируемых белком ретинобластомы, не объясняют снижение репликации цитомегаловируса человека в его отсутствие. Дж. Вирол . 89, 11965–11974. doi: 10.1128/ОВИ.01718-15

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

VanDeusen, HR, and Kalejta, RF (2015b). Супрессор опухоли ретинобластомы способствует эффективной литической репликации цитомегаловируса человека. Дж. Вирол .89, 5012–5021. doi: 10.1128/ОВИ.00175-15

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Варди Н., Чатурведи С. и Вайнбергер Л. С. (2018). Преобразование сигналов, опосредованное обратной связью, способствует приспособленности вирусов. Проц. Натл. акад. науч. США . 115, Е8803–Е8810. doi: 10.1073/pnas.18025

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Wang, P., Zou, F., Zhang, X., Li, H., Dulak, A., Tomko, R.J., et al. (2009). микроРНК-21 негативно регулирует Cdc25A и прогрессирование клеточного цикла в клетках рака толстой кишки. Рак Res . 69, 8157–8165. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-09-1996

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Weng, C., Lee, D., Gelbmann, C.B., Van Sciver, N., Nawandar, D.M., Kenney, S.C., et al. (2018). Цитомегаловирус человека продуктивно реплицирует in vitro в недифференцированных эпителиальных клетках полости рта. Дж. Вирол . 92:e00903-18. doi: 10.1128/ОВИ.00903-18

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Вибуш, Л., Трасс, М., и Хагемайер, К. (2004). Ингибирование репликации цитомегаловируса человека малыми интерферирующими РНК. Дж. Генерал Вирол . 85, 179–184. doi: 10.1099/vir.0.19453-0

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Уиллс, М.Р., Аширу, О., Ривз, М.Б., Океча, Г., Троусдейл, Дж., Томасек, П., и соавт. (2005). Цитомегаловирус человека кодирует молекулу, подобную MHC класса I (UL142), которая ингибирует лизис NK-клеток. Дж. Иммунол. 175, 7457–7465.doi: 10.4049/jиммунол.175.11.7457

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Винклер, Л.Л., Хван, Дж., и Калейта, Р.Ф. (2013). Для убиквитин-независимой протеасомной деградации опухолевых супрессоров цитомегаловирусом человека pp71 требуется регуляторная частица 19S. Дж. Вирол . 87, 4665–4671. doi: 10.1128/ОВИ.03301-12

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Вудхолл, Д. Л., Гровс, И. Дж., Ривз, М.Б., Уилкинсон Г. и Синклер Дж. Х. (2006). Опосредованная Daxx человека репрессия экспрессии генов человеческого цитомегаловируса коррелирует с репрессивной структурой хроматина вокруг основного непосредственно раннего промотора. Дж. Биол. Химия . 281, 37652–37660. дои: 10.1074/jbc.M604273200

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ву, К., Ли, Л., и Ли, С. (2015). Циркулирующая микроРНК-21 как биомаркер для обнаружения различных карцином: обновленный метаанализ, основанный на 36 исследованиях. Тумор Биол. 36, 1973–1981. doi: 10.1007/s13277-014-2803-2

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Юань Дж., Ли М., Торрес Ю. Р., Галле К. С. и Мейер Дж. Л. (2015). Связанная с дифференцировкой индукция репликации цитомегаловируса человека путем объединения основного энхансера ретиноевой кислоты, циклического ампера и элементов ответа nf-κb. Дж. Вирол . 89, 12284–12298. doi: 10.1128/ОВИ.00965-15

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Задержка

HCMV: что регулируют регуляторы?

Med Microbiol Immunol.2019; 208(3): 431–438.

и

Элизабет Элдер

Медицинский факультет Кембриджского университета, Box 157 Addenbrooke’s Hospital, Hills Road, Cambridge, CB2 0QQ UK

John Sinclay UK

John Sincla Box 157 Больница Addenbrooke, Hills Road, Cambridge, CB2 0QQ UK

Медицинский факультет Кембриджского университета, Box 157 Addenbrooke’s Hospital, Hills Road, Cambridge, CB2 0QQ UK

Автор, ответственный за переписку.

Поступила в редакцию 17 января 2019 г.; Принято 2 февраля 2019 г.

OpenAccess Эта статья распространяется в соответствии с условиями международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 (http://creativecommons.org/licenses/by/4. 0/), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение. на любом носителе, при условии, что вы укажете первоначальных авторов и источник, предоставите ссылку на лицензию Creative Commons и укажите, были ли внесены изменения. Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.

Abstract

Латентный период и реактивация цитомегаловируса человека (ЦМВ) регулируются структурой хроматина в основном непосредственном раннем промоторе (MIEP) в миелоидных клетках. Известно, что как клеточные, так и вирусные факторы контролируют этот промотор во время латентного периода, здесь мы рассмотрим известные механизмы регуляции MIEP во время латентного периода. Затем мы сосредоточимся на кодируемом вирусом рецепторе, сопряженном с G-белком, US28, который подавляет MIEP в клетках раннего миелоидного происхождения. Важность этой функции подчеркивается тем фактом, что US28 необходим для латентного периода HCMV в клетках-предшественниках CD34 + и моноцитах CD14 + . Мы опишем клеточные сигнальные пути, модулируемые US28, чтобы направлять подавление MIEP во время латентного периода, и продемонстрируем, как US28 способен «регулировать регуляторы» латентного периода HCMV. Наконец, мы опишем, как US28 клеточной поверхности может быть мишенью для противовирусной терапии, направленной на латентный вирусный резервуар.

Ключевое слово: Цитомегаловирус, Латентность, Хроматин, US28, Вирусный резервуар, Передача сигналов клетками

Введение

Цитомегаловирус человека (ЦМВ) сохраняется в течение всей жизни хозяина, процесс, основанный на установлении латентности в определенных типах клеток.Считается, что спорадическая реактивация HCMV хорошо контролируется иммунными реакциями хозяина, приводящими к субклиническим явлениям, но реактивация HCMV представляет серьезный риск для лиц с ослабленным иммунитетом, особенно для реципиентов трансплантированных органов с ослабленным иммунитетом. Все современные методы лечения HCMV нацелены на литическую фазу инфекции и, следовательно, не могут уменьшить или удалить латентные резервуары ни в донорском органе, ни в реципиенте. Здесь мы обсуждаем наше молекулярное понимание латентности и реактивации и то, как наши идеи привели к новым способам нацеливания на латентный резервуар.

Латентность и реактивация HCMV регулируются структурой хроматина на основном непосредственно раннем промоторе

Латентное носительство HCMV требует сохранения вирусного генома в отсутствие продукции инфекционных вирусных частиц; однако при определенных условиях вирус способен реактивироваться и производить новые вирусные частицы. Эта способность к реактивации отличает латентность от абортивной инфекции, а клеточная дифференцировка тесно связана как с латентностью, так и с реактивацией.

Одним из важных участков латентного периода цитомегаловируса человека являются клетки ранней миелоидной линии. CD34 +  предшественники и их производные, в том числе гранулоцитарно-макрофагальные предшественники и CD14 +  моноциты, латентно инфицированы у серопозитивных лиц [1–4]. Реактивация HCMV наблюдалась in vitro и ex vivo при дифференцировке клеток-предшественников CD34 +  в зрелые дендритные клетки или макрофаги [5–8]. Хотя недавно сообщалось о независимой от дифференцировки реактивации вируса в бессмертной миелоидной клеточной линии [9], механизм реактивации из латентного периода был подробно описан только во время дифференцировки миелоидных клеток.

Ключевым признаком латентности является подавление экспрессии генов немедленного раннего (IE), и, наоборот, самыми ранними событиями реактивации являются активация экспрессии генов IE. Отсутствие транскриптов IE1/IE72 и IE2/IE86 в латентном периоде является общей темой результатов множественных анализов экспрессии вирусных генов в латентно инфицированных клетках как в моделях ex vivo, так и in vitro [3, 4, 7, 10–12]. ]. Из этого следует, что контроль экспрессии гена IE является важной детерминантой латентности и реактивации.Экспрессия гена IE регулируется главными областями непосредственно раннего промотора и энхансера, которые здесь будут называться просто MIEP. Охватывая более 1 т.п.н. ДНК, области внутри MIEP могут быть связаны активирующими или репрессивными факторами транскрипции, и, поскольку ДНК HCMV быстро хроматинизируется при попадании в ядро, MIEP подлежит регуляции структурой хроматина [13–17].

Анализ структуры хроматина на основном непосредственно раннем промоторе показывает, что латентность совпадает с репрессивной структурой хроматина вокруг MIEP, включая присутствие маркера гетерохроматина HP1 [7, 8, 18], а также модификаций гистонов histone-h4 -лизин-27-триметилирование (h4K27me3) и гистон-h4-лизин-9-триметилирование (h4K9me3) [19, 20] (см. также рис.). Активность гистондеацетилазы (HDAC) также важна для поддержания репрессированного состояния хроматина; обработка латентно инфицированных моноцитов ингибиторами HDAC приводит к транзиторной активации экспрессии гена ИЭ [21].

Регуляция латентности и реактивации HCMV во время миелоидной дифференцировки. HCMV инфицирует клетки-предшественники CD34 + и устанавливает латентный период (вверху слева). Геном HCMV сохраняется в ядре в виде эписомы (синий кружок) и хроматинизирован. MIEP (представлен внизу слева) не может управлять экспрессией гена IE из-за репрессивного состояния хроматина.Гистоны (фиолетовые) триметилированы (me3) по h4K9 и h4K27. Репрессивный фактор HP1 ассоциируется с MIEP, как и ERF и YY1, а KAP1 действует, подавляя MIEP из дистальных сайтов связывания. Связанные с латентностью вирусные факторы (перечислены) способствуют подавлению MIEP, а активирующий фактор pp71 исключается из ядра. Во время индуцированной дифференцировкой реактивации в зрелых дендритных клетках или макрофагах (вверху справа) активируется транскрипция генов IE, что приводит к полной литической репликации и высвобождению инфекционных вирионов.В результате дифференцировки структура хроматина вокруг MIEP становится более открытой (внизу справа), и присутствуют активирующие гистоновые метки, включая ацетилирование гистонов (Ac) и h4-серин-10-фосфорилирование (S10P). Активированные CREB и NF-kB становятся связанными с MIEP, как и гистоновые ацетилтрансферазы (HAT). Сообщается, что несколько вирусных факторов важны для реактивации миелоидных клеток, включая LUNA, UL7 и некоторых членов семейства ULb’

Дифференцировка клеток-предшественников CD34 + , которые могут нести латентный HCMV in vivo, в зрелые дендритные клеток приводит к удалению репрессивных меток h4K27me3 и h4K9me3 и связанного с ними HP1 из MIEP [7, 8, 19, 20]. Кроме того, было показано, что фосфорилирование гистона h4-serine-10 (h4S10P) в MIEP предшествует удалению репрессивных меток во время дифференцировки экспериментально инфицированных моноцитов в незрелые дендритные клетки [22]. Ацетилирование гистона h5 также было продемонстрировано при реактивации из латентного периода в созревающих дендритных клетках [7, 8]. Таким образом, открытая структура хроматина вокруг MIEP позволяет инициировать транскрипцию IE, которая необходима для реактивации.

Клеточные и вирусные факторы контролируют MIEP в течение латентного периода

Очевидно, репрессивная структура хроматина вокруг MIEP должна устанавливаться во время латентного периода в миелоидных предшественниках, а затем модифицироваться во время реактивации, чтобы обеспечить эффективную экспрессию гена IE в дифференцированных дендритных клетках и макрофагах (рис.). Мы знаем, что этот процесс зависит как от клеточных, так и от вирусных факторов; они могут функционировать путем прямого связывания с MIEP или косвенными механизмами и иметь либо активирующие, либо репрессивные функции. Давняя гипотеза утверждает, что именно баланс этих активирующих или репрессивных факторов затем контролирует, управляет ли MIEP транскрипцией гена IE, и что клеточная дифференцировка должна изменить этот баланс [23-25].

Некоторые факторы транскрипции клетки-хозяина связываются непосредственно с перекрывающимися повторами длиной 18, 19 и 21 п.н. в MIEP, а также с другими мотивами в более восходящих последовательностях (факторы прямого действия) [17].Сюда входят репрессивные факторы YY1 и ERF, а также активирующие факторы NF-κB и CREB, которые ранее обсуждались в контексте латентности и реактивации [17]. Вкратце, в недифференцированных, непермиссивных клетках репрессивные факторы YY1 [26] и ERF [27, 28] связываются с повторами из 21 п.н. Считается, что ERF рекрутирует HDAC1 в MIEP, тем самым обеспечивая связь между связыванием транскрипционного фактора со специфическими мотивами последовательности ДНК и эпигенетической модификацией. Интересно, что абсолютные уровни YY1 снижались во время дифференцировки непермиссивной клеточной линии NT2 [26].

Недавно KAP1 был идентифицирован как организатор хроматина, который может обеспечивать репрессию во время латентности [20]. Хотя KAP1 не является строго ДНК-связывающим белком, было обнаружено, что он связан с рядом сайтов на геноме HCMV в клетках-предшественниках CD34 +  , и отложение KAP1 в этих сайтах коррелирует с присутствием эффектора KAP1 SETDB1, а также Марки HP1 и h4K9me на МИЭП. Когда КАР1 истощался, эти метки терялись, и вирус вступал в литическую репликацию при отсутствии клеточной дифференцировки.Кроме того, было показано, что активность KAP1 подавляется во время литической инфекции посредством фосфорилирования, опосредованного mTOR, что обеспечивает потенциальный механизм выхода из латентного состояния.

Считается, что другие факторы хозяина, которые сами по себе не связываются с вирусной ДНК, контролируют присутствие или активацию других факторов прямого действия. Как обсуждалось, mTOR-опосредованное фосфорилирование KAP1 отменяет репрессивную активность KAP1, подразумевая, что mTOR важен для регуляции латентности. Другие киназы хозяина также важны.Связывая реактивацию с клеточной дифференцировкой, было показано, что IL-6/LPS-стимулированная активация путей ERK-MAPK имеет решающее значение для индукции активности MIEP в созревающих дендритных клетках [22, 29]. CREB фосфорилируется нижестоящей киназой MSK, которая необходима для его активации в MIEP. Отсутствие этой передачи сигналов во время латентности у миелоидных предшественников может, следовательно, предотвращать активность CREB.

Роль вирусных факторов во время латентного периода становится все более значимой (рис. ) [30].Недавно было обнаружено, что экспрессия вирусных генов во время экспериментальной и естественной латентности, измеренная с помощью RNAseq, является довольно широкой и сложной [19, 31, 32] по сравнению с более ранними исследованиями латентно инфицированных клеток с использованием микрочипов или целевой ОТ-ПЦР [10, 33–35]. Кроме того, важно учитывать многочисленные вирусные факторы, которые могут проникать в миелоидные клетки в составе вириона. Например, сообщалось, что вирусная длинная некодирующая РНК 4.9 связывается с MIEP и рекрутирует репрессорный комплекс PRC2 на MIEP [19].Вирусный трансактиватор pp71 исключен из ядра непермиссивных клеток, и, поскольку было показано, что pp71 важен для противодействия функциям телец PML во время литической инфекции, исключение pp71 может способствовать опосредованной PML репрессии MIEP [36]. ]. Однако в других сообщениях в разных системах отмечается, что нокдаун компонентов ПМЛ не влиял на установление латентности [37, 38] и, кроме того, недавнее исследование показало, что вирусный фактор LUNA действительно диспергирует тельца ПМЛ во время латентной инфекции в CD34 +  клеток [39].

Продукт гена, ассоциированный с латентностью, UL138 не локализуется в ядре, а вместо этого манипулирует клеточными сигнальными путями из ER, вероятно, совместно и в противовес другим членам ULb’ региона [40]. Вкратце, сообщалось, что UL138 подавляет активность MIEP, частично путем блокирования активности гистон-лизин-деметилазы во время латентного периода [41], а также, вероятно, посредством манипулирования передачей сигналов EGFR [41, 42]. Между тем другие вирусные факторы способствуют реактивации из латентного состояния, включая LUNA и UL7 [39, 43, 44].

Вирусно-кодируемый рецептор US28, связанный с G-белком, экспрессируется во время литических и латентных инфекций, а также входит в состав вириона [45] и недавно получил известность как важный белок для латентности. В оставшейся части этого обзора мы обсудим, как US28 способен изменять передачу клеточных сигналов зависимым от дифференцировки образом и, таким образом, способствовать латентности в миелоидных клетках-предшественниках.

US28 необходим для латентного периода HCMV в CD34

+   клетках-предшественниках и CD14 +   моноцитах в основном были описаны для литической инфекции.Во время цикла репликации HCMV US28 действует как гомолог хемокинового рецептора, связывая хемокины CXXXC и CC [50, 51], но US28 также может конститутивно сигнализировать [52, 53]. Недавно был опубликован исчерпывающий обзор сигнальных функций US28 во время литической инфекции, включая специфичность клеточного типа, взаимодействия с лигандами и использование G-белка [54].

Однако, что интересно, вирусы с делецией гена US28 (ΔUS28) не могут установить латентность в CD34 +   клетках-предшественниках [45, 49] и CD14 +  моноцитах [55], вместо этого они не могут репрессировать MIEP, стимулируя экспрессию IE и полный литический цикл с возможным высвобождением инфекционных вирусных частиц.Удаление US28 отделяет пермиссивность от клеточной дифференцировки, поскольку моноциты, инфицированные ΔUS28 HCMV, подвергаются литической инфекции, но не обнаруживают специфичных для дифференцировки маркеров клеточной поверхности [55]. Было показано, что US28 экспрессируется и транслируется de novo, а также входит в клетку с вирионом [45], и теперь стало ясно, что как входящий US28, так и экспрессированный de novo US28 важны для установления и постоянного поддержания латентности в миелоидном предшественнике. клетки [56]. Были предложены и другие участки латентного или низкого уровня персистенции HCMV, такие как нейрональные клетки и эндотелиальные клетки, но пока они не были подтверждены in vivo, и нет никаких доказательств того, что US28 требуется для негативной регуляции MIEP во время латентного/ персистирующие инфекции этих типов клеток in vitro [54].

Использование охарактеризованных мутантов US28 выявило некоторые опосредуемые US28 функции, важные для латентности. Мутант Y16F устраняет некоторую активность связывания лиганда [57], а мутант R129A устраняет связывание G-белков с мотивом DRY box US28 [58-61]. Экспрессия US28-WT в транс восстанавливает установление латентности в моделях клеточных линий с вирусом ΔUS28. Сходным образом, экспрессия US28-Y16F in trans может также дополнять вирус с делецией US28, указывая на то, что определенные способы связывания лиганда могут не быть необходимыми для связанной с латентностью функции US28 [55].Однако делеция всего лиганд-связывающего домена US28 в вирусе вызывает литическую инфекцию в миелоидных клетках [56], что, возможно, объясняется недавней работой, демонстрирующей множественные способы, с помощью которых US28 может связывать широкий спектр лигандов [62]. Однако ясно, что ни экспрессия US28-R129A в транс-форме, ни внутри вируса не может привести к установлению латентности, предоставляя четкие доказательства того, что передача сигналов US28 через G-белки необходима для латентности [55, 56]. Таким образом, способ, которым сигнализация US28 манипулирует хост-средой для поддержания задержки, представляет большой интерес и интенсивно изучается.

US28 изменяет клеточную сигнализацию в миелоидных клетках

Анализ состояний активации клеточных киназ во время латентного периода с US28, экспрессируемым изолированно в миелоидных клетках, выявил несколько сигнальных путей, которые важны для латентного периода (обобщенные на рис. ). Инфекция клеток-предшественников CD34 + вирусом WT, но не ΔUS28 HCMV, вызывает активацию пути STAT3-iNOS, и было показано, что результирующая продукция оксида азота подавляет MIEP [49].Кроме того, эти авторы показали, что присутствие US28 в контексте латентной инфекции может перепрограммировать инфицированные клетки, чтобы они стали иммуносупрессивными моноцитами, родственными супрессорным клеткам миелоидного происхождения, а не обычными моноцитами или, действительно, частями других миелоидных или лимфоидных линий.

US28 контролирует несколько сигнальных путей для подавления MIEP в клетках ранней миелоидной линии. US28 присутствует на клеточной поверхности и, возможно, на других мембранах латентно инфицированных клеток. Здесь он ослабляет несколько сигнальных путей и факторов транскрипции, включая NF-κB, c-fos и ERK1/2.NF-κB больше не может проникать в ядро ​​(пунктирная линия), а также связываться и активировать MIEP. c-fos обычно образует димер с c-jun с образованием комплекса AP1; US28 вызывает потерю c-fos, комплекс AP1 не формируется и, таким образом, не может активировать MIEP. Аттенуация ERK1/2 вызывает потерю фосфорилирования ERK1/2 (P) и последующую активацию MSK, поэтому MSK не фосфорилирует и не активирует CREB. Неактивный CREB не может активировать MIEP. Также сообщается, что US28 активирует сигнальную ось STAT3-iNOS, что приводит к выработке оксида азота (NO).NO подавляет MIEP в миелоидных клетках неизвестными механизмами. Этими и, вероятно, другими путями US28 помогает установить и поддерживать репрессивную структуру хроматина в MIEP, а отсутствие экспрессии гена IE

Кроме того, было обнаружено, что US28 ослабляет несколько клеточных сигнальных путей, таких как ERK, MSK, NF -κB и STAT5 [55] при изолированной экспрессии в недифференцированных миелоидных клетках. Интересно отметить, что передача сигналов ERK имеет решающее значение для фосфорилирования CREB в MIEP и последующего отложения активирующей метки h4S10P на MIEP при реактивации, индуцированной дифференцировкой [22].В соответствии с этим и способностью US28 ослаблять передачу сигналов ERK, заражение моноцитов ΔUS28 HCMV (который больше не подавляет MIEP) также связано с активированным CREB и фосфорилированным h4S10 на MIEP. Кроме того, фармакологическое ингибирование ERK в сочетании с NF-kB может предотвращать литическую репликацию ΔUS28 HCMV в моноцитах, и, наоборот, обработка моноцитов низкомолекулярными ингибиторами US28 также приводит к литической инфекции, а не к латентному периоду [55].

Ослабление этих клеточных сигнальных путей обращается вспять, когда клетки, экспрессирующие US28, дифференцируются в макрофагоподобные клетки с использованием сложных эфиров форбола [55].Таким образом, подразумевается, что US28 помогает поддерживать латентность за счет ослабления MIEP-активирующих каскадов, но не блокирует передачу сигналов от этих путей во время реактивации и может даже поддерживать их функцию во время клеточной дифференцировки. Действительно, в репортерных системах US28 репрессирует MIEP в недифференцированных моноцитах THP-1, но активирует MIEP в PMA-дифференцированных макрофагах, происходящих из THP-1 [55].

Недавняя работа также показала, что US28 снижает уровень c-fos во время задержки.Связывание с сайтом AP-1 внутри MIEP с помощью димеров fos/jun активирует MIEP, и, таким образом, при снижении c-fos US28 вызывает подавление MIEP посредством дополнительного механизма. Таким образом, обработка миелоидных клеток ингибитором c-fos снижала экспрессию литических генов при заражении ΔUS28 HCMV [56].

В совокупности ключевым механизмом, с помощью которого US28 поддерживает латентность в недифференцированных миелоидных клетках, является модулирование множественных клеточных сигнальных путей, что изменяет баланс активирующих и репрессивных факторов в MIEP, результатом чего является продвижение репрессивной структуры хроматина в MIEP и таким образом подавляют экспрессию гена IE.Напротив, эта супрессивная функция US28 не проявляется в дифференцированных миелоидных клетках и, таким образом, US28 не способствует репрессивной структуре хроматина в MIEP во время индуцированной дифференцировкой реактивации.

Нацеливание на US28 представляет собой новый способ нацеливания на латентный резервуар вируса

Латентное носительство HCMV в миелоидных клетках-предшественниках обеспечивает резервуар реактивируемого вируса, который не может быть уничтожен современными терапевтическими средствами. Случаи реактивации ЦМВ у пациентов с ослабленным иммунитетом могут вызвать серьезную заболеваемость и смертность, особенно в условиях трансплантации органов.Таким образом, очистка или уменьшение латентного резервуара у пациентов или доноров может быть способом уменьшить бремя ЦМВ-заболевания у реципиентов трансплантата.

Понимание роли генных продуктов, связанных с латентностью, позволяет выявить вирусные гены, которые должны экспрессироваться в латентном периоде и, таким образом, представляют собой потенциальные стратегии воздействия на латентно инфицированные клетки. Доказательством этого стало наблюдение, что UL138 снижает MRP1 на клеточной поверхности латентно инфицированных клеток, и, следовательно, токсин винкристин избирательно поглощается латентно инфицированными клетками [63].

US28 обладает отличным потенциалом для нацеливания на латентный резервуар, поскольку (1) US28 экспрессируется на клеточной поверхности во время латентности [48]; (2) рецепторы, связанные с G-белком, являются хорошо известными фармакологическими мишенями; (3) US28 управляет задержкой через MIEP. Действительно, US28 на поверхности латентно инфицированных клеток может быть мишенью для зависимого от антител лизинга аутологичными нейтрофилами, но HCMV частично избегает этого лизинга за счет подавления хемоаттрактантов нейтрофилов [64].

Одной из рассматриваемых стратегий нацеливания на US28 было связывание высокоаффинного лиганда для US28 с токсином.При связывании лиганда US28 интернализуется и, таким образом, доставляет токсин в латентно инфицированную клетку. Путем слияния части эндотоксина A Pseudomonas с CX3CL1 (также известным как фракталкин) был разработан такой белок слитого токсина (F49A-FTP) [65]. Поскольку US28 имеет более высокое сродство к CX3CL1, чем к нативному рецептору, F49A-FTP может избирательно убивать экспериментально и естественным образом латентные моноциты и уменьшать случаи реактивации in vitro [48]. Использование F49A-FTP для вымывания латентного резервуара в нормотермических солидных органах для трансплантации в настоящее время находится на стадии изучения.

Вторая стратегия основана на известной функции US28 во время задержки. US28 подавляет MIEP в миелоидных клетках, а обратный агонист VUF2274 ингибирует функцию US28 в латентном периоде, что приводит к реактивации [55]. Полная реактивация HCMV может быть нежелательной, поскольку HCMV кодирует многие иммунные эвазины в более поздние моменты времени [66, 67] и, таким образом, ускользает от естественного иммунного контроля со стороны Т- и NK-клеток. Транзиторную индукцию экспрессии гена ИЭ можно считать предпочтительной [68], поскольку до 5% Т-клеток CD8 + серопозитивных индивидуумов способны распознавать литический антиген ИЭ [69].Кроме того, поразительные данные исследований мышиного цитомегаловируса указывают на то, что антиген IE распознается цитотоксическими CD8 + Т-клетками [70, 71]. Интересно, что спорадическая индукция экспрессии гена IE наблюдается in vivo в легких инфицированных мышей [72, 73], и эти явления связывают с феноменом «инфляции памяти» Т-клеток [74]. Анализ первичных клеток человека in vitro показал, что ингибиторы HDAC могут временно индуцировать экспрессию IE в латентно инфицированных моноцитах, что позволяет аутологичным цитотоксическим Т-клеткам от серопозитивных доноров распознавать и уничтожать эти инфицированные клетки.Результатом является снижение латентного носительства в этой экспериментальной модели латентности [21]. Возможно, ингибитор US28, который частично блокирует опосредованную US28 супрессию MIEP, может кратковременно индуцировать ИЭ и обеспечивать распознавание цитотоксическими Т-клетками. Сейчас это изучается в нашей собственной лаборатории. Несколько групп также разрабатывают альтернативные ингибиторы US28 [75–77], которые могут обеспечить высокоселективную стратегию шока и уничтожения на основе US28 в условиях трансплантации.

Заключительные замечания

Молекулярное понимание латентного периода цитомегаловируса человека выявило пути и механизмы, которые могут быть терапевтически нацелены на снижение бремени ЦМВ-инфекции, связанной с реактивацией. Структура хроматина в MIEP имеет решающее значение для контроля латентности и реактивации, а воздействие на клеточные и вирусные факторы, включая US28, которые прямо или косвенно регулируют MIEP, является стратегией потенциального уменьшения латентного вирусного резервуара у пациентов.

Благодарности

Мы благодарим бывших и нынешних членов нашей исследовательской группы, а также Линду Тиг и Роя Уистона за техническую поддержку. Это исследование финансировалось Wellcome Trust (грант 109075/Z/15/A) и MRC (грант G0701279) и поддерживалось центром фенотипирования клеток Cambridge NIHR BRC.

Соблюдение этических норм

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Сноски

Эта статья является частью специального выпуска об иммунологическом импринтинге при хронической вирусной инфекции.

Примечание издателя

Springer Nature остается нейтральной в отношении юрисдикционных претензий в опубликованных картах и ​​институциональной принадлежности.

Ссылки

1. Taylor-Wiedeman J, Sissons JGP, Borysiewicz LK, Sinclair JH.Моноциты являются основным местом персистенции цитомегаловируса человека в мононуклеарных клетках периферической крови. Джей Ген Вирол. 1991; 72: 2059–2064. doi: 10.1099/0022-1317-72-9-2059. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]2. Мендельсон М., Монар С., Сиссонс П., Синклер Дж. Обнаружение эндогенного цитомегаловируса человека в CD34 + предшественниках костного мозга. Джей Ген Вирол. 1996;77:3099–3102. doi: 10.1099/0022-1317-77-12-3099. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]3. Кондо К., Сюй Дж., Моцарски Э.С. Экспрессия латентного гена цитомегаловируса человека в гранулоцитарно-макрофагальных предшественниках в культуре и у серопозитивных индивидуумов.Proc Natl Acad Sci USA. 1996; 93:11137–11142. doi: 10.1073/pnas.93.20.11137. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]4. Хан Г., Джорес Р., Мокарски Э.С. Цитомегаловирус остается латентным в общем предшественнике дендритных и миелоидных клеток. Proc Natl Acad Sci USA. 1998;95:3937–3942. doi: 10.1073/pnas.95.7.3937. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]5. Ривз М.Б., Синклер Дж.Х. Циркулирующие дендритные клетки, выделенные от здоровых серопозитивных доноров, являются местами реактивации цитомегаловируса человека in vivo.Дж Вирол. 2013;87:10660–10667. doi: 10.1128/ОВИ.01539-13. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]6. Пул Э., Джусс Дж. К., Кришна Б., Херре Дж., Чилверс Э. Р., Синклер Дж. Альвеолярные макрофаги, выделенные непосредственно от серопозитивных лиц, инфицированных цитомегаловирусом человека (ЦМВ), являются местами реактивации ЦМВ in vivo. J заразить Dis. 2015; 211:1936–1942. doi: 10.1093/infdis/jiu837. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]7. Ривз М.Б., МакЭри П.А., Ленер П.Дж., Сиссонс JGP, Синклер Дж.Х. Латентность, ремоделирование хроматина и реактивация цитомегаловируса человека в дендритных клетках здоровых носителей.Proc Natl Acad Sci. 2005; 102:4140–4145. doi: 10.1073/pnas.0408994102. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]8. Ривз М.Б., Ленер П.Дж., Сиссонс JGP, Синклер Дж.Х. Модель in vitro для регуляции латентности и реактивации цитомегаловируса человека в дендритных клетках путем ремоделирования хроматина. Джей Ген Вирол. 2005; 86: 2949–2954. doi: 10.1099/vir.0.81161-0. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]9. Forte E, Swaminathan S, Schroeder MW, Kim JY, Terhune SS, Hummel M. Фактор некроза опухоли альфа индуцирует реактивацию цитомегаловируса человека независимо от дифференцировки миелоидных клеток после посттранскрипционного установления латентности.МБио. 2018 г.: 10.1128/mBio.01560-18. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]10. Goodrum FD, Jordan CT, High K, Shenk T. Экспрессия генов цитомегаловируса человека во время инфекции первичных гемопоэтических клеток-предшественников: модель латентности. Proc Natl Acad Sci USA. 2002;99:16255–16260. doi: 10.1073/pnas.252630899. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]11. Ривз М.Б., Синклер Дж.Х. Анализ экспрессии латентного вирусного гена в естественных и экспериментальных латентных моделях цитомегаловируса человека и его корреляции с модификациями гистонов на латентном промоторе.Джей Ген Вирол. 2010;91:599–604. doi: 10.1099/vir.0.015602-0. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Седерберг-Науклер С., Фиш К.Н., Нельсон Дж.А. Реактивация латентного цитомегаловируса человека путем аллогенной стимуляции клеток крови здоровых доноров. Клетка. 1997; 91: 119–126. doi: 10.1016/S0092-8674(01)80014-3. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Гроувс И.Дж., Ривз М.Б., Синклер Дж.Х. Литическая инфекция пермиссивных клеток цитомегаловирусом человека регулируется внутренней «пре-немедленной-ранней» репрессией экспрессии вирусного гена, опосредованной посттрансляционной модификацией гистонов.Джей Ген Вирол. 2009;90:2364–2374. doi: 10.1099/vir.0.012526-0. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Бошарт М., Вебер Ф., Ян Г., Дорш-Хаслер К., Флекенштейн Б., Шаффнер В. Очень сильный энхансер расположен выше непосредственно раннего гена цитомегаловируса человека. Клетка. 1985; 41: 521–530. doi: 10.1016/S0092-8674(85)80025-8. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Нельсон Дж. А., Гроудин М. Транскрипционная регуляция основного раннего гена цитомегаловируса человека связана с индукцией гиперчувствительных к ДНКазе I сайтов.Мол Селл Биол. 1986; 6: 452–461. doi: 10.1128/MCB.6.2.452. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]16. Стински М.Ф., Исомура Х. Роль главного немедленного раннего энхансера цитомегаловируса при острой инфекции и реактивации из латентного периода. Мед Микробиол Иммунол. 2008; 197: 223–231. doi: 10.1007/s00430-007-0069-7. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Синклер Дж. Структура хроматина регулирует экспрессию генов цитомегаловируса человека во время латентного периода, реактивации и литической инфекции. Biochim Biophys Acta Gene Regul Mech.2010; 1799: 286–295. doi: 10.1016/J.BBAGRM.2009.08.001. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Мерфи Дж. К., Фишле В., Вердин Э., Синклер Дж. Х. Контроль экспрессии литического гена цитомегаловируса путем ацетилирования гистонов. EMBO J. 2002; 21: 1112–1120. doi: 10.1093/emboj/21.5.1112. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]19. Россетто К.С., Таррант-Элорза М., Пари Г.С. Цис- и транс-действующие факторы, вовлеченные в экспериментальную и естественную латентную инфекцию цитомегаловирусом человека CD14 (+) моноцитов и CD34 (+) клеток.PLoS Патог. 2013;9:e1003366. doi: 10.1371/journal.ppat.1003366. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]20. Раувель Б., Джанг С.М., Кассано М., Капопулу А., Барде И., Троно Д. Высвобождение цитомегаловируса человека из латентного состояния с помощью переключателя фосфорилирования KAP1/TRIM28. Элиф. 2015 г.: 10.7554/eLife.06068. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]21. Кришна Б.А., Лау Б., Джексон С.Е., Уиллс М.Р., Синклер Дж.Х., Пул Э. Временная активация литической экспрессии гена цитомегаловируса человека во время латентного периода позволяет цитотоксическим Т-клеткам убивать латентно инфицированные клетки.Научный доклад 2016; 6: 24674. doi: 10.1038/srep24674. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]22. Кью В., Юань Дж., Мейер Дж., Ривз М. Митоген и киназы, активируемые стрессом, действуют совместно с creb во время индукции немедленной и ранней экспрессии генов цитомегаловируса человека из латентного периода. PLoS Патог. 2014;10:e1004195. doi: 10.1371/journal.ppat.1004195. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]23. Нельсон Дж.А., Рейнольдс-Колер С., Смит Б.А. Негативная и позитивная регуляция коротким сегментом в 5′-фланкирующей области основного раннего гена цитомегаловируса человека.Мол Селл Биол. 1987; 7: 4125–4129. doi: 10.1128/MCB.7.11.4125. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]24. Синклер Дж., Сиссонс П. Скрытые и стойкие инфекции моноцитов и макрофагов. Интервирусология. 1996; 39: 293–301. doi: 10.1159/000150501. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. Sissons JGP, Bain M, Wills MR, Sinclair JH. Латентность и реактивация цитомегаловируса человека. J заразить. 2002; 44:73–77. doi: 10.1053/jinf.2001.0948. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 26. Лю Р., Бейли Дж., Сиссонс Дж.Г., Синклер Дж.Х.Фактор транскрипции YY1 связывается с негативными регуляторными элементами в основном непосредственном раннем энхансере/промоторе цитомегаловируса человека и опосредует репрессию в непермиссивных клетках. Нуклеиновые Кислоты Res. 1994; 22:2453–2459. doi: 10.1093/нар/22.13.2453. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]27. Райт Э., Бейн М., Тиг Л., Мерфи Дж., Синклер Дж. Репрессорный фактор Ets-2 рекрутирует гистоновую деацетилазу, чтобы заглушить немедленную и раннюю экспрессию генов цитомегаловируса человека в непермиссивных клетках.Джей Ген Вирол. 2005; 86: 535–544. doi: 10.1099/vir.0.80352-0. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 28. Бейн М., Мендельсон М., Синклер Дж. Репрессорный фактор Ets-2 (ERF) опосредует репрессию главного немедленно-раннего промотора цитомегаловируса человека в недифференцированных непермиссивных клетках. Джей Ген Вирол. 2003; 84: 41–49. doi: 10.1099/vir.0.18633-0. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Ривз М.Б., Комптон Т. Ингибирование воспалительной активности интерлейкина-6 посредством передачи сигналов протеинкиназы, регулируемой внеклеточным сигналом, киназой-митоген-активируемой, противодействует реактивации цитомегаловируса человека из дендритных клеток.Дж Вирол. 2011;85:12750–12758. doi: 10.1128/ОВИ.05878-11. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]31. Шнайдер М., Нахшон А., Кришна Б., Пул Э., Бошков А., Биньямин А. и др. Определение ландшафта транскрипции во время латентного периода цитомегаловируса с помощью секвенирования одноклеточной РНК. МБио. 2018 г.: 10.1128/mBio.00013-18. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]32. Ченг С., Кавинесс К., Бюлер Дж., Смити М., Николич-Жугич Дж., Гудрум Ф. Транскриптомная характеристика цитомегаловируса человека при естественной инфекции и экспериментальной латентности.Proc Natl Acad Sci USA. 2017; 114:E10586–E10595. doi: 10.1073/pnas.1710522114. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]33. Дженкинс С., Абендрот А., Слобедман Б. Новый вирусный транскрипт, гомологичный человеческому интерлейкину-10, экспрессируется во время латентной цитомегаловирусной инфекции человека. Дж Вирол. 2004; 78: 1440–1447. doi: 10.1128/ОВИ.78.3.1440-1447.2004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]34. Cheung AKL, Abendroth A, Cunningham AL, Slobedman B. Экспрессия вирусных генов во время установления латентной инфекции цитомегаловируса человека в миелоидных клетках-предшественниках.Кровь. 2006 г.: 10.1182/blood-2005-12-026682. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35. Гудрам Ф., Ривз М., Синклер Дж., Хай К., Шенк Т. Последовательности цитомегаловируса человека, экспрессированные у латентно инфицированных людей, способствуют развитию латентной инфекции in vitro. Кровь. 2007; 110:937–945. doi: 10.1182/blood-01-070078 2007. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]36. Саффер Р.Т., Пенкерт Р.Р., Калейта Р.Ф. Клеточный и вирусный контроль над начальными событиями экспериментальной латентности цитомегаловируса человека в клетках CD34+.Дж Вирол. 2010; 84: 5594–5604. doi: 10.1128/ОВИ.00348-10. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]37. Гровс И.Дж., Синклер Дж.Х. Нокдаун hDaxx в обычно непермиссивных недифференцированных клетках не делает возможной экспрессию генов цитомегаловируса человека непосредственно-ранняя. Джей Ген Вирол. 2007; 88: 2935–2940. doi: 10.1099/vir.0.83019-0. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 38. Вагенкнехт Н., Ройтер Н., Шерер М., Райхель А., Мюллер Р., Штаммингер Т. Вклад основных белков ND10 PML, hDaxx и Sp100 в регуляцию латентности и литической репликации цитомегаловируса человека в моноцитарной клеточной линии THP-1.Вирусы. 2015;7:2884–2907. doi: 10.3390/v7062751. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]39. Пул Э.Л., Кью В.Г., Лау Дж.Ч., Мюррей М.Дж., Стаммингер Т., Синклер Дж.Х. и др. Активность DeSUMOylase, кодируемая вирусом, необходима для реактивации цитомегаловируса из латентного состояния. Cell Rep. 2018; 24: 594–606. doi: 10.1016/j.celrep.2018.06.048. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]41. Ли С.Х., Олбрайт Э.Р., Ли Дж.Х., Джейкобс Д., Калейта Р.Ф. Клеточная защита от латентной колонизации нарушена белком UL138 цитомегаловируса человека.Научная реклама 2015;1:e1501164. doi: 10.1126/sciadv.1501164. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]42. Ким Дж. Х., Коллинз-Макмиллен Д., Бюлер Дж. К., Гудрам Ф. Д., Юрочко А. Д. Цитомегаловирус человека нуждается в передаче сигналов рецептора эпидермального фактора роста, чтобы войти и инициировать ранние этапы установления латентности в клетках-предшественниках CD34 + человека. Дж Вирол. 2017 г.: 10.1128/ОВИ.01206-16. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]43. Киз Л.Р., Харгетт Д., Соланд М., Бего М.Г., Россетто К.С., Алмейда-Порада Г. и др.Белок ЦМВ LUNA необходим для реактивации вируса из латентно инфицированных первичных клеток CD14+. ПЛОС Один. 2012;7:e52827. doi: 10.1371/journal.pone.0052827. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]44. Кроуфорд Л.Б., Ким Дж.Х., Коллинз-Макмиллен Д., Ли Б.Дж., Ландаис И., Хелд С. и др. Цитомегаловирус человека кодирует новый лиганд рецептора FLT3, необходимый для дифференцировки гемопоэтических клеток и реактивации вируса. МБио. 2018 г.: 10.1128/mBio.00682-18. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]45.Хамби М.С., О’Коннор К.М. Цитомегаловирус человека US28 важен для латентной инфекции гемопоэтических клеток-предшественников. Дж Вирол. 2016;90:2959–2970. doi: 10.1128/ОВИ.02507-15. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]46. Beisser PS, Laurent L, Virelizier J-LL, Michelson S. Ген хемокинового рецептора цитомегаловируса человека US28 транскрибируется в латентно инфицированных моноцитах THP-1. Дж Вирол. 2001; 75: 5949–5957. doi: 10.1128/ОВИ.75.13.5949-5957.2001. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]47.Харгетт Д., Шенк Т.Е. Экспериментальная латентность цитомегаловируса человека в CD14 + моноцитах. Proc Natl Acad Sci USA. 2010;107:20039–20044. doi: 10.1073/pnas.1014509107. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]48. Кришна Б.А., Списс К., Пул Э.Л., Лау Б., Фойгт С., Кледал Т.Н. и др. Воздействие на латентный резервуар цитомегаловируса с помощью противовирусного слитого токсинного белка. Нац коммун. 2017 г.: 10.1038/ncomms14321. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]49. Zhu D, Pan C, Sheng J, Liang H, Bian Z, Liu Y и др.Цитомегаловирус человека перепрограммирует гемопоэтические клетки-предшественники в иммуносупрессивные моноциты для достижения латентного периода. Нат микробиол. 2018;3:503–513. doi: 10.1038/s41564-018-0131-9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]50. Вомаске Дж., Нельсон Дж. А., Стреблоу Д. Н. Цитомегаловирус человека US28: функционально селективный рецептор, связывающий хемокины. Заразить мишени для наркотиков. 2009; 9: 548–556. doi: 10.2174/1871526097896. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]51. Ли С, Чунг Ю Х, Ли С.US28, кодируемый вирусом GPCR в качестве противовирусной мишени для цитомегаловирусной инфекции человека. Биомол тер. 2017;25:69–79. doi: 10.4062/biomolther.2016.208. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]52. Casarosa P, Bakker RA, Verzijl D, Navis M, Timmerman H, Leurs R, et al. Конститутивная передача сигналов хемокинового рецептора US28, кодируемого цитомегаловирусом человека. Дж. Биол. Хим. 2001; 276:1133–1137. doi: 10.1074/jbc.M008965200. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]53. Minisini R, Tulone C, Lüske A, Michel D, Mertens T, Gierschik P, et al.Конститутивное образование инозитолфосфата в инфицированных цитомегаловирусом фибробластах человека обусловлено экспрессией гомолога хемокинового рецептора pUS28. Дж Вирол. 2003; 77: 4489–4501. doi: 10.1128/jvi.77.8.4489-4501.2003. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]55. Кришна Б.А., Пул Э.Л., Джексон С.Е., Смит М.Дж., Уиллс М.Р., Синклер Дж.Х. Связанная с латентностью экспрессия человеческого цитомегаловируса US28 ослабляет клеточные сигнальные пути для поддержания латентной инфекции. МБио. 2017;8:e01754–e01717. дои: 10.1128/мБио.01754-17. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]56. Кришна Б.А., Хамби М.С., Миллер В.Е., О’Коннор К.М. (2019)Рецептор US28, связанный с G-белком цитомегаловируса человека, способствует задержке за счет ослабления c-fos. Proc Natl Acad Sci 2019. 10.1073/pnas.1816933116 [бесплатная статья PMC] [PubMed]57. Casarosa P, Waldhoer M, LiWang PJ, Vischer HF, Kledal T, Timmerman H, et al. Хемокины CC и CX3C по-разному взаимодействуют с N-концом рецептора US28, кодируемого цитомегаловирусом человека. Дж. Биол. Хим.2005; 280:3275–3285. doi: 10.1074/jbc.M407536200. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]58. Миллер В. Е., Загорски В. А., Бреннеман Д. Д., Эйвери Д., Миллер JLCC, О’Коннор К. М. US28 является мощным активатором фосфолипазы C во время инфицирования HCMV клинически значимых клеток-мишеней. ПЛОС Один. 2012;7:e50524. doi: 10.1371/journal.pone.0050524. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]59. Вальдхёр М. , Кледал Т.Н., Фаррелл Х., Шварц Т.В. Рецепторы мышиного цитомегаловируса (CMV) M33 и человеческого CMV US28 проявляют сходную конститутивную сигнальную активность.Дж Вирол. 2002; 76: 8161–8168. doi: 10.1128/ОВИ.76.16.8161-8168.2002. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]60. Maussang D, Langemeijer E, Fitzsimons CP, Stigter-van Walsum M, Dijkman R, Borg MK, et al. Хемокиновый рецептор US28, кодируемый цитомегаловирусом человека, способствует ангиогенезу и образованию опухолей посредством циклооксигеназы-2. Рак Рез. 2009; 69: 2861–2869. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-08-2487. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 61. ДеЯнг К.Л., Рэй М.Е., Су Ю.А., Анзик С.Л., Джонстон Р.В., Трапани Дж.А. и др.Клонирование нового члена семейства генов, индуцируемых интерфероном человека, связано с контролем онкогенности в модели меланомы человека. Онкоген. 1997; 15: 453–457. doi: 10.1038/sj.onc.1201206. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]62. Майлз Т.Ф., Списс К., Джуд К.М., Цуцуми Н., Бург Дж. С., Ингрэм Дж.Р. и др. Вирусный GPCR US28 может сигнализировать в ответ на агонисты хемокинов почти неограниченной структурной дегенерации. Элиф. 2018 г.: 10.7554/eLife.35850. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]63.Weekes MP, Tan SYL, Poole E, Talbot S, Antrobus R, Smith DL, et al. Связанная с латентностью деградация переносчика лекарств MRP1 во время латентной цитомегаловирусной инфекции человека. Наука. 2013; 340:199–202. doi: 10.1126/science.1235047. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]64. Старейшина Э., Кришна Б., Уильямсон Дж., Аслам Й., Фарахи Н., Вуд А. и др. Моноциты, латентно инфицированные цитомегаловирусом человека, избегают уничтожения нейтрофилов. IScience. 2019 г.: 10.1016/J.ISCI.2019.01.007. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]65.Spiess K, Jeppesen MG, Malmgaard-Clausen M, Krzywkowski K, Dulal K, Cheng T, et al. Рационально сконструированный токсин на основе хемокина, нацеленный на рецептор US28, связанный с вирусным G-белком, эффективно ингибирует цитомегаловирусную инфекцию in vivo. Proc Natl Acad Sci USA. 2015; 112:8427–8432. doi: 10.1073/pnas.15093. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]66. Патель М., Влахава В.М., Forbes SK, Fielding CA, Stanton RJ, Wang ECY, NK с кодировкой HCMV. Модуляторы: уроки генетической изменчивости in vitro и in vivo.Фронт Иммунол. 2018;9:2214. doi: 10.3389/fimmu.2018.02214. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]67. Норьега В., Редманн В., Гарднер Т., Торторелла Д. Различные стратегии уклонения от иммунитета цитомегаловирусом человека. Иммунол Рез. 2012;54:140–151. doi: 10.1007/s12026-012-8304-8. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]68. Уиллс М.Р., Пул Э., Лау Б., Кришна Б., Синклер Дж.Х. Иммунология латентности цитомегаловируса человека: можно ли устранить латентную инфекцию с помощью новых иммунотерапевтических стратегий? Селл Мол Иммунол.2015;12:128–138. doi: 10.1038/cmi.2014.75. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]69. Хан Н., Кобболд М., Кинан Р., Мосс П.А.Х. Сравнительный анализ ответов Т-клеток CD8 + против белков человеческого цитомегаловируса pp65 и немедленно раннего 1 показывает сходство в частоте предшественников, олигоклональности и фенотипе. J заразить Dis. 2002; 185:1025–1034. дои: 10.1086/339963. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]70. Reddehase MJ, Koszinowski UH. Значение немедленной ранней экспрессии генов герпесвируса в клеточном иммунитете к цитомегаловирусной инфекции.Природа. 1984; 312: 369–371. дои: 10.1038/312369a0. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]71. Simon CO, Holtappels R, Tervo H-M, Bohm V, Daubner T, Oehrlein-Karpi SA, et al. Т-клетки CD8 контролируют латентность цитомегаловируса за счет эпитоп-специфического восприятия реактивации транскрипции. Дж Вирол. 2006; 80: 10436–10456. doi: 10.1128/ОВИ.01248-06. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]72. Grzimek NKA, Dreis D, Schmalz S, Reddehase MJ, Random Случайная, асинхронная и асимметричная транскрипционная активность фланкирующих энхансер основных генов ie1/3 и ie2 во время латентного периода мышиного цитомегаловируса в легких.Дж Вирол. 2001; 75: 2692–2705. doi: 10.1128/ОВИ.75.6.2692-2705.2001. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]73. Курц С.К., Рапп М., Стеффенс Х.П., Гржимек Н.К., Шмальц С., Реддехейз М.Дж. Фокальная транскрипционная активность мышиного цитомегаловируса во время латентного периода в легких. Дж Вирол. 1999; 73: 482–494. doi: 10.1128/ОВИ.73.1.482-494.1999. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]74. Seckert CK, Griessl M, Büttner JK, Scheller S, Simon CO, Kropp KA, et al. Вирусная латентность вызывает «инфляцию памяти»: объединяющая гипотеза, связывающая два признака цитомегаловирусной инфекции.Мед Микробиол Иммунол. 2012; 201: 551–566. doi: 10.1007/s00430-012-0273-y. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]75. Heukers R, Fan TS, de Wit RH, van Senten JR, De Groof TWM, Bebelman MP, et al. Конститутивная активность кодируемого вирусом хемокинового рецептора US28 ускоряет рост глиобластомы. Онкоген. 2018; 37:4110–4121. doi: 10.1038/s41388-018-0255-7. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]76. Люкманн М., Амаранди Р.М., Папаргири Н., Якобсен М.Х., Кристиансен Э., Дженсен Л. Дж. и др.Основанное на структуре открытие новых низкомолекулярных лигандов US28 с различными механизмами действия. Chem Biol Drug Des. 2017; 89: 289–296. doi: 10.1111/cbdd.12848. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]77. Vischer HF, Hulshof JW, Hulscher S, Fratantoni SA, Verheij MHP, Victorina J, et al. Идентификация новых аллостерических непептидергических ингибиторов кодируемого цитомегаловирусом человека хемокинового рецептора US28. Биоорг Мед Хим. 2010;18:675–688. doi: 10.1016/j.bmc.2009.11.060. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

Рецептор US28, связанный с G-белком цитомегаловируса человека, способствует латентности путем ослабления c-fos / латентное состояние, представляющее небольшую угрозу для здорового человека.Однако, когда иммунная система человека серьезно нарушена, HCMV может повторно активироваться до своего активного/литического состояния, что приводит к распространению вируса и заболеванию, которое часто приводит к летальному исходу. Биологические механизмы, лежащие в основе латентного периода и реактивации HCMV, остаются плохо изученными.

Здесь мы показываем, что кодируемый вирусом рецептор, связанный с G-белком (GPCR) US28 , способствует установлению и поддержанию вирусной латентности. Кроме того, мы обнаружили, что US28 модулирует белки клетки-хозяина для подавления вирусных процессов, связанных с активной/литической репликацией, тем самым способствуя латентной инфекции.Эта работа обеспечивает механизм, с помощью которого HCMV модулирует среду клетки-хозяина в свою пользу.

Ключевые слова:

Ключевые слова: цитомегаловирус, HCMV, латентность, US28, герпесвирус . Ранее мы сообщали, что для успешной латентной инфекции необходим гомолог US28 рецептора, сопряженного с G-белком (GPCR), кодируемого HCMV.Теперь мы показываем, что белок US28 (pUS28), обеспечивающий в транс-, дополняет литический фенотип US28Δ в миелоидных клетках, предполагая, что устойчивая экспрессия US28 необходима для долгосрочной латентности. Кроме того, экспрессия pUS28 во время инфекции репрессирует транскрипцию с главного непосредственно раннего промотора (MIEP) в течение 24 часов. Однако эта репрессия сохраняется только в присутствии постоянной экспрессии pUS28, представленной в транс . Наши данные также показывают, что pUS28-опосредованная передача сигналов ослабляет как экспрессию, так и фосфорилирование клеточного fos (c-fos), субъединицы фактора транскрипции AP-1, для подавления транскрипции, управляемой MIEP.AP-1 связывается с MIEP и способствует литической репликации, и в соответствии с этим мы обнаружили, что инфекция US28Δ приводит к увеличению связывания AP-1 с MIEP по сравнению с латентной инфекцией WT. Фармакологическое ингибирование c-fos репрессирует MIEP во время инфекции US28Δ до уровней, сходных с теми, которые мы наблюдаем во время латентной инфекции WT. В совокупности наши данные показывают, что US28 необходим как для установления, так и для длительного поддержания латентности HCMV, которая модулируется, по крайней мере частично, путем подавления функционального связывания AP-1 с MIEP.

Цитомегаловирус человека (HCMV), β-герпесвирус, может инфицировать широкий спектр типов клеток, включая недифференцированные миелоидные клетки, которые представляют собой установленный естественный очаг латентной инфекции (1, 2). Эта латентная инфекция лежит в основе пожизненной персистирующей инфекции HCMV, присутствующей примерно у 50–75% населения (3). Хотя здоровые люди, инфицированные HCMV, преимущественно бессимптомны, латентная литическая реактивация вызывает серьезные осложнения для здоровья и часто приводит к летальному исходу у пациентов с иммунодефицитом (4, 5).Угроза реактивации HCMV у пациентов с ослабленным иммунитетом наиболее остра у реципиентов трансплантата (6, 7). В то время как литическая инфекция HCMV снижается и часто контролируется противовирусной терапией, эти методы лечения нацелены на литическую фазу инфекции, проблематично токсичны и становятся менее эффективными из-за появления лекарственно-устойчивых штаммов (8, 9). Таким образом, определение новых средств предотвращения реактивации вируса будет иметь значительные клинические преимущества.

Латентная инфекция определяется как сохранение вирусных геномов в отсутствие продукции инфекционного вириона в сочетании со способностью реактивировать литическую репликацию с образованием инфекционного вируса при наличии надлежащих внеклеточных и/или экологических сигналов (10). Поскольку ЦМВ очень специфичны для хозяина, исследования латентности ЦМВ в значительной степени ограничиваются моделями, использующими клетки человека, включая первичные гемопоэтические клетки ex vivo, такие как моноциты (11–13) и CD34 + гемопоэтические клетки-предшественники (ГПК) (14–16). ), а также модельные системы in vitro (17–23), такие как клетки Kasumi-3 (22) и эмбриональные стволовые клетки (23). Недавние достижения в модельных системах гуманизированных мышей позволили проводить исследования HCMV in vivo (24–28). Определение латентного транскриптома HCMV представляет собой ключевую область продолжающихся исследований, и в настоящее время точные роли многих генов, связанных с латентностью, все еще остаются неясными.Однако роль играют такие гены, как UL135 , UL138 , US28 , LAcmvIL-10 (гомолог IL-10 HCMV, связанный с латентностью), латентный уникальный природный антиген ( LUNA 54 a ) и в поддержании латентности HCMV и последующей реактивации (29). HCMV также манипулирует клеточными факторами для поддержания латентной инфекции, включая клеточные микроРНК (30), экспрессию белков клеточной поверхности (31–34) и клеточный секретом (35). Хроматинизация основного непосредственно раннего промотора (MIEP) во время латентного периода способствует обеспечению продолжительного молчания вирусной транскрипции и установлению латентного периода (36), но как это происходит, все еще исследуется.

Ген HCMV US28 транскрибируется во время как литической, так и латентной инфекции, во время которой белок способствует сохранению латентности в недифференцированных миелоидных клетках (37, 38). Белок, кодируемый US28 (pUS28), является одним из четырех рецепторов, связанных с G-белком (GPCR), кодируемых геномом HCMV (39), и является мощным сигнальным белком в контексте литической инфекции (40). pUS28 встраивается в зрелую вирусную частицу (37), а транскрипты экспрессируются как во время экспериментальной (11, 15, 37, 38, 41–44), так и естественной латентности (42, 45, 46). Хотя ясно, что pUS28 необходим для латентности HCMV (37, 38), остается неизвестным, необходим ли этот белок для установления и/или поддержания латентности. Кроме того, временная экспрессия pUS28 в клетках THP-1, которая поддерживает латентность HCMV, репрессирует MIEP в репортерных анализах, фенотип, который опосредуется передачей сигналов pUS28 (38). Однако точный механизм, с помощью которого достигается направленная US28 репрессия MIEP в контексте вирусной латентности, остается неясным. В этом текущем исследовании мы сообщаем, что pUS28 функционирует как для установления, так и для поддержания вирусной латентности.Кроме того, наши данные показывают, что pUS28 ослабляет клеточный fos (c-fos), компонент комплекса фактора транскрипции AP-1, который связывается с MIEP во время литической репликации. Наши данные показывают, что опосредованное pUS28 ослабление активации c-fos приводит к снижению связывания AP-1 с MIEP. Вместе наши результаты раскрывают механизм, с помощью которого pUS28 взаимодействует с клеткой-хозяином, чтобы заглушить транскрипцию, управляемую MIEP, и обеспечить латентность вируса.

Результаты

Экзогенная экспрессия pUS28 восстанавливает литический фенотип роста в US28Δ-инфицированных миелоидных клетках-предшественниках.

Чтобы понять роль US28 в установлении и/или поддержании латентного периода, мы трансдуцировали клетки THP-1 лентивирусной конструкцией (pSLIK-US28-3xF), которая обеспечивает индуцируемую экспрессию pUS28, слитого с C- концевая эпитопная метка с тройным флагом. Сначала мы оценили эффективность экспрессии pUS28 в этой системе, обрабатывая клетки THP-1-pSLIK-US28-3xF или THP-1-pSLIK-hygro с доксициклином или без него, а затем собирали клетки в течение 24 часов. Мы обнаружили экспрессию pUS28 в течение 1 часа после индукции, при этом наиболее устойчивая экспрессия наблюдалась через 24 часа после обработки.Важно отметить, что экспрессия pUS28 жестко регулируется в этой индуцируемой системе, поскольку мы не наблюдали pUS28 в отсутствие DOX (10). Кроме того, чтобы понять кинетику деградации pUS28 в этой системе, мы обработали клетки THP-1-pSLIK-US28-3xF DOX в течение 24 часов (день 0), затем промыли клетки, чтобы удалить DOX, и собирали эти клетки каждые 2 дня в течение 6 дней. для мониторинга уровней pUS28. Наши результаты показывают, что pUS28 значительно разлагается через 2 дня после удаления DOX и не обнаруживается к 4 дням (10).

Непрерывная экспрессия pUS28 дополняет литический фенотип после инфицирования US28Δ. ( A ) Клетки THP-1 трансдуцировали THP-1-pSLIK-hygro (pSLIK) или THP-1-pSLIK-US28-3xF (pSLIK-US28-3xF) и обрабатывали (+) или без (-) DOX (1 мкг/мл) для индукции экспрессии pUS28. Клетки собирали в указанные моменты времени после обработки. Экспрессию pUS28 определяли с помощью иммуноблота с использованием эпитопной метки FLAG. ( B ) Клетки THP-1-pSLIK-US28-3xF обрабатывали DOX в течение 24 часов и собирали для подтверждения экспрессии pUS28 (0 d).Оставшиеся клетки промывали в PBS и культивировали в отсутствие ДОКС в течение всего эксперимента. Образцы клеток брали в указанные дни после обработки, а затем все образцы подвергали иммуноблотингу на pUS28 с использованием эпитопной метки. ( A и B ). В качестве контроля (cntrl) клетки NuFF-1 инфицировали US28-3xF (множественность = 0,5) и собирали клеточные лизаты через 96 ч после инфицирования. Тубулин показан в качестве контроля загрузки. Обратите внимание, что из-за интенсивности этого контрольного лизата в A показано более короткое воздействие, обозначенное черной линией.( C ) Клетки THP-1-pSLIK-US28-3xF обрабатывали без (-; темно-синий) или (+; светло-синий) DOX в течение 24 ч, а затем инфицировали WT или US28Δ (множественность = 1,0). DOX пополняли каждые 48 часов, и клетки собирали через 6 dpi для экспрессии UL123 с помощью RT-qPCR. Образцы нормализовали до GAPDH , и каждый образец анализировали в трех повторностях. Планки погрешностей указывают SD. Статистическую значимость рассчитывали с использованием критерия Уэлча t ; *** Р < 0.001.

Ранее мы показали, что делеция ORF US28 приводит к литической, а не латентной инфекции как Kasumi-3, так и CD34 + HPC (37). Таким образом, чтобы определить, может ли pUS28, представленный в транс-, дополнить этот фенотип, мы заразили клетки THP-1-pSLIK-US28-3xF в присутствии или в отсутствие DOX либо TB40/E mCherry (WT), либо TB40/E. mCherry -US28Δ (US28Δ). Мы собрали клетки через 7 дней после заражения (dpi) и оценили экспрессию вирусного литического гена ( UL123 ), поскольку это служит индикатором уровня активности MIEP и, таким образом, является прокси для различения латентного и литического фенотипа.Действительно, мы обнаружили, что DOX-индуцированные клетки THP-1-pSLIK-US28-3xF, инфицированные US28Δ, приводили к сходным уровням уровней транскриптов UL123 по сравнению с инфекциями WT (). Это открытие предполагает, что экспрессия pUS28 помогает поддерживать подавление экспрессии вирусных литических генов.

Экспрессия pUS28 во время заражения не поддерживает репрессию MIEP.

Наши предыдущие результаты показали, что pUS28 включается в зрелую вирусную частицу и доставляется в клетки Kasumi-3 при инфицировании (37).Таким образом, мы предположили, что pUS28, доставляемый вирионом, может действовать на ранней стадии постинфекции, помогая установлению латентной инфекции в миелоидных клетках. Чтобы проверить, может ли доставленный вирион pUS28 устанавливать и/или поддерживать латентные инфекции, мы создали рекомбинантный вирус, дополненный pUS28, который включает pUS28 в вирион, но не имеет ORF US28 (TB40/E mCherry -US28 comp ). ; US28 comp ) путем выращивания US28Δ на экспрессирующей pUS28 клеточной линии фибробластов ().Мы подтвердили, что вирус US28 comp включает pUS28 в вирион () и что он не экспрессирует мРНК de novo US28 после инфицирования клеток NuFF-1 (). Мы заметили, что экспрессия pUS28 незначительно ниже в вирусе US28 comp по сравнению с вирионом US28-3xF, включающим pUS28 (), что может быть связано с уровнями экспрессии pUS28 в комплементарной клеточной линии. Тем не менее, эти данные показывают, что US28 comp включает pUS28 в зрелую вирусную частицу, но не может продуцировать pUS28 de novo при последующем инфицировании.

US28 комп. включает pUS28 в свой вирион, но не экспрессирует US28 после инфицирования. ( A ) US28Δ выращивали на клетках NuFF-pBABE-US28-3xF. Бесклеточный вирус был выделен и назван US28 comp . ( B ) Лизаты из клеток NuFF-1, инфицированных TB40/E- mCherry -US28-3xF (US28-3xF; ​​moi = 0,5, 96 ч после заражения, 15 мкг; контроль), ложно инфицированные клетки NuFF-1 (30 мкг; NuFF) или клетки NuFF-1, стабильно трансдуцированные либо pBABE-US28-3xF (30 мкг; NuFF-pBABE-US28-3xF), либо pBABE (30 мкг; NuFF-pBABE), оценивали экспрессию pUS28 с помощью иммуноблота. с использованием антитела, направленного на эпитопную метку FLAG.Тубулин показан в качестве контроля загрузки. ( C ) Вирус US28 comp был получен путем инфицирования NuFF-pBABE-US28-3xF вирусом US28Δ. В качестве контроля для ассоциированного с вирионом pUS28 клетки NuFF-1 инфицировали US28-3xF. Бесклеточный вирус US28 comp или вирус US28-3xF очищали с помощью сорбитовой подушки, а pUS28 определяли с помощью иммуноблота для эпитопной метки FLAG. Клеточные лизаты (15 мкг) из клеток NuFF-1, инфицированных US28-3xF (moi = 0,5, 96 hpi), показаны в качестве контроля (cntrl). Образцы также зондировали антителами, направленными против вирусных белков IE1 и pp71, а также клеточного тубулина.( D ) Клетки Kasumi-3 инфицировали WT, US28Δ или US28 comp с множественностью 1,0 TCID 50 на клетку и собирали 7 dpi. Экспрессию гена US28 определяли количественно с помощью RT-qPCR с использованием праймеров, которые амплифицируют US28 ( SI, Приложение , Таблица S1). Образцы нормализовали до GAPDH , и каждый образец анализировали в трех повторностях. Планки погрешностей указывают SD. Статистическую значимость рассчитывали с использованием двустороннего дисперсионного анализа и апостериорного анализа Даннета относительно WT в каждый момент времени; *** Р < 0.001.

Используя этот комплементарный вирус, мы спросили, способен ли доставленный вирион pUS28 подавлять экспрессию литического гена в сочетании с нашими клетками THP-1, сверхэкспрессирующими US28. С этой целью мы обработали THP-pSLIK-US28-3xF с DOX или без него, а затем заразили их WT, US28Δ или US28 comp и либо продолжали лечение DOX в течение 12 дней, либо удалили лечение DOX после заражения. Мы обнаружили, что низкая экспрессия UL123 коррелирует с поддержанием экспрессии pUS28 либо при лечении DOX, либо при инфицировании вирусом WT.Однако в культурах, в которых pUS28 не экспрессировался непрерывно в течение всего эксперимента, экспрессия UL123 была значительно выше (1). Используя UL123 в качестве показателя активности MIEP, это демонстрирует, что экспрессия pUS28 должна поддерживаться для поддержания репрессии транскрипции, управляемой MIEP, во время инфицирования моноцитарных клеток HCMV. Коррелируя с этими данными, экспрессия UL99 , гена HCMV, связанного с поздней литической инфекцией, следовала схеме, сходной с таковой для UL123 (10).Мы также оценили экспрессию мРНК UL138 () и, что более важно, соотношение экспрессии мРНК UL138 / UL123 (22, 37), чтобы выявить те культуры, которые благоприятствуют латентному профилю транскрипции (высокое соотношение UL138 / UL123 ) от тех, которые способствуют литическому транскрипционному профилю (низкое соотношение UL138 / UL123 ). Отношения UL138 / UL123 для клеток, инфицированных US28Δ- и US28 comp , которые культивировали в отсутствие экзогенной экспрессии pUS28, были значительно ниже, чем в тех же культурах, которые получали DOX после инфицирования, а также WT-. инфицированные клетки, независимо от лечения ().Важно отметить, что лечение DOX не изменяет экспрессию вирусных генов ( SI, Приложение , рис. S1). В совокупности эти данные доказывают, что pUS28, доставляемый вирионом, или pUS28, экспрессируемый только во время инфекции, не может поддерживать супрессию транскрипции литического гена.

Вирион-доставляемый pUS28 не поддерживает подавление транскрипции литического гена. THP-1-pSLIK-US28-3xF обрабатывали (+) или без (-) DOX (1 мкг/мл) для индукции экспрессии pUS28 (преинфекция), а затем инфицировали WT (синий), US28Δ (зеленый) или US28 комп. (серый) (мой = 1.0). Зараженные клетки промывали через 2 часа после заражения и культивировали в присутствии (+) или в отсутствие (-) DOX, как указано (постинфекция), при этом культуры, получавшие постинфекционный DOX, пополняли каждые 48 часов. Клетки собирали 12 DPI и ( A ) UL123 , ( B ) UL99 , ( C ) UL138 , а ( D ) Соотношение UL138 / UL123 Выражение были измерены с помощью RT-qPCR. Образцы нормализовали до GAPDH и анализировали в трех повторностях.Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а статистическую значимость рассчитывали с использованием однофакторного дисперсионного анализа и апостериорного анализа Тьюки; * Р < 0,05, *** Р < 0,001.

Экспрессия pUS28 приводит к подавлению транскрипции, управляемой MIEP.

Основываясь на наших вышеприведенных данных, мы предположили, что функция pUS28 подавляет MIEP как в ранние моменты времени после заражения для установления латентного периода, так и во время инфекции для поддержания латентного периода. Чтобы проверить это, мы предварительно обработали клетки THP-1-pSLIK-US28-3xF с DOX или без него в течение 48 часов, чтобы вызвать экспрессию pUS28. Затем мы инфицировали эти клетки либо WT, либо US28Δ [множественность заражения (множественность) = 1,0] и культивировали клетки в течение 7 дней, с продолжением обработки DOX или без нее. Затем клетки промывали и обработку DOX либо поддерживали, либо отменяли для каждой культуры, как указано. Мы наблюдали, что непрерывная экспрессия pUS28 на протяжении инфекции поддерживала репрессию MIEP, что измерялось с помощью UL123 для WT-инфицированных клеток по сравнению с US28Δ-инфицированными клетками, культивируемыми в присутствии DOX (4). Это открытие согласуется с предыдущим сообщением, в котором показано, что временная экспрессия pUS28 репрессирует репортерную конструкцию MIEP (38).Во-вторых, удаление DOX-индуцированной экспрессии pUS28 через 7 дней лечения привело к дерепрессии транскрипции UL123 к концу анализа на 14-й день (14), тем самым подтверждая потребность в pUS28 для поддержания репрессии транскрипции, управляемой MIEP. Наконец, мы наблюдали, что введение DOX-индуцированной экспрессии pUS28 в течение последних 7 дней в US28Δ-инфицированных клетках, первоначально культивируемых в отсутствие DOX, приводит к промежуточному фенотипу (), предполагая, что введение DOX-индуцированной экспрессии pUS28 позже в инфекция может подавлять транскрипцию, управляемую MIEP.

Устойчивая экспрессия pUS28 подавляет экспрессию литического гена. Клетки THP-1-pSLIK-US28-3xF обрабатывали (+) или без (-) DOX (1 мкг/мл) в течение 48 ч, чтобы вызвать экспрессию pUS28, а затем инфицировали WT (синий) или US28Δ (зеленый) (множество = 1,0). Клетки культивировали в течение 7 дней, в течение которых клетки поддерживали в исходных условиях обработки (первые 7 дней). Через 7 dpi клетки промывали и обрабатывали (+) или без (-) DOX (последние 7 дней). Общая РНК была собрана и ( A ) UL123 , ( B ) UL99 , ( C ) UL138 , а также ( D ) Соотношение UL138 / UL123 Выражение было измерено с помощью RT-qPCR.Образцы нормализовали до GAPDH и оценивали в трех повторностях. Столбики погрешностей указывают стандартное отклонение и значимость, рассчитанные с использованием однофакторного дисперсионного анализа и апостериорного анализа Даннета; * Р < 0,05, *** Р < 0,001.

Мы также оценили экспрессию UL99 и обнаружили, что этот ген также репрессирован в ответ на экспрессию pUS28 (). Интересно, что когда экспрессия pUS28 индуцируется обработкой DOX в течение первых 7 дней инфекции с последующей отменой DOX, экспрессия мРНК UL99 увеличивается, хотя она не достигает уровней, которые мы наблюдали в отсутствие DOX-индуцированной экспрессии pUS28.В соответствии с UL123 введение DOX-индуцированной экспрессии pUS28 только в течение последних 7 дней инфекции приводит к снижению экспрессии мРНК UL99 (). Взятые вместе, эти данные позволяют предположить, что потеря экспрессии pUS28 приводит к дерепрессии управляемой MIEP экспрессии UL123 , что приводит к индукции литического жизненного цикла, включая экспрессию продуктов поздних генов. Более того, оценка экспрессии мРНК UL138 () и, что более важно, соотношения экспрессии мРНК UL138 / UL123 (22, 37) подтвердила корреляцию между теми культурами, которые благоприятствуют латентному профилю транскрипции (высокий UL138 / UL123). ) по сравнению с теми, которые способствуют литическому транскрипционному профилю (низкое соотношение UL138 / UL123 ) ().Кроме того, pUS28 не может подавлять транскрипцию литического гена в дифференцированных клетках THP-1, в которых вирус литически реплицируется (47) ( SI, Приложение , рис. S2 и S3), что позволяет предположить, что этот эффект специфичен для недифференцированных клеток. Вместе эти данные предполагают, что pUS28 подавляет литическую транскрипцию в клетках, поддерживающих латентность.

pUS28 подавляет транскрипцию MIEP в моменты времени, соответствующие установлению латентной инфекции в клетках Kasumi-3.

Обнаружив, что эктопическая экспрессия pUS28 подавляет экспрессию UL123 и UL99 в клетках THP-1, мы задались вопросом, играет ли pUS28 роль в подавлении транскрипции литического гена во время латентной инфекции клеток Kasumi-3, системы культивирования, которая обеспечивает нам возможность оценить как функциональную латентность, так и реактивацию (22). Мы спросили, способен ли доставленный вирион pUS28 подавлять экспрессию литического гена в контексте инфекции и способствует ли pUS28 установлению латентности. Мы заразили клетки Kasumi-3 вирусами WT, US28Δ или US28 comp (множественность = 1,0) и измерили экспрессию UL123 , UL99 , UL138 и UL138 5,23 /1 Во-первых, мы наблюдали всплеск экспрессии мРНК UL123 и UL99 после инфицирования WT, пик которого достигал 3 dpi (), как ранее наблюдали другие (11, 15, 48).Экспрессия гена UL123 и UL99 была ниже в клетках Kasumi-3, инфицированных вирусами WT или US28 comp в этот момент времени (), что позволяет предположить, что pUS28, доставляемый вирионом, оказывает репрессивное действие на литические транскрипты в ранние моменты времени после заражения .

pUS28 подавляет экспрессию UL123 и UL99 в инфицированных клетках Kasumi-3 в ранние сроки латентной инфекции. Клетки Kasumi-3 были инфицированы WT (синий), US28Δ (зеленый) или US28 comp (серый) (множественность = 1.0) и отсортированы по mCherry-положительным клеткам с разрешением 1 dpi. Затем клетки собирали при указанном dpi. ( A ) UL123 , ( B ) UL99 , ( C ) UL138 , а ( D ) Соотношение UL138 / EL123 Выражение было измерено RT-QPCR . Образцы нормализовали до GAPDH и анализировали в трех повторностях. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение, а статистическую значимость рассчитывали с использованием двустороннего дисперсионного анализа и апостериорного анализа Даннета по отношению к вирусу дикого типа в каждый момент времени; * P < 0.05.

После этого первоначального всплеска экспрессии мРНК транскрипция этих генов снизилась в клетках, инфицированных WT, по сравнению с клетками Kasumi-3, инфицированными US28Δ или US28 comp . Кроме того, экспрессия UL123 стабилизировалась в клетках, инфицированных US28Δ, на уровне экспрессии, который выше, чем в клетках, инфицированных WT (), что свидетельствует о том, что pUS28 подавляет транскрипцию литического гена в ранние сроки после заражения клеток Kasumi-3, временами совместимую с установлением латентности. Кроме того, эти данные предполагают, что продолжающаяся экспрессия pUS28 репрессирует транскрипцию литического гена, что способствует поддержанию латентности. Подтверждая эту гипотезу, pUS28, доставляемый вирусом US28 comp , способен подавлять экспрессию UL123 и UL99 в ранние сроки после заражения (WT против US28 comp при 3 dpi), но не смог подавить эти литические гены. продукты от 6 dpi и далее (), предполагая, что репрессия уменьшается после деградации доставленного вириона pUS28.Наконец, экспрессия UL138 () и, что более важно, соотношение UL138 / UL123 было значительно ниже в клетках, инфицированных US28Δ- или US28 comp , по сравнению с WT-инфицированными клетками Kasumi-3 с 6 dpi до продолжительность эксперимента, что подтверждает вывод о том, что эти культуры демонстрируют более литический фенотип (). В целом, эти данные свидетельствуют о том, что pUS28 репрессирует транскрипцию, управляемую MIEP, что помогает как устанавливать, так и поддерживать латентность.

pUS28 Подавление MIEP снижает производство вирусов.

Наши данные показывают, что pUS28 подавляет транскрипцию литического гена в клетках, поддерживающих латентность вируса. Чтобы определить, помогает ли pUS28 в установлении и поддержании латентной инфекции, мы воспользовались моделями латентности CD34 + HPC, полученными из первичной пуповинной крови in vitro и ex vivo. Во-первых, мы заразили клетки Kasumi-3 WT, US28Δ или US28 comp (множественность = 1,0) и измерили продукцию инфекционных частиц с помощью анализа экстремального разведения (ELDA) путем совместного культивирования с фибробластами, отбирая образцы каждые 3 дня на дюйм в течение 12 дней. .Наши результаты показывают, что клетки Kasumi-3, инфицированные US28 comp , демонстрируют фенотип, аналогичный фенотипу клеток Kasumi-3, инфицированных WT, до 6 dpi, после чего инфекции US28 comp обнаруживают промежуточный фенотип, высвобождая значительно больше вируса, чем Инфекции WT, указывающие на неспособность поддерживать латентность (). Чтобы подтвердить эти результаты в типе клеток, который представляет собой естественное место латентности HCMV, мы заразили CD34 + HPC, полученные из пуповинной крови, WT, US28Δ или US28 comp (множественность = 2.0) и культивировали клетки в течение 12 дней в условиях, способствующих латентности. Затем мы собрали клетки для анализа ELDA на наивных фибробластах, как указано выше. Мы обнаружили, что CD34 + HPC, инфицированные US28 comp , продуцируют инфекционные вирионы до уровней, аналогичных тем, которые мы наблюдаем в US28Δ-инфицированных CD34 + HPC (). В соответствии с этими данными экспрессия вирусного литического гена в клетках Kasumi-3 и CD34 + HPC при 12 днях на дюйм показала повышенную UL123 и UL99 в культурах, инфицированных US28Δ- или US28 comp , по сравнению с клетками, инфицированными WT. ( Приложение SI , рис.С4). Эти данные свидетельствуют о том, что pUS28, доставляемый вирионом, способствует установлению латентности HCMV; однако этого недостаточно для поддержания длительных латентных инфекций, и поэтому для подавления репликации вируса требуется устойчивая экспрессия pUS28.

Устойчивая экспрессия pUS28 необходима для поддержания вирусной латентности. ( A ) клетки Kasumi-3 ( moi = 1,0) или ( B ) CD34 + HPC (moi = 2,0) были инфицированы WT (синий), US28Δ (зеленый) или US28 comp (серый ).( A и B ) Клетки собирали в указанные моменты времени, и события реактивации определяли с помощью ELDA. Данные для A представлены как кратность изменения высвобождения вируса по сравнению с вирусом WT на 3-й день. Данные для B представлены как кратность изменения высвобождения вируса по сравнению с вирусом WT. Во всех случаях планки погрешностей представляют собой стандартные отклонения трех биологических повторов. Статистическую значимость рассчитывали относительно WT в тот же момент времени с использованием ( A ) двухфакторного анализа ANOVA или ( B ) однофакторного ANOVA и апостериорного анализа Тьюки; * P < 0.05, ** P < 0,01, *** P < 0,001.

Экспрессия pUS28 достаточна для ослабления экспрессии c-fos и передачи сигналов.

Наши предыдущие результаты показали, что pUS28 является мощной сигнальной молекулой в контексте инфекции (40). Таким образом, мы предположили, что сигнальные возможности pUS28 способствуют его функционированию во время задержки. Однако в нашей предыдущей работе также было отмечено, что pUS28-опосредованная передача сигналов является специфичной для типа клеток (40), что затрудняет экстраполяцию таких результатов на гемопоэтические клетки.Чтобы начать понимать пути, модулируемые pUS28, и механизм, лежащий в основе вклада pUS28 в установление и поддержание латентного периода, мы провели анализ матрицы ПЦР на THP-pSLIK-US28-3xF по сравнению с контрольными клетками, обработанными DOX в течение 24 часов, чтобы индуцировать pUS28. выражение. Этот анализ выявил подмножество статистически значимых клеточных генов с повышенной и пониженной регуляцией ( SI, Приложение , рис. S5). Гены с наиболее выраженной активацией в анализе путей: CHUK (консервативная убиквитарная киназа спираль-петля-спираль; IKKα), HRAS , JAK2 (киназа Януса 2), PIK3CB (фосфатидилинозитол-4,5-зитол-4,5-зитол-4,5). -бифосфат-3-киназа каталитическая субъединица бета) и STAT1 (преобразователь сигнала и активатор транскрипции 1), тогда как c-fos , PIK3CA (PIK3C альфа), src и STAT5A значительное подавление генов в ответ на экспрессию pUS28 ( Приложение SI , рис.С5).

Мы сосредоточились на c-fos , поскольку активация c-fos приводит к гетеродимеризации c-fos и c-jun с образованием комплекса активаторного белка 1 (AP-1), который связывается с MIEP, тем самым способствуя активация его транскрипции (49). Образование комплекса AP-1 регулируется N-концевым фосфорилированием c-fos и c-jun, что приводит к их гетеродимеризации. После образования комплекса AP-1 связывается с консенсусной последовательностью ДНК TGA(G/C)TCA, чтобы стимулировать транскрипцию гена (50, 51).Таким образом, мы предположили, что pUS28-опосредованное ослабление транскрипции c-fos уменьшает образование комплекса AP-1, что приводит к репрессии литической транскрипции. Мы подтвердили, что экспрессия c-fos снижена в трансдуцированных клетках THP-1 при индукции pUS28 с помощью RT-qPCR (10). Мы также оценили экспрессию c-jun , которая значительно снижается во время латентной инфекции CD34 + HPC и клеток Kasumi-3 во время инфекции HCMV (52). Интересно, что мы обнаружили, что экспрессия pUS28 не оказывала существенного влияния на c-jun (), что позволяет предположить, что pUS28 специфически нацелен на c-fos , а не на оба компонента AP-1, и что другой пока неизвестный вирусный фактор, вероятно, нацелен на c -июнь .Мы обнаружили, что pUS28 также снижает экспрессию белка c-fos и значительно снижает фосфорилирование c-fos (12). В соответствии с предыдущими выводами, лечение DOX действительно индуцирует как полную, так и активную формы c-fos (53, 54), обе из которых впоследствии ослабляются после экспрессии pUS28. Интересно, что экспрессия pUS28 не влияет на экспрессию c-fos или c-jun в дифференцированных клетках THP-1 ( SI, Приложение , рис. S6), что позволяет предположить, что pUS28-опосредованная регуляция c-fos специфична для клеток, которые поддерживают латентный период HCMV. .

Передача сигналов US28 ослабляет экспрессию и активацию c-fos . ( A ) THP-1-pSLIK-hygro (pSLIK) и THP-1-pSLIK-US28-3xF (pSLIK-US28) обрабатывали DOX и клетки собирали через 24 часа после обработки. Экспрессию c-fos (темно-синий) и c-jun (светло-синий) измеряли относительно GAPDH . ( B ) Клетки из A обрабатывали (+) или без (-) DOX, и клетки собирали через 24 часа после обработки. Фосфорилированный fos (p-fos), общий fos (c-fos) и тубулин определяли с помощью иммуноблота.Показан репрезентативный иммуноблот ( n = 3). ( C ) Количественная оценка результатов, показанных в B , с использованием денситометрии. Уровни p-fos определяли количественно по отношению к c-fos, показанному по отношению к тубулину. Данные были количественно оценены по трем биологическим повторам. Столбики погрешностей указывают SD. Статистическую значимость рассчитывали с использованием однофакторного дисперсионного анализа и апостериорного анализа Тьюки. ( D F ) Клетки Kasumi-3 инфицировали указанными вирусами (множественность = 1,0) и собирали при ( E ) 2 или ( D и F ) 7 dpi.( D ) Частоту инфекционного вируса из каждой латентно инфицированной культуры определяли с помощью ELDA. Данные представлены как кратность изменения высвобождения вируса по сравнению с WT. ( E и F ). Экспрессию c-fos измеряли относительно GAPDH . ( A и D F ) Каждый образец анализировали в трех повторах. Столбики погрешностей указывают SD. Статистическую значимость рассчитывали с использованием критерия Уэлча t ; * P < 0.05, ** P < 0,01, *** P < 0,001.

Латентная экспрессия сигналов pUS28 для ослабления

c fos Экспрессия.

Чтобы определить, ослабляет ли pUS28-опосредованная передача сигналов c-fos в контексте инфекции, мы использовали два дополнительных вирусных рекомбинанта US28, которые изменяют способность US28 передавать сигналы. US28-R129A имеет единственную точечную мутацию в положении аминокислоты 129 в каноническом мотиве «DRY» (37). Мутация этого мотива с DRY на DAY предотвращает связывание G-белков с этим доменом, делая этот мутант «мертвым в передаче сигналов G-белка» (55).В рекомбинанте US28ΔN отсутствуют N-концевые аминокислоты 2–16 (37), и он неспособен взаимодействовать с лигандами US28, хотя этот мутант все еще может конститутивно передавать сигналы (55). Мы создали каждый из этих сигнальных мутантов на фоне TB40/E mCherry -US28-3xF и подтвердили экспрессию pUS28 во время инфицирования фибробластов каждым рекомбинантом с помощью иммуноблота ( SI Приложение , рис. S7 A ). В то время как было небольшое преимущество в росте у мутанта US28-R129A при 8 днях на дюйм, не было существенной разницы между мутантом и WT при 15 днях на дюйм ( Приложение SI , рис. S7 B ). Затем мы заразили клетки Kasumi-3 в условиях, способствующих латентности, с помощью WT, US28Δ, US28ΔN или US28-R129A и измерили высвобождение инфекционного вируса с помощью ELDA. WT-инфицированные клетки устанавливали и поддерживали латентную инфекцию, в то время как US28Δ-, US28-R129A- и US28ΔN-инфицированные клетки приводили к значительной литической репликации (2), предполагая, что требуется связывание хемокинов и агонист-зависимая передача сигналов. Чтобы определить, влияет ли опосредованная pUS28 передача сигналов на экспрессию c-fos , мы латентно заразили клетки Kasumi-3 WT, US28Δ, US28ΔN или US28-R129A и измерили экспрессию c-fos 2 и 7 dpi.Вирус дикого типа ослаблял экспрессию c-fos уже через 2 dpi, тогда как экспрессия c-fos повышалась в клетках, инфицированных US28Δ-, US28-R129A- и US28ΔN (). Эти результаты были усилены на 7 dpi, подтверждая, что непрерывная экспрессия pUS28 ослабляет c-fos , а опосредованная pUS28 передача сигналов важна для регуляции c-fos ().

Учитывая наши наблюдения, что ( i ) pUS28 ослабляет экспрессию UL123 , ( ii ) pUS28 ослабляет экспрессию и активацию c-fos , и ( iii 1) в AP-MI существуют сайты связывания . (56), мы предположили, что экспрессия pUS28 в клетках, поддерживающих латентность, приводит к снижению связывания AP-1 с MIEP.С этой целью мы инфицировали клетки Kasumi-3 WT или US28Δ и проводили ChIP для AP-1 в MIEP на 2 и 7 dpi с использованием антитела, направленного против c-fos. Наши данные показывают увеличение количества AP-1, связанного с MIEP, в клетках, инфицированных US28Δ, уже через 2 dpi (1), которое сохраняется до 7 dpi (2). Наконец, мы пришли к выводу, что если pUS28-опосредованное ослабление передачи сигналов c-fos подавляет активацию MIEP, то обработка US28Δ-инфицированных клеток ингибитором c-fos должна снижать активность MIEP. Инфицирование клеток Kasumi-3 WT или US28Δ в присутствии ингибитора c-fos (T-5224) в течение 2 или 7 дней показало снижение экспрессии UL123 в культурах, инфицированных US28Δ (соответственно), аналогично уровням, которые мы наблюдается в присутствии экзогенной экспрессии pUS28 (). Кроме того, это снижение экспрессии UL123 в клетках Kasumi-3, инфицированных US28Δ (), приводит к снижению продукции инфекционного вируса по сравнению с его необработанным аналогом (). Вместе эти данные показывают, что вирус WT значительно снижает AP-1-опосредованную активацию MIEP за счет pUS28-направленной аттенуации c-fos , тем самым способствуя установлению и поддержанию латентности в клетках, которые поддерживают латентную инфекцию HCMV.

pUS28 снижает связывание c-fos в MIEP, что приводит к репрессии транскрипции транскриптов IE.( A и B ) Клетки Kasumi-3 инфицировали (moi = 1,0) WT (синий) или US28Δ (зеленый). Клетки собирали ( A ) 2 или ( B ) 7 dpi, и комплекс AP-1 подвергали иммунопреципитации с использованием антитела против c-fos. Соосажденный MIEP был количественно определен с помощью количественной ПЦР, и данные показаны как кратное изменение по сравнению с входом. Непромоторная область UL69 показана в качестве контроля. ( C E ) Клетки Kasumi-3 были инфицированы, как и в A и B , в отсутствие (красный; NT) или в присутствии (зеленый) ингибитора fos, T5224 (10 нМ), и клетки были собраны ( C ) 2 или ( D и E ) 7 точек на дюйм.( C и D ) Экспрессию UL123 измеряли и нормализовали до GAPDH . ( E ) Частота инфекционного вируса из каждой латентно инфицированной культуры определялась с помощью ELDA. Данные представлены как кратность изменения высвобождения вируса по сравнению с WT, обработанным носителем. Каждый образец анализировали в трех повторностях. Столбики погрешностей указывают стандартное отклонение, а статистическая значимость измерялась с использованием критерия Уэлча t ; ** Р < 0,01, *** Р < 0.001.

Обсуждение

Расшифровка молекулярных основ возникновения и поддержания латентного периода ЦМВ является областью интенсивных исследований. Вирусная инфекция гематопоэтических клеток приводит к тому, что, вероятно, является хорошо скоординированным захватом среды клетки-хозяина, при этом многогранные процессы определяют исход инфекции. Основным открытием в этом исследовании является потребность в pUS28 как во время фазы установления, так и во время поддержания латентности HCMV, что продиктовано, по крайней мере частично, его манипуляциями с кодируемым хозяином c-fos.pUS28 также влияет на связывание AP-1 с MIEP, клеточным фактором транскрипции, состоящим из субъединиц c-fos и c-jun. Наконец, pUS28-опосредованная аттенуация c-fos напрямую влияет на транскрипцию, управляемую MIEP. Наши результаты раскрывают механизм, с помощью которого pUS28 подавляет транскрипцию, управляемую MIEP, чтобы помочь в установлении и поддержании латентности HCMV.

Для установления и поддержания латентности вируса, вероятно, требуется множество факторов, и pUS28 является ключевым элементом биологической головоломки, которая уравновешивает латентность и реактивацию. Подавление очень сильного литического промотора, MIEP, является главной детерминантой успешной латентной инфекции, и pUS28 определенно не единственный вирусный фактор, участвующий в этом механизме. Эпигенетическое молчание MIEP хорошо известно, и дополнительные вирусные факторы, включая некодирующие РНК и белки, явно влияют на клеточные факторы, которые регулируют этот вирусный промотор во время инфекции клеток, поддерживающих латентность (57). В то время как было показано, что белки клетки-хозяина, такие как Ying Yang-1 (YY-1) и TRIM28/Kap-1, влияют на транскрипцию MIEP и вирусную латентность, вышестоящие факторы, которые приводят к их регуляции, остаются неуловимыми, хотя привлекательно предположить, что может быть задействована индуцированная вирусом передача сигналов посредством pUS28.

Опосредованная pUS28 аттенуация комплекса факторов транскрипции AP-1 специфична для c-fos, поскольку c-jun не затрагивалась. В недавнем сотрудничестве мы обнаружили, что экспрессия c-jun значительно снижается во время латентной инфекции HCMV как в клетках Kasumi-3, так и в первичных CD34 + HPC (52), хотя здесь мы показываем, что экспрессия pUS28 существенно не снижалась. изменить выражение c-jun . Вместе эти данные предполагают, что другой вирусный фактор регулирует уровни транскриптов c-jun во время латентного периода.Поэтому HCMV разработал несколько механизмов для регуляции комплекса AP-1, предполагая, что этот фактор транскрипции важен для регуляции латентности. В дополнение к предотвращению связывания AP-1 на MIEP будет интересно дальнейшее изучение биологических последствий pUS28-опосредованной регуляции c-fos. Более глобальные, беспристрастные подходы, такие как секвенирование РНК и протеомика цельных клеток, могут выявить дополнительные факторы клетки-хозяина, которые не регулируются через сигнальную ось pUS28:c-fos. Действительно, эти последующие события могут обеспечивать дополнительный механизм, с помощью которого HCMV регулирует клетку-хозяина во время латентного периода.

Наши данные также показывают, что pUS28-опосредованная передача сигналов важна для поддержания латентности посредством регуляции c-fos как в зависимости от связывания G-белка, так и в зависимости от связывания лиганда. Представленные здесь данные согласуются с предыдущими выводами, которые показали, что экспрессия US28-R129A (точечный мутант домена, связывающего G-белок) в клетках THP-1 была неспособна восстановить супрессию литического гена после заражения вирусом HCMV Titan-US28Δ (38). Однако роль лиганд-опосредованной передачи сигналов pUS28 все еще остается неясной.Сверхэкспрессия мутанта, связывающего лиганд US28-Y16F, в клетках THP-1 подавляет экспрессию литического гена после инфицирования вирусом HCMV Titan-US28Δ (38). Вполне вероятно, что нам еще предстоит идентифицировать полный список лигандов US28, и, таким образом, возможно, мутант US28-Y16F сохраняет некоторую чувствительность к лигандам, в то время как мутант US28Δ полностью лишен таких взаимодействий.

Хотя US28 связан с различными сигнальными путями во время литической инфекции различных типов клеток (55), этот отчет напрямую связывает pUS28 с передачей сигналов c-fos.В соответствии с нашими выводами, экспрессия pUS28 в недифференцированных клетках THP-1 репрессирует MIEP в репортерных анализах и ослабляет передачу сигналов киназы MAP (38), путь, который активирует c-fos (58). Наоборот, pUS28 активирует этот же путь в дифференцированных клетках THP-1 (38, 59, 60), которые поддерживают литическую, а не латентную инфекцию. В соответствии с этим наблюдением мы подтвердили, что репрессивный эффект pUS28 на MIEP посредством аттенуации c-fos специфичен для недифференцированных миелоидных клеток, которые поддерживают латентность, и не проявляется в дифференцированных миелоидных клетках, которые поддерживают литическую инфекцию.Способствует ли передача сигналов киназы MAP через pUS28 аттенуации c-fos в контексте латентной инфекции, остается неизвестным, хотя привлекательно предположить, что влияние pUS28 на киназу MAP приводит к последующим эффектам на экспрессию c-fos, которые мы наблюдали. Более того, хотя возможно, что изменения в клеточном окружении между этими различными состояниями дифференцировки миелоидных клеток могут объяснить вариации в активности передачи сигналов pUS28, такие выводы остаются неубедительными.

Как еще US28 может репрессировать MIEP в миелоидных клетках-предшественниках? Учитывая, что pUS28 модулирует различные сигнальные пути во время литической инфекции (55), вполне вероятно, что будущие исследования выявят дополнительные клеточные сигнальные пути, опосредованные pUS28, некоторые из которых могут помочь в подавлении надежной транскрипции литического гена. Помимо передачи сигналов MAP-киназы в THP-1 (38), US28 также активирует преобразователь сигнала и активатор транскрипционной 3-индуцируемой синтазы оксида азота (STAT3-iNOS) в клетках CD34+ (61) и PLC-β в клетках THP-1 ( 62).Как эти пути, наряду с другими, могут влиять на подавление транскрипции вируса во время латентного периода в недифференцированных миелоидных клетках, остается неясным.

Наши результаты подробно описали здесь один специфический механизм, с помощью которого pUS28 модулирует среду клетки-хозяина, чтобы влиять на латентность HCMV. Дальнейшая работа, направленная на понимание дополнительной активности pUS28 во время латентной инфекции, необходима для разработки терапевтических целей, направленных на предотвращение реактивации вируса.

Методы

Клетки и вирусы.

Подробная информация о клетках и условиях их культивирования, а также подробная информация о размножении вирусов, происходящих из ВАС TB40/E, включены в Приложение SI , Материалы и методы SI .

Получение стабильных клеточных линий NuFF-1 и THP-1.

Для получения подробной информации о создании конструкций pBABE-US28-3xF и pSLIK-US28-3xF, а также US28-3xF, экспрессирующих клетки NuFF-1, см. SI Приложение , SI Материалы и методы .

Для получения стабильных линий THP-1-pSLIK-hygro и THP-1-pSLIK-US28-3xF клетки pSLIK-hygro или pSLIK-US28-3xF трансфицировали в клетки 293T с использованием трансфекционного реагента Fugene 6 (Promega), как подробно описано над.Затем осветленную среду концентрировали 50 раз ультрацентрифугированием при 82 700 × g при 4 °C в течение 60 минут, после чего осадок ресуспендировали в X-VIVO15 (Lonza). Концентрированные лентивирусные частицы pSLIK-hygro или pSLIK-US28-3xF затем использовали для заражения 5 × 10 5 клеток THP-1 в каждом состоянии путем центрифугирования в течение 1 ч при комнатной температуре при 1000 × г . Успешно трансдуцированные клетки отбирали с помощью 450 мкг/мл гигромицина, после чего клеточный дебрис удаляли путем амортизации клеток на Ficoll Paque PLUS (GE Healthcare Life Sciences) в течение 35 мин при комнатной температуре при 450 × г без тормоза.

Заражение клеток THP-1, Kasumi-3 и CD34

+ .

клеток THP-1 инфицировали, как описано в другом месте (63). Вкратце, 1 × 10 6 клеток инфицировали при множественности, равной 1 средней инфекционной дозе культуры ткани (TCID 50 ) на клетку, путем центрифугирования при 450 × g в течение 35 мин, без перерыва, при комнатной температуре. . Затем инфицированные возвращали в условия культивирования, описанные в SI Приложение , SI Материалы и методы , еще на 75 минут, после чего клетки промывали 1× PBS, повторно высевали и инкубировали в среде X-VIVO15, как указано в текст.Индукция DOX экспрессии pUS28, где указано, выполнялась за 24–48 часов до заражения путем добавления 1 мкг/мл DOX к 1 × 10 7 клеток в RPMI. После заражения трансдуцированные клетки THP-1 промывали и повторно высевали в среду X-VIVO15 с 1 мкг/мл DOX, где указано. В ходе инфекции трансдуцированные клетки THP-1 обрабатывали DOX каждые 2 дня после заражения, а среду меняли каждые 5 дней, где клеточный дебрис удаляли путем центрифугирования клеток на Ficoll Paque PLUS (GE Healthcare Life Sciences) в течение 35 мин. при комнатной температуре при 450 × г без тормоза.

Клетки Kasumi-3 инфицировали, как описано ранее (22, 30, 37). Вкратце, клетки голодали в сыворотке в X-VIVO15 за 48 ч до инфицирования, а затем инфицировали множественностью 1,0 TCID 50 на клетку с помощью центрифугирования (1000 × г , 35 мин, комнатная температура, без торможения) в Х-ВИВО15. На следующий день клетки обрабатывали трипсином для удаления любого вируса, который не проник в клетку, а затем помещали на Ficoll-Pacque (GE Healthcare Life Sciences) для удаления остаточного вируса и дебриса.Зараженные клетки промывали 1× PBS, повторно помещали в X-VIVO15 и собирали, как указано в тексте.

Выделение CD34 + HPC подробно описано в другом месте (64). Сразу после выделения CD34 + HPC инфицировали при множественности 2,0 TCID 50 на клетку, как описано ранее (22, 30, 37, 64), в инфекционной среде, состоящей из IMDM (Corning) с добавлением 10% BIT9500. заменитель сыворотки (технологии стволовых клеток), 2 мМ l-глютамина, 20 нг/мл липопротеинов низкой плотности и 50 мкМ 2-меркаптоэтанола.На следующий день культуры трижды промывали в 1× PBS и повторно высевали в трансвеллах с порами 0,4 мкм над облученными стромальными клетками в hLTCM, как описано ранее. Через 12 dpi клетки трижды промывали в 1× PBS и собирали для анализов RT-qPCR и ELDA.

Анализ выпуска инфекционного вируса компанией ELDA.

Инфицированные клетки Kasumi-3 или CD34 + HPC культивировали совместно с наивными клетками NuFF-1. Вкратце, инфицированные клетки серийно разбавляли вдвое на наивных клетках NuFF-1 в X-VIVO15 в течение 14 дней.Подсчитывали количество mCherry-положительных лунок для каждого разведения и измеряли высвобождение вируса с использованием программного обеспечения ELDA (bioinf.wehi.edu.au/software/elda/index.html).

Хроматин Иммунопреципитация.

Клетки инфицировали в течение 24 ч WT или US28Δ, фиксировали в 1% формальдегиде в течение 15 мин при комнатной температуре, а затем гасили 125 мМ глицином. Клетки лизировали в IP-буфере (150 мМ NaCl, 50 мМ Tris⋅HCl, pH 7,5, 5 мМ EDTA, 0,5% Igepal-CA630 и 1% Triton X-100) и дебрис удаляли центрифугированием.ДНК разрезали на фрагменты размером от 0,3 до 1 т.п.н. с помощью MiSonix Sonicator 3000 (выход 20%, 0,5 с вкл/выкл, 1 мин) и аликвоты сохраняли в качестве входных контролей. ДНК, связанную с AP-1, подвергали иммунопреципитации либо нормальной кроличьей сывороткой (Cell Signaling), либо анти-fos (класс ChIP, разбавление 1:100; Cell Signaling) с использованием агарозы с протеином А (Millipore Sigma). ДНК элюировали кипячением и затем обрабатывали протеиназой К. ДНК из разрушенных нуклеосом осаждали и использовали в ПЦР с праймерами, направленными на MIEP или непромоторную область UL69 (65) ( SI, Приложение , Таблица S1).

собственники, учредители, руководство, реквизиты (ИНН 1653018693)

(анкета №1653018693 от 19.02.2022)

Краткое описание

ликвидированная некоммерческая

МЕЖДУНАРОДНАЯ ОБЩЕСТВЕННАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ «МЕЖДУНАРОДНЫЙ ИНФОРМАЦИОННО-ЭКОЛОГИЧЕСКИЙ ПАРЛАМЕНТ»

БАНКА 1653018693
Область / город Отв. Татарстан, г. казанский адрес
Возраст компании 22 года
Основная деятельность нет данных
Масштаб операции
Учредители нет данных
Менеджер Бикмуллин Альберт Лутфуллович (директор)

Факты для рассмотрения

Полный профиль

  1. 1.Общая информация
  2. 2. Регистрация в РФ
  3. 3. Деятельность компании
  4. 4. Юридический адрес
  5. 5. Владельцы, учредители юридического лица
  6. 6. Генеральный директор МИЭП
  7. 7. Предприятия, основанные компанией
  8. 8. Финансы компании
  9. 9. Субъекты, связанные с МИЭП
  10. 10. Последние изменения в Едином государственном реестре юридических лиц (ЕГРЮЛ)

Общая информация

Полное наименование организации: МЕЖДУНАРОДНАЯ ОБЩЕСТВЕННАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ «МЕЖДУНАРОДНЫЙ ИНФОРМАЦИОННО-ЭКОЛОГИЧЕСКИЙ ПАРЛАМЕНТ»

ИНН: 1653018693

ОГРН: 103165

90

Местонахождение: 420021, Респ.Татарстан, г. Казань, ул. Шигабутдина Марджани, 28

Статус организации: Некоммерческая, ликвидированная (прекращение деятельности общественного объединения как юридического лица по решению суда на основании статьи 29 Федерального закона от 19. 05.1995 № 82-ФЗ «Об общественной ассоциации»)

Организационно-правовая форма: Общественные организации (код 20200 по ОКОПФ)

Регистрация в РФ

Организация МЕЖДУНАРОДНАЯ ОБЩЕСТВЕННАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ «МЕЖДУНАРОДНЫЙ ИНФОРМАЦИОННО-ЭКОЛОГИЧЕСКИЙ ПАРЛАМЕНТ» зарегистрирована в Едином государственном реестре юридических лиц 25 лет назад 6 декабря 1996 года.

Организация ликвидирована 07.06.2019

Деятельность компании

ЕГРЮЛ не содержит сведений о деятельности организации.

Юридический адрес

МИЭП зарегистрирована по 420021, Респ. Татарстан, г. Казань, ул. Шигабутдина Марджани, 28. (показать на карте)

Владельцы, учредители юридического лица

Отсутствуют данные об учредителях МИЭП по состоянию на 19. 02.2022 в ЕГРЮЛ.Предыдущими учредителями были:

Генеральный директор МИЭП

Руководитель организации (лицо, имеющее право действовать от имени юридического лица без доверенности) – директор Бикмуллин Альберт Лутфуллович (ИНН: 165500347709).

организаций, основанных компанией

МИЭП не числится учредителем ни в одном из российских юридических лиц.

Финансы компании

Организация не подлежит специальным режимам налогообложения (работает на общем режиме).

Субъекты, связанные с MIEP

На основании данных Единого государственного реестра юридических лиц к организации прямо или косвенно имеют отношение следующие юридические и физические лица.

Последние изменения в Едином государственном реестре юридических лиц (ЕГРЮЛ)

  1. 07.06.2019 .Внесение сведений об учете в налоговом органе.
  2. 08.04.2018 . Представление сведений о выдаче или замене документов, удостоверяющих личность гражданина Российской Федерации, на территории Российской Федерации.
  3. 16.04.2014 . Представление сведений о выдаче или замене документов, удостоверяющих личность гражданина Российской Федерации, на территории Российской Федерации.
  4. 20.12.2012 .Внесение сведений об учете в налоговом органе.
  5. 30.11.2012 . Внесение изменений в сведения, содержащиеся в ЕГРЮЛ, в связи с переименованием (переподчинением) адресных объектов.
  6. 12.01.2010 . Внесение сведений о регистрации в Пенсионном фонде РФ.
  7. 26. 01.2007 . Изменения сведений о юридическом лице, содержащихся в ЕГРЮЛ, в связи с ошибками, допущенными регистрирующим органом.
  8. 31.03.2006 . Внесение сведений об учете в налоговом органе.
  9. 27.03.2006 . Внесение сведений об учете в налоговом органе.
  10. 22.11.2005 . Внесение сведений о регистрации в ФСС РФ.

Источники информации

Данные, представленные на данной странице, получены из официальных источников: Единого государственного реестра юридических лиц (ЕГРЮЛ), Государственного информационного ресурса бухгалтерской отчетности, сайта Федеральной налоговой службы (ФНС), Министерства финансов и Федеральная служба государственной статистики.

Новый репортерный мышиный цитомегаловирус демонстрирует сохраненную раннюю экспрессию генов, но плохую репликацию вируса в циклических синусоидальных эндотелиальных клетках печени | Virology Journal

  • Буше А., Ангуло А., Кей-Джексон П., Газаль П., Мессерле М.: Фенотипы основных генных мутантов непосредственно-раннего цитомегаловируса мыши. Med Microbiol Immunol 2008, 197: 233-240. 10.1007/s00430-008-0076-3

    PubMed Статья Google ученый

  • Wilkinson GW, Akrigg A, Greenaway PJ: Транскрипция непосредственных ранних генов штамма цитомегаловируса человека AD169. Virus Research 1984, 1: 101-106. 10.1016/0168-1702(84)

    -4

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Mocarski ES, Kemble GW, Lyle JM, Greaves RF: Делеционный мутант в гене человеческого цитомегаловируса, кодирующем IE1(491aa), является дефектным по репликации из-за сбоя в ауторегуляции. Proc Natl Acad Sci USA 1996, 93: 11321-11326.10.1073/pnas.93.21.11321

    PubMed КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Greaves RF, Mocarski ES: Дефектный рост коррелирует со сниженным накоплением белка репликации вирусной ДНК после инфекции с низкой множественностью мутантным цитомегаловирусом ie1 человека. J Virol 1998, 72: 366-379.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Korioth F, Maul GG, Plachter B, Stamminger T, Frey J: Ядерный домен 10 (ND10) нарушен генным продуктом человеческого цитомегаловируса IE1. Experimental Cell Research 1996, 229: 155-158. 10.1006/excr.1996.0353

    PubMed КАС Статья Google ученый

  • Wilkinson GW, Kelly C, Sinclair JH, Rickards C: Разрушение ядерных телец, связанных с PML, опосредованное продуктом основного раннего раннего гена цитомегаловируса человека. J Gen Virol 1998, 79 (Pt 5):1233-1245.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Tang Q, Maul GG: Мышиный цитомегаловирусный белок 1 немедленного начала связывается с репрессорами клеток-хозяев, чтобы ослабить супрессивные эффекты на транскрипцию и репликацию вируса во время литической инфекции. J Virol 2003, 77: 1357-1367. 10.1128/ОВИ.77.2.1357-1367.2003

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Gribaudo G, Riera L, Lembo D, De Andrea M, Gariglio M, Rudge TL, Johnson LF, Landolfo S: Цитомегаловирус мышей стимулирует экспрессию клеточного гена тимидилатсинтазы в покоящихся клетках и требует фермента для репликации. Дж Вирол 2000, 74: 4979-4987. 10.1128/ОВИ.74.11.4979-4987.2000

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Angulo A, Ghazal P, Messerle M: ​​ Основной ген ie3 мышиного цитомегаловируса необходим для роста вируса. Дж Вирол 2000, 74: 11129-11136. 10.1128/ОВИ.74.23.11129-11136.2000

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Wiebusch L, Neuwirth A, Grabenhenrich L, Voigt S, Hagemeier C: Независимая от клеточного цикла экспрессия раннего гена 3 приводит к остановке G1 и G2 в клетках, инфицированных мышиным цитомегаловирусом. J Virol 2008, 82: 10188-10198. 10.1128/ОВИ.01212-08

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Manning WC, Mocarski ES: Инсерционный мутагенез генома мышиного цитомегаловируса: один видный альфа-ген (ie2) необязателен для роста. Вирусология 1988, 167: 477-484.

    ПабМед КАС Google ученый

  • Lacaze P, Forster T, Ross A, Kerr LE, Salvo-Chirnside E, Lisnic VJ, Lopez-Campos GH, Garcia-Ramirez JJ, Messerle M, Trgovcich J, Angulo A, Ghazal P: Временное профилирование кодирующие и некодирующие транскриптомы мышиного цитомегаловируса. J Virol 2011, 85: 6065-6076. 10.1128/ОВИ.02341-10

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Lafemina RL, Hayward GS: Различия в блоках, специфичных для типов клеток, для немедленной ранней экспрессии генов и репликации ДНК человеческого, обезьяньего и мышиного цитомегаловируса. J Gen Virol 1988, 69 (Pt 2):355-374.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Grzimek NKA, Dreis D, Schmalz S, Reddehase MJ: Случайная, асинхронная и асимметричная транскрипционная активность фланкирующих энхансер основных генов ie1/3 и ie2 во время латентного периода мышиного цитомегаловируса в легких. J Virol 2001, 75: 2692-2705. 10.1128/ОВИ.75.6.2692-2705.2001

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Simon CO, Kuhnapfel B, Reddehase MJ, Grzimek NKA: Основная область немедленного раннего энхансера мышиного цитомегаловируса, действующая как генетический переключатель в двунаправленной транскрипции пары генов. J Virol 2007, 81: 7805-7810. 10.1128/ОВИ.02388-06

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Seckert CK, Renzaho A, Tervo HM, Krause C, Deegen P, Kuhnapfel B, Reddehase MJ, Grzimek NK: Синусоидальные эндотелиальные клетки печени являются местом латентного периода и реактивации цитомегаловируса мышей. J Virol 2009, 83: 8869-8884. 10.1128/ОВИ.00870-09

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • May T, Hauser H, Wirth D: Размножение тканевых клеток in vitro путем условной пролиферации. Meth Mol Med 2007, 140: 1-15. 10.1007/978-1-59745-443-8_1

    КАС Статья Google ученый

  • May T, Lindenmaier W, Wirth D, Mueller PP: Применение системы обратимой иммортализации для создания клеточных линий с контролируемой пролиферацией. Цитотехнология 2004, 46: 69-78. 10.1007/s10616-005-2834-z

    PubMed ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Scholzen T, Gerdes J: Белок Ki-67: от известного и неизвестного. J Cell Physiol 2000, 182: 311-322. 10.1002/(SICI)1097-4652(200003)182:3<311::AID-JCP1>3.0.CO;2-9

    PubMed КАС Статья Google ученый

  • Oie CI, Appa RS, Hilden I, Petersen HH, Gruhler A, Smedsrod B, Hansen JB: Синусоидальные эндотелиальные клетки печени крыс (LSEC) экспрессируют функциональный белок-1, родственный рецептору липопротеинов низкой плотности (LRP-1) . Ж Гепатол 2011, 55: 1346-1352.10.1016/j.jhep.2011.03.013

    PubMed КАС Статья Google ученый

  • Ebermann L, Ruzsics Z, Guzman CA, Van Rooijen N, Casalegno-Garduno R, Koszinowski U, Cicin-Sain L: Блокада апоптоза рецептора смерти защищает мышиный цитомегаловирус от макрофагов и является определяющим фактором вирулентности при иммунодефиците хосты. PLoS Pathogens 2012, 8: e1003062. 10.1371/journal.ppat.1003062

    PubMed КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Wilhelmi V, Simon CO, Podlech J, Bohm V, Daubner T, Emde S, Strand D, Renzaho A, Lemmermann NAW, Seckert CK, Reddehase MJ, Grzimek NKA: Трансактивация клеточных генов, участвующих в метаболизме нуклеотидов путем регуляторный белок IE1 мышиного цитомегаловируса не имеет решающего значения для приспособленности вируса к репликации в покоящихся клетках и тканях хозяина. J Virol 2008, 82: 9900-9916. 10.1128/ОВИ.00928-08

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Lembo D, Gribaudo G, Hofer A, Riera L, Cornaglia M, Mondo A, Angeretti A, Gariglio M, Thelander L, Landolfo S: Экспрессия измененной активности рибонуклеотидредуктазы, связанная с репликацией мышиного цитомегаловируса в покоящиеся фибробласты. Дж Вирол 2000, 74: 11557-11565.10.1128/ОВИ.74.24.11557-11565.2000

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Rupp B, Ruzsics Z, Sacher T, Koszinowski UH: Условная репликация цитомегаловируса in vitro и in vivo. J Virol 2005, 79: 486-494. 10.1128/ОВИ.79.1.486-494.2005

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • van Den Pol AN, Mocarski E, Saederup N, Vieira J, Meier TJ: Цитомегаловирусный клеточный тропизм, репликация и перенос генов в головном мозге. J Neurosci 1999, 19: 10948-10965.

    ПабМед КАС Google ученый

  • Hsu KM, Pratt JR, Akers WJ, Achilefu SI, Yokoyama WM: Мышиный цитомегаловирус проявляет селективную инфекцию клеток в течение нескольких часов после системного введения. J Gen Virol 2009, 90: 33-43. 10.1099/vir.0.006668-0

    PubMed КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Henry SC, Schmader K, Brown TT, Miller SE, Howell DN, Daley GG, Hamilton JD: Усиленный зеленый флуоресцентный белок в качестве маркера локализации мышиного цитомегаловируса при острой и латентной инфекции. J Virol Meth 2000, 89: 61-73. 10.1016/S0166-0934(00)00202-0

    КАС Статья Google ученый

  • Marquardt A, Halle S, Seckert CK, Lemmermann NA, Veres TZ, Braun A, Maus UA, Forster R, Reddehase MJ, Messerle M, Busche A: Обнаружение латентной реактивации цитомегаловируса в ткани хозяина. J Gen Virol 2011, 92: 1279-1291. 10.1099/вир.0.029827-0

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • Cosme RC, Martinez FP, Tang Q: Функциональное взаимодействие ядерного домена 10 и его компонентов с цитомегаловирусом после инфекций: межвидовые клетки-хозяева по сравнению с нативными клетками. PLoS One 2011, 6: e19187. 10.1371/journal.pone.0019187

    PubMed КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Cosme-Cruz R, Martinez FP, Perez KJ, Tang Q: область гомологии h3B основного раннего белка 1 необходима мышиному цитомегаловирусу для разрушения ядерного домена 10, но не важна для репликации вируса в клеточной культуре . J Gen Virol 2011, 92: 2006-2019. 10.1099/vir.0.033225-0

    PubMed КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Martinez FP, Cosme RS, Tang Q: Основной немедленно-ранний белок 3 мышиного цитомегаловируса взаимодействует с клеточными и вирусными белками в компартментах репликации вирусной ДНК и важен для ранней активации генов. J Gen Virol 2010, 91: 2664-2676.10.1099/vir.0.022301-0

    PubMed КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Ишивата М., Баба С., Кавасима М., Косуги И., Кавасаки Х., Канета М., Цучида Т., Кодзума С., Цуцуи Ю.: Дифференциальная экспрессия белков 2-го и 3-го типов в развивающемся мозге мышей, зараженных мышиным цитомегаловирус. Arch Virol 2006, 151: 2181-2196. 10.1007/s00705-006-0793-0

    PubMed КАС Статья Google ученый

  • Fish KN, Stenglein SG, Ibanez C, Nelson JA: Устойчивость цитомегаловируса в макрофагах и эндотелиальных клетках. Scand J Infect Dis Suppl 1995, 99: 34-40.

    ПабМед КАС Google ученый

  • Sandhu U, Cebula M, Behme S, Riemer P, Wodarczyk C, Metzger D, Reimann J, Schirmbeck R, Hauser H, Wirth D: Строгий контроль экспрессии трансгена в мышиной модели для чувствительных биологических приложений на основе ES-ячейки, совместимые с RMCE. Nucleic Acids Res 2011, 39: e1.10.1093/нар/gkq868

    PubMed КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Wahl C, Bochtler P, Schirmbeck R, Reimann J: IFN-продуцирующие CD4 V{alpha}14i NKT-клетки облегчают примирование IL-10-продуцирующих CD8 T-клеток гепатоцитами. J Immunol 2007, 178: 2083-2093.

    ПабМед КАС Статья Google ученый

  • May T, Butueva M, Bantner S, Markusic D, Seppen J, MacLeod RA, Weich H, Hauser H, Wirth D: Синтетические цепи регуляции генов для контроля размножения клеток. Tiss Eng A 2010, 16: 441-452. 10.1089/тен.чай.2009.0184

    CAS Статья Google ученый

  • Wagner M, Gutermann A, Podlech J, Reddehase MJ, Koszinowski UH: Основной комплекс гистосовместимости класса I, специфичный для аллеля, кооперативные и конкурентные взаимодействия между белками уклонения от иммунного ответа цитомегаловируса. J Exp Med 2002, 196: 805-816. 10.1084/джем.20020811

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Jordan S, Krause J, Prager A, Mitrovic M, Jonjic S, Koszinowski UH, Adler B: Вирусное потомство мышиной цитомегаловирусной бактериальной искусственной хромосомы pSM3fr демонстрирует снижение роста в слюнных железах из-за фиксированной мутации MCK-2 . J Virol 2011, 85: 10346-10353. 10.1128/ОВИ.00545-11

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Черепанов П.П., Вакернагель В.: Нарушение гена Escherichia coli: кассеты TcR и KmR с возможностью катализируемого Flp вырезания детерминанты антибиотикорезистентности. Гена 1995, 158: 9-14. 10.1016/0378-1119(95)00193-A

    PubMed КАС Статья Google ученый

  • Wagner M, Jonjic S, Koszinowski UH, Messerle M: ​​ Систематическое вырезание векторных последовательностей из ВАС-клонированного генома герпесвируса во время восстановления вируса. J Virol 1999, 73: 7056-7060.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • Cicin-Sain L, Ruzsics Z, Podlech J, Bubic I, Menard C, Jonjic S, Reddehase MJ, Koszinowski UH: Доминантно-негативный FADD восстанавливает in vivo приспособленность цитомегаловируса, лишенного антиапоптотического вирусного гена. J Virol 2007, 82: 2056-2064.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Cicin-Sain L, Podlech J, Messerle M, Reddehase MJ, Koszinowski UH: Частая коинфекция клеток объясняет функциональную комплементацию in vivo между вариантами цитомегаловируса у множественно инфицированного хозяина. J Virol 2005, 79: 9492-9502. 10.1128/ОВИ.79.15.9492-9502.2005

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Osborn JE, Walker DL: Повышение инфекционности мышиного цитомегаловируса in vitro путем центробежной инокуляции. J Virol 1968, 2: 853-858.

    ПабМед КАС ПабМед Центральный Google ученый

  • May T, Hauser H, Wirth D: Транскрипционный контроль экспрессии Т-антигена SV40 позволяет полностью восстановить иммортализацию. Nucleic Acids Res 2004, 32: 5529-5538. 10.1093/нар/gkh887

    PubMed КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Патогены | Бесплатный полнотекстовый | Регуляция локуса MIE во время латентности и реактивации HCMV

    6.1. Транскрипционные репрессоры связываются во время латентности

    Латентность характеризуется молчанием транскрипции, что частично связано с ассоциацией репрессивных факторов транскрипции, которые работают вместе с факторами ремоделирования хроматина, обсуждавшимися выше.Это молчание позволяет вирусу уклоняться от иммунного ответа хозяина в состоянии покоя, тем самым обеспечивая пожизненную инфекцию. Как и при ремоделировании хроматина, регуляция локуса MIE с помощью факторов транскрипции представляет собой динамический процесс, который позволяет энхансеру/промотору MIE переключаться между активным (литическим), репрессированным (латентным) и дерепрессивным (реактивированным) состоянием.

    Большинство факторов транскрипции, которые связываются с локусом MIE, делают это в области энхансера (рис. 2). Проксимальный энхансер связан с репрессором транскрипции, Gfi-1, ядерным белком цинковых пальцев массой 55 кДа, который связывает ДНК специфичным для последовательности образом [174].В локусе MIE обнаружены два сайта связывания Gfi-1, TAAATCAC(A/T)GCA [182]. Трансфекция Gfi-1 в фибробласты NIH 3T3 репрессировала MIEP с помощью репортерного анализа хлорамфеникол-ацетилтрансферазы (CAT), который был реверсирован мутацией критических остатков в двух сайтах связывания Gfi-1 [182]. Однако одного Gfi-1 может быть недостаточно для контроля MIEP; во время развития клеток крови Gfi-1 функционирует как часть комплекса вместе с другими кофакторами для контроля модификаций гистонов, которые приводят к сайленсингу транскрипции [183], что указывает на потенциальный скоординированный подход к сайленсингу энхансера/промотора MIE.Кроме того, экспрессия мРНК Gfi-1 усиливается в костном мозге и лимфоидной ткани и необходима для гемопоэза [183]. Поскольку HCMV латентно находится в клетках кроветворной линии, интересно предположить роль этого фактора транскрипции в регуляции латентной инфекции и реактивации. Дальнейшая работа, направленная на понимание функции Gfi-1 во время латентного периода, а также того, как этот фактор транскрипции контролируется в гемопоэтических клетках, внесет дополнительную ясность в функциональную регуляцию локуса MIE.Дистальный энхансер, состоящий из 300 п.н. выше проксимальной области энхансера, имеет сайты связывания как для факторов транскрипции YY1, так и для репрессорного фактора Ets-2 (ERF). YY1 представляет собой ДНК-связывающий фактор транскрипции с цинковыми пальцами, способный активировать, репрессировать или инициировать транскрипцию в зависимости от промотора. Его функция частично зависит от различных партнеров по связыванию и набора различных кофакторов YY1 [149]. YY1 связывается с областью энхансера MIE в двух повторяющихся элементах длиной 21 п.н. и связывает консенсусную последовательность 5′-CCGCCATNTT-3′, первоначально показанную в недифференцированных непермиссивных клетках NTera-2 [150].В раковых клетках YY1 рекрутирует и напрямую связывается с HDAC через мостовые белки, чтобы обеспечить репрессию транскрипции [149]. Способность YY1 связывать различные кофакторы контекстно-зависимым образом предполагает, что этот транскрипционный фактор играет критическую роль в латентном периоде HCMV посредством рекрутирования факторов сайленсинга и ремоделеров хроматина, хотя его точная функция во время латентного периода остается неясной. YY1 также участвует во взаимодействиях энхансер-промотор в клетках млекопитающих и мышиных эмбриональных стволовых клетках, сходных с образованием петель ДНК, опосредованным CTCF [184].Петлеобразование ДНК позволяет регулировать промоторы отдаленными энхансерами посредством взаимодействия двух белков. CTCF связывается с первым интроном локуса MIE, и делеция этого сайта связывания CTCF приводит к увеличению экспрессии MIE и репликации вируса [175], хотя роль CTCF в латентном периоде в настоящее время неизвестна. Интересно предположить, что этот фактор транскрипции, который может действовать как барьерный белок [185], может помочь таким образом репрессировать локус MIE во время латентной инфекции.Следовательно, исследования, направленные на понимание вклада YY1 в такие взаимодействия, могут обеспечить лучшее понимание архитектуры локуса MIE во время задержки и реактивации. ERF, другой транскрипционный репрессор, представляет собой ядерный фактор транскрипции, который репрессирует активность энхансера/промотора MIE в анализах транзиторной трансфекции в недифференцированных непермиссивных клетках NTera-2 [176]. Как транскрипционный фактор семейства Ets, ERF связывает консенсусную последовательность ДНК 5′-GGA(A/T)-3′, присутствующую в повторах энхансера длиной 21 п.н. и в модуляторе [186].ERF также взаимодействует с HDAC1, что приводит к репрессии MIEP [176] в клетках NTera-2 [186]. Поскольку YY1 и ERF оба репрессируют локус MIE и имеют свои собственные консенсусные последовательности в повторяющихся элементах 21 п.н. проксимального энхансера, возможно, эти факторы транскрипции работают совместно, репрессируя транскрипцию из этой области. Работа, направленная на раскрытие вклада каждого транскрипционного фактора по отдельности и в комбинации в регуляцию энхансера/промотора MIE в контексте латентной инфекции, может выявить механизмы, лежащие в основе латентного контроля этой области.Четыре транскрипционных репрессора связывают уникальную область локуса MIE, включая CUX1/CDP [177], HMGB/SBP [178], SATB1 [179] и PDX1 [180]. CUX1/CDP является членом консервативного семейства Cut/CDP гомеодоменовых ДНК-связывающих белков [177]. Уникальная область MIE содержит предполагаемые сайты связывания CUX1/CDP, и ее сверхэкспрессия приводит к ингибированию MIEP в репортерных анализах [177]. Связывание этого фактора транскрипции предотвращает привлечение положительно активирующих факторов CCAAT к промоторам [187], что, по-видимому, опосредует эту наблюдаемую репрессию.Т.о., в отличие от YY1 и ERF, CUX1/CDP использует другую стратегию для молчания локуса MIE, предполагая, что HCMV развил несколько средств, гарантирующих, что этот регион остается молчащим в течение всей латентности. Другим фактором сайленсинга с отличной функцией является сайленсинг-связывающий белок (SBP/HMGB), который принадлежит к надсемейству высокоподвижных групповых боксов (HMGB). SBP/HMGB — это негистоновый ядерный ДНК-связывающий белок, который регулирует транскрипцию и участвует в организации ДНК [188]. Следовательно, белки HMG являются архитектурными факторами, которые могут модулировать структуру нуклеосом и хроматина [189].Репрессор транскрипции с этой способностью полезен для HCMV, поскольку структура хроматина локуса MIE должна быть эффективно реконструирована для установления латентной инфекции. SBP/HMGB связывается в уникальной области локуса MIE [178], что позволяет предположить, что он действует как изолятор между областью энхансера и соседней ORF, UL127. Точно так же SATB1 (Special AT-Rich Sequence Binding Protein 1) связывает уникальную область между -593 и -549 [179]. Как SATB1 регулирует локус MIE, неясно. Однако, когда SATB1 связывается с ДНК, он рекрутирует ферменты ремоделирования хроматина, связываясь с HDACs или HATs [190].Т.о., возможно, SATB1 функционирует, чтобы поддерживать латентное состояние в миелоидных клетках-предшественниках путем рекрутирования ферментов, модифицирующих хроматин, в локус MIE, чтобы гарантировать сайленсинг транскрипции этой области. Некоторые другие факторы хозяина имеют сайты связывания в локусе MIE, которые, вероятно, способствуют его регуляции. Фактор гомеобокса двенадцатиперстной кишки поджелудочной железы 1 (PDX1) регулирует экспрессию гена HCMV путем подавления активности MIE посредством элемента размером 45 п.н. в положении от -593 до -549 выше сайта начала транскрипции [180].Снижение транскрипции MIE с помощью анализа люциферазы является результатом сверхэкспрессии PDX1 в клетках 293, и, наоборот, экспрессия люциферазы увеличивается, когда сайты связывания PDX1 в промоторе мутированы или заблокированы сайт-направленным мутагенезом [180]. Однако то, как этот клеточный белок воздействует на локус MIE во время литической или латентной инфекции, остается невыясненным. Наконец, фактор распознавания модулятора (MRF; также известный как ARID5B) связывает модулятор MIE [181]. MRF/ARID5B является членом семейства ДНК-связывающих белков, богатых АТ (ARID), и считается, что он играет роль в развитии и дифференцировке гемопоэтических клеток [191].Экспрессия MRF специфична для дифференцировки, так как недифференцированные клетки NTera-2 и THP-1 обнаруживают повышенные уровни белка и мРНК, которые снижаются после дифференцировки [181]. Это похоже на белковую субъединицу комплекса облегчения хроматиновой транскрипции (FACT), супрессора Ty16 (SPT16; обсуждается ниже), экспрессия которого снижается при дифференцировке гемопоэтических клеток [192]. Эти репрессоры транскрипции являются только одной стороной сложности регуляции локуса MIE. Латентность и реактивация HCMV являются динамическими процессами, и удаление репрессоров транскрипции позволяет рекрутировать активаторы транскрипции в локус MIE, что приводит к активации промоторов и последующей экспрессии вирусных генов.
    6.2. Активаторы транскрипции связываются во время реактивации и литической инфекции
    Реактивация из латентного периода характеризуется дерепрессией локуса MIE для инициации транскрипции литического гена. Хотя наше понимание репертуара факторов, контролирующих это, вероятно, является неполным, дифференцировка миелоидных клеток в макрофаги или ДК запускает реактивацию вируса, которая в условиях ослабленной иммунной системы приводит к литической репликации и диссеминации вируса [193]. Дерепрессия локуса MIE требует ремоделирования хроматина и замены активаторов транскрипции на репрессоры.Эти активаторы транскрипции имеют множество сайтов внутри локуса MIE, распределенных по проксимальной и дистальной области энхансера (рис. 2). Одним из наиболее изученных активаторов транскрипции локуса MIE является NFκB, который связывает четыре сайта в проксимальном и дистальном энхансерах. Действительно, передача сигналов NFκB активирует локус MIE [70, 159, 162, 163, 164]. Каноническая активация NFκB требует фосфорилирования трехсубъединичной киназой IκB (IKK), которая впоследствии расщепляет IκB, а в контексте HCMV это может происходить уже через 30 мин после литической инфекции фибробластов [164, 194].Считается, что эта ранняя индукция NFκB помогает инициировать MIE-управляемую транскрипцию, в свою очередь, ускоряя экспрессию литических генов [162]. Хотя эти данные свидетельствуют о том, что HCMV эволюционировал, чтобы использовать NFκB в своих интересах, хозяин может также использовать функции этого клеточного белка для противовирусных контрмер. Например, NFκB является важным регулятором экспрессии провоспалительных генов, регулируя экспрессию цитокинов, таких как фактор некроза опухоли-альфа (TNFα), интерлейкин-1β (IL-1β), IL-6, IL-8 и циклооксигеназа 2. (Кокс-2).Чтобы противостоять этим мерам, HCMV кодирует белки, включая IE86, для нацеливания на этот провоспалительный ответ [195, 196, 197]. IE86 блокирует передачу сигналов NFκB и, следовательно, продукцию IFNβ путем связывания промотора IFN [195]. Такие меры хозяина и противовирусные контрмеры также очевидны во время латентного периода и реактивации. Вышеупомянутые провоспалительные гены, кодируемые хозяином, также обеспечивают сигналы реактивации, и некоторые из них используются для стимуляции реактивации в условиях in vitro [48,49,198,199]. Помимо сайтов связывания NFκB, ATF/CREB также связывает проксимальный и дистальный энхансер MIE с дополнительным сайтом связывания в основном промоторе.Всего в этом локусе имеется пять CRE-сайтов [158], характеризующихся цис-действующими повторами длиной 19 п.н. Мутация элемента CRE в положении -137 значительно снижает экспрессию вирусного гена, измеренную с помощью репортерного анализа CAT, в первичных фибробластах, первичном эндотелии аорты, иммортализованном теломеразой ретинальном пигментированном эпителии и первичных клетках гепатоцитов [200], предполагая, что связывание CREB в этом сайте является важен для эффективной транскрипции из этого локуса. CREB является фосфорилируемо-зависимым фактором транскрипции [201], связывание с энхансером/промотором MIE имеет решающее значение для индукции экспрессии как UL123, так и UL122 при реактивации CD14 + DC, происходящих из моноцитов [144], что подразумевает, что этот транскрипционный фактор важен для реактивации вируса.В этом контексте связывание фосфорилированного CREB с энхансером/промотором MIE задействует митоген и активируемую стрессом киназу (MSK), которая активируется посредством передачи сигналов MAPK. CREB-опосредованное рекрутирование активированных MSK способствует фосфорилированию гистона h4 и последующему деметилированию гистона, тем самым способствуя реактивации вируса [144]. В совокупности эти данные убедительно подтверждают роль CREB во время реактивации, хотя остается неясным, как CREB активируется восходящей передачей сигналов и какие сайты связывания из пяти являются критическими для этой фазы инфекции; неизвестно, работают ли множественные сайты связывания CREB совместно или они дублируют друг друга.Можно предположить важность множественных сайтов связывания CREB, которые вместе могут работать согласованно, рекрутируя достаточное количество фосфорилированных MSK для своих функций в этом процессе. Альтернативно, возможно, вирус развил несколько сайтов связывания CREB для дифференциальной регуляции промоторов MIE в зависимости от типа клеток. Будущие эксперименты, направленные на выявление таких нюансов, несомненно, внесут ясность и улучшат наше понимание того, как регулируется этот важный фактор транскрипции. Энхансерная область MIE также содержит сайты связывания лиганд-индуцируемых факторов транскрипции, рецепторов ретиноевой кислоты (RAR) и ретиноидных рецепторов. X-рецептор (RXR-A), оба лиганда которого представляют собой ретиноевую кислоту (RA) [165].RAR и RXR-A взаимодействуют с цис-действующими сайтами связывания ДНК, называемыми RA-чувствительными элементами (RARE) [202, 203, 204]. Гетеродимеры RAR и RXR-A предпочтительно связываются с RARE, состоящими из двух прямых повторов со следующей последовательностью: 5′-AGGTCA-3′. Эти прямые повторы содержат расстояние между полусайтами 1–5 п.н. (известное как DR1–DR5) [205]. Внутри энхансера MIE находятся три мотива RARE, один DR1 и два мотива DR5, с которыми RAR и RXR-A совместно связываются [202, 203, 204]. Лечение RA увеличивало экспрессию белка IE72 в клетках NTera-2 [206].В мышиных CMV-инфицированных (MCMV) фибробластах лечение RA увеличивало активность мышиного энхансера MIE, и в соответствии с этим введение RA мышам, инфицированным MCMV, ухудшало острую инфекцию [207]. Однако важно отметить, что мышиные и человеческие локусы MIE совершенно различны [208], что затрудняет экстраполяцию этих результатов на HCMV без дальнейших экспериментов. Интересно, что RA играет роль в дифференцировке и самообновлении гемопоэтических стволовых клеток, поскольку потеря RAR приводит к уменьшению числа этих клеток [209].Учитывая, что дифференцировка инфицированных гемопоэтических стволовых клеток приводит к реактивации вируса, возможно, что RAR может функционировать во время реактивации HCMV по мере дифференциации миелоидных клеток. Существует семь предполагаемых сайтов связывания белка специфичности 1 (Sp1) в энхансере MIE [166]. Два из этих сайтов (5′-(G/T)GGGCGG(G/A)(G/A)(C/T)-3′; GC-боксы), которые связывают Sp1 и Sp3, содержатся внутри минимального энхансерного элемента для локус MIE примерно в положениях -75 и -55 относительно сайта начала транскрипции (+1) в проксимальном энхансере [73,167].Sp1 является фактором транскрипции, участвующим в активации большого количества генов, необходимых для клеточных процессов, таких как рост клеток, апоптоз, дифференцировка и иммунный ответ [210]. Несмотря на то, что это отдельный белок, Sp3 действует как активатор транскрипции в Sp1-подобных сайтах на многих промоторах [211, 212, 213]. Связывание Sp1 с локусом MIE в положении -55 увеличивает транскрипцию примерно в 3 раза с помощью анализа репортера CAT, а связывание в обоих сайтах усиливает транскрипцию MIE примерно в 35 раз, демонстрируя синергетический эффект между этими двумя сайтами связывания.Кроме того, мутация сайтов связывания Sp1 и Sp3 в проксимальном энхансере вызывает неэффективную транскрипцию MIE и репликацию вируса в литически инфицированных фибробластах [167], что указывает на избыточность этих белков в энхансере MIE во время литической репликации. На сегодняшний день остается неясным, помогают ли Sp1 и/или Sp3 в трансактивации локуса MIE во время реактивации, поскольку прямое связывание любого транскрипционного фактора во время любой фазы инфекции еще не было показано. В то время как эти транскрипционные факторы являются избыточными в литически инфицированных фибробластах, возможно, они имеют функции, специфичные для клеток или тканей.Фактор транскрипции AP-1 связывается с двумя сайтами в проксимальном энхансере MIE [159,160]. Этот фактор транскрипции состоит из гетеродимеров c-fos и c-jun, которые активируют транскрипцию в ответных элементах (TRE) 12-O-тетрадеканоилфорбол-13-ацетата (ТРА) с согласованной последовательностью 5′-TGAC/GTCA-3′ [160]. ]. Консенсусный сайт AP-1 находится между положениями -174 и -168 относительно сайта начала транскрипции основного промотора в положении +1 [214], в то время как неконсенсусный сайт (5′-TGACTAA-3′) расположен между позициями -239 и -233 [159,160,215].Хотя для эффективной литической репликации в фибробластах или эпителиальных клетках не требуется ни один сайт, ни их комбинация [83, 160], связывание АР-1 с его консенсусной последовательностью в энхансере MIE имеет решающее значение для успешной реактивации из латентного периода, поскольку оно необходимо для дерепрессии. MIE-управляемых транскриптов, но не других генов IE [83]. Кроме того, рекрутирование AP-1 в его консенсусный сайт в энхансере MIE было необходимо для экспрессии транскриптов, происходящих от MIEP, iP2 и dP, в то время как транскрипция, управляемая iP1, не изменялась при нарушении канонического сайта связывания AP-1. [83], предполагая, что канонические и альтернативные промоторы MIE по-разному реагируют на связывание факторов транскрипции.Согласившись с этим, Hale et al. недавно идентифицировали сайты связывания forkhead box (FOX) в интроне A MIE, способные поддерживать связывание FOXO1 и FOXO3a [161]. Эти сайты отличаются от сайта связывания FOXA1 в уникальной области MIE, которая регулирует UL127 и не влияет на гены, управляемые MIE [216]. В самом деле, FOXO1 и FOXO3a инициируют транскрипцию с альтернативного внутреннего промотора, iP2, и в меньшей степени iP1 в анализах репортеров люциферазы. Важно отметить, что мутация трех сайтов связывания FOXO в интроне А приводит к значительному нарушению способности этого вируса к реактивации по сравнению с инфицированными CD34 + HPC дикого типа [161].Факторы транскрипции FOX также являются пионерскими факторами [217], характеризующимися их способностью непосредственно связывать закрытый хроматин и ремоделировать его в открытое состояние, чтобы облегчить связывание др. факторов транскрипции, тем самым изменяя ландшафт хроматина [218]. Это противоречит другим факторам транскрипции, которые связывают только доступные (или открытые) последовательности ДНК. Таким образом, привлекательно предположить, что транскрипционные факторы FOXO помогают сделать хроматин в локусе MIE более доступным во время реактивации путем праймирования этой области для транскрипционной трансактивации.Тем не менее, из этих недавних открытий ясно, что множество факторов, рекрутированных в локус MIE, действительно могут регулировать специфические промоторы в этой области. Это может быть связано с фазой инфекции, типом клеток, типом ткани и/или болезненным состоянием. Множественные активаторы транскрипции связываются только с дистальным энхансером MIE. Два из этих активаторов транскрипции включают Serum Response Factor (SRF) и фактор транскрипции Ets/ETS-подобную киназу-1 (ELK-1) [219]. ELK-1 является частью семейства факторов транскрипции Ets и подсемейства тройных комплексных факторов (TCF), поскольку он образует тройной комплекс с SRF в элементе ответа сыворотки (SRE) [220].Экспрессия SRF и ELK-1 необходима для оптимальной экспрессии генов UL123 и UL122 в литически инфицированных фибробластах [159], что позволяет предположить, что они являются активаторами транскрипции локуса MIE. Передача сигналов ERK/MAPK фосфорилирует ELK-1, что приводит к регуляции ремоделирования хроматина посредством взаимодействия ELK-1 с CREB-связывающим белком (CBP) [221], который обладает внутренней активностью HAT [220]. Это предполагает потенциальную роль ELK-1 в реактивации после стимулов, активирующих сигнальный путь ERK/MAPK.ERK/MAPK также регулирует иммунные сигнальные пути и является негативным регулятором гамма-интерферона (IFNγ) [222]. Элемент ответа IFNγ, активированная гамма-интерфероном последовательность (GAS), появляется дважды в дистальном энхансере MIE [168]. Делеция этих элементов приводит к снижению экспрессии белков IE72 и IE86 при низкой множественности инфекций, что сопровождается снижением роста вируса в литически инфицированных фибробластах. В то время как лечение IFNγ стимулировало экспрессию IE72 в инфицированных фибробластах, клетки, инфицированные вирусом с делецией GAS, не смогли активировать IE72 в ответ на IFNγ, предполагая, что стимуляция IFNγ области энхансера MIE активирует экспрессию MIE [223].Однако IFNγ выполняет разнообразные биологические функции, включая активацию макрофагов, а также стимуляцию нейтрофилов и естественных клеток-киллеров во время воспалительной реакции [224]. При стимуляции клетки IFNγ активируется сигнальный путь JAK-STAT, что приводит к связыванию STAT1 с элементом GAS [225]. Таким образом, интересно предположить, что в контексте инфекции HCMV GAS, связывающий дистальный энхансер MIE, может стимулировать транскрипцию из этого локуса, тем самым способствуя активации транскрипции литического гена.Менее хорошо изученные факторы транскрипции, которые активируют локус MIE, включают ядерный фактор-1/CAAT-связывающий транскрипционный фактор (NF-1/CTF), гамма-рецептор, активируемый пролифератором пероксисом (PPARγ), и семейство метилированных ДНК-связывающих белков. МДБП). NF-1/CTF имеет два сайта в уникальной и модуляторной областях локуса MIE [170,171] и может функционировать как барьер, который может предотвращать распространение репрессивной структуры хроматина [226]. В целом считается, что барьерные белки создают и поддерживают соседние домены хроматина [227], что, как можно предположить, важно для HCMV во время реактивации и литической инфекции, когда вирус должен предотвращать распространение репрессивного хроматина в область энхансера MIE.Поэтому неудивительно, что эти сайты обнаруживаются как в уникальной, так и в модуляторной областях, поскольку факторы, которые связывают эти области, функционируют, сохраняя хроматин в открытом и активном состоянии, позволяя рекрутировать активаторы транскрипции. PPARγ представляет собой ядерный рецептор, который связывается с ДНК для активации экспрессии генов через элементы, реагирующие на пролиферацию пероксисом (PPRE) [228]. Дистальный энхансер MIE содержит PPRE, с которыми связывается PPARγ, что, в свою очередь, способствует литической репликации в трофобластах [169].PPARγ обычно считается противовоспалительной молекулой на основании ее способности ингибировать транскрипцию цитокинов [228]. Можно представить себе использование противовоспалительных молекул для модуляции транскрипции, управляемой MIE, в пользу вируса, уклоняясь от иммунного ответа клеток-хозяев. Другим малоизученным фактором транскрипции является MDBP, член семейства повсеместно экспрессируемых белков [172]. Существует три сайта связывания MDBP: два сайта с высоким сродством в энхансере и один сайт с низким сродством на 5 п.н. выше сайта начала транскрипции [172,173].В то время как связывание MDBP способствует активности энхансера MIE с помощью репортерного анализа CAT [229], необходимы дальнейшие исследования, направленные на понимание его вклада в реактивацию и литическую инфекцию. В настоящее время неизвестно, ограничены ли функции этих менее изученных факторов транскрипции литической репликацией, но вполне вероятно, что каждый из них может способствовать трансактивации локуса MIE во время реактивации.

    (а) Магнитная конфигурация до радиочастотного возбуждения. (b) Моментальный снимок времени…

    Контекст 1

    … Возбуждение спиновой волны, глобальное непрерывное волновое (CW) радиочастотное (RF) поле B CW применяется. Неоднородности намагниченности на коротких кромках, вызванные размагничивающим полем и физическим ограничением, приводят к локальному снижению резонансной частоты. 33 Смоделированная магнитная конфигурация на рис. 2(а) демонстрирует это изменение намагниченности на краях. Используя однородное радиочастотное поле при f CW , в этих областях можно возбудить спиновые волны, что приведет к направленному излучению внутри волновода.Интерференция с левого и правого концов приводит к образованию картины стоячей спиновой волны. На рис. 2(b) показан компонент m z …

    Контекст 2

    … Смоделированная магнитная конфигурация на рис. 2(a) демонстрирует это изменение намагниченности на краях. Используя однородное радиочастотное поле при f CW , в этих областях можно возбудить спиновые волны, что приведет к направленному излучению внутри волновода. Интерференция с левого и правого концов приводит к образованию картины стоячей спиновой волны.На рис. 2(b) показан компонент m z, измеренный с помощью STXM во время возбуждения с f CW = 4,2 ГГц и B ext = 8 мТл. После применения алгоритма временного БПФ становится доступной информация об относительной фазе и амплитуде спиновых волн, которые кодируются в цвет и яркость соответственно (см. рис. 2(c)). 34 Последующее применение пространственного алгоритма БПФ …

    Контекст 3

    … правый конец приводит к формированию картины стоячей спиновой волны. На рис. 2(b) показан компонент m z, измеренный с помощью STXM при возбуждении с f CW = 4.2 ГГц и B ext = 8 мТл. После применения алгоритма временного БПФ становится доступной информация об относительной фазе и амплитуде спиновых волн, которые кодируются в цвет и яркость соответственно (см. рис. 2(c)). 34 Последующее применение алгоритма пространственного БПФ преобразует измерение в k-пространство, показанное на рис. 3(b). Три примера микромагнитного моделирования средней части волновода с использованием MuMax3. Номера мод n = 2 и n = 3 демонстрируют соответственно один или два узла поперек короткой оси …

    Контекст 4

    … волноводная геометрия. Сравнение между измеренным k-пространством и вычисленным соотношением дисперсии показывает полное совпадение. В то время как частота f CW (штриховая серая линия) пересекается с k 1a и k 1b , т. е. с модой n = 1, k 2 находится на модовой ветви n = 2. Чтобы получить представление о различных профилях перекрывающихся мод на рис. 2(c) мы выделяем каждый k-вектор отдельно, чтобы выделить соответствующий профиль моды. На рис. 3(c) показаны результирующие профили мод k 1a , k 1b и k 2 .Три вставки рядом с профилями показывают поперечные сечения по пунктирной линии внутри профилей мод, показывая очень хорошее совпадение теоретического предсказанного профиля mz …

    Контекст 5

    … результирующий фильм состоит из нескольких кадры во времени. Таким образом, возникает трехмерный стек изображений. Чтобы получить представление о частотной области, был использован алгоритм БПФ для преобразования каждого пикселя стека изображений. Результатом является второй набор изображений с информацией об относительной фазе и амплитуде для соответствующей частоты (см.Рис. 2(в)). Карта фазы и амплитуды при f CW была преобразована с помощью двумерного БПФ для выявления k-пространства. Дальнейшее описание этапов оценки можно найти в другом месте. 34 Для расчета дисперсионного уравнения с уравнением (1), намагниченность насыщения M s = 660 кА м -1 , константа обмена A ex = 13 пДж м -1 , …

    Контекст 6

    … Возбуждение спиновой волны, применяется глобальное непрерывное волновое (CW) радиочастотное (RF) поле B CW. Неоднородности намагниченности на коротких кромках, вызванные размагничивающим полем и физическим ограничением, приводят к локальному снижению резонансной частоты.33 Смоделированная магнитная конфигурация на рис. 2(а) демонстрирует это изменение намагниченности на краях. Используя однородное радиочастотное поле при f CW , в этих областях можно возбудить спиновые волны, что приведет к направленному излучению внутри волновода. Интерференция с левого и правого концов приводит к образованию картины стоячей спиновой волны. На рис. 2(b) показан компонент m z …

    Контекст 7

    … Смоделированная магнитная конфигурация на рис. 2(a) демонстрирует это изменение намагниченности на краях.Используя однородное радиочастотное поле при f CW , в этих областях можно возбудить спиновые волны, что приведет к направленному излучению внутри волновода. Интерференция с левого и правого концов приводит к образованию картины стоячей спиновой волны. На рис. 2(b) показан компонент m z, измеренный с помощью STXM во время возбуждения с f CW = 4,2 ГГц и B ext = 8 мТл. После применения алгоритма временного БПФ становится доступной информация об относительной фазе и амплитуде спиновых волн, которые кодируются соответственно в цвет и яркость (см.Рис. 2(в)). 34 Последующее применение пространственного алгоритма БПФ …

    Контекст 8

    … правый конец приводит к формированию картины стоячей спиновой волны. На рис. 2(b) показан компонент m z, измеренный с помощью STXM во время возбуждения с f CW = 4,2 ГГц и B ext = 8 мТл. После применения алгоритма временного БПФ становится доступной информация об относительной фазе и амплитуде спиновых волн, которые кодируются в цвет и яркость соответственно (см. рис. 2(c)). 34 Последующее применение алгоритма пространственного БПФ преобразует измерение в k-пространство, показанное на рис.3(б). Три примера микромагнитного моделирования средней части волновода с использованием MuMax3. Номера мод n = 2 и n = 3 демонстрируют соответственно один или два узла поперек короткой оси …

    Context 9

    … геометрии волновода. Сравнение между измеренным k-пространством и вычисленным соотношением дисперсии показывает полное совпадение. В то время как частота f CW (штриховая серая линия) пересекается с k 1a и k 1b , т.е. с модой n = 1, k 2 находится на модовой ветви n = 2.Чтобы получить представление о различных профилях режимов перекрывающихся режимов на рис. 2 (c), мы выделяем каждый k-вектор отдельно, чтобы выделить профиль связанного режима. На рис. 3(c) показаны результирующие профили мод k 1a , k 1b и k 2 . Три вставки рядом с профилями показывают поперечные сечения по пунктирной линии внутри профилей мод, показывая очень хорошее совпадение теоретического предсказанного профиля mz .

    Author: alexxlab

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *