4 впр ру: ВПР 4 класс Варианты с ответами

Всероссийские проверочные работы в 4 классе

Русский язык
	Всероссийские проверочные работы. Русский язык. Рабочая тетрадь. 4 класс Комиссарова Л.Ю.
	Готовимся к Всероссийской проверочной работе. Русский язык. Рабочая тетрадь. 4 класс Кузнецова М.И.
	Готовимся к Всероссийским проверочным работам. Методические рекомендации. 4 класс Ковалева Г.С., Кузнецова М.И., Рыдзе О.А., Краснянская К.А., Демидова М.Ю.
	Подготовка к Всероссийской проверочной работе по русскому языку. 4 класс Мишакина Т.Л., Александрова С.Н.
	50 шагов к успеху. Русский язык. 4 класс. Готовимся к Всероссийским проверочным работам Каясова Т.А., Самыкина С.В.
	ВПР на «Отлично»! Русский язык. Типовые тестовые задания. 10 вариантов. 4 класс Стефаненко Н.А.
	ВПР на «Отлично»! Русский язык. Обучающие проверочные работы. 4 класс Богданова В.В., Разагатова Н.А.
	Русский язык. Всероссийская проверочная работа. 4 класс Яценко И.Ф.
	Русский язык. Подготовка к Всероссийской проверочной работе. 4 класс. В 2-х частях Лаврова Н.М., Байкова Т.А., Малаховская О.В.
	Русский язык. Подготовка к Всероссийской проверочной работе. Ответы и рекомендации. 4 класс Байкова Т.А., Лаврова Н.М., Малаховская О.В.
	Русский язык. Всероссийская проверочная работа. Типовые задания. 10 вариантов заданий. 4 класс Комиссарова Л.Ю.
	ВПР. Русский язык. 10 тренировочных вариантов. 4 класс Сенина Н.А., Потураева Л.Н.
	Русский язык. Разноуровневые проверочные работы. Подготовка к ВПР. 4 класс Кузнецова М.И.
	Справочник по русскому языку. Готовимся к ВПР. 1-4 классы Петленко Л.В., Романова В.Ю.
	Русский язык. Большой сборник тренировочных вариантов заданий для подготовки к ВПР. 4 класс Батырева С.Г.
	Русский язык. Подготовка к диктантам Всероссийской проверочной работы. 1-4 классы Батырева С.Г.
Наверх
Математика
	Всероссийские проверочные работы. Математика. Рабочая тетрадь. 4 класс. В 2-х частях Сопрунова Н.А., Шноль Д.Э., Сорочан Е. М. и др.
	Готовимся к Всероссийской проверочной работе. Математика. Рабочая тетрадь. 4 класс Рыдзе О.А., Краснянская К.А.
	Готовимся к Всероссийской проверочной работе. Математика. Рабочая тетрадь. 4 класс Рыдзе О.А., Краснянская К.А.
	Математика. Подготовка к Всероссийской проверочной работе. 4 класс Захарова О. А.
	Математика. Подготовка к Всероссийской проверочной работе. Ответы, комментарии и рекомендации. 4 класс Захарова О.А., Ямшинина С.Н.
	50 шагов к успеху. Математика. 4 класс. Готовимся к Всероссийским проверочным работам Кормишина С.Н.
	Подготовка к Всероссийской проверочной работе по математике. 4 класс Гребнева Ю.А., Громкова Ю.Б.
	ВПР на «Отлично»! Математика. Типовые тестовые задания. 15 вариантов. 4 класс Федоскина О.В.
	ВПР на «Отлично»! Математика. Блицподготовка к Всероссийской проверочной работе за 30 дней. 4 класс Федоскина О.В.
	Математика. Всероссийская проверочная работа. 4 класс Дмитриева О.И.
	Математика. Разноуровневые проверочные работы. Подготовка к ВПР. 4 класс Рыдзе О.А., Краснянская К.А.
	Математика. Всероссийская проверочная работа. Типовые задания. 10 вариантов заданий. 4 класс Вольфсон Г.И., Высоцкий И.Р. Под редакцией Ященко И.В.
	Математика. Всероссийская проверочная работа. Типовые задания. 25 вариантов заданий. 4 класс Вольфсон Г.И., Высоцкий И.Р. Под редакцией Ященко И.В.
	ВПР. Математика. 10 тренировочных вариантов. 4 класс Коннова Е.Г., Ольховая Л.С.
	Математика. 200 заданий для подготовки к всероссийской проверочной работе. 4 класс Рыдзе О.А.
	Математика. 10 вариантов заданий для подготовки к всероссийской проверочной работе. 4 класс Хиленко Т.П.
Наверх
Окружающий мир
	Всероссийские проверочные работы. Окружающий мир. Рабочая тетрадь. 4 класс. В 2-х частях Мишняева Е.Ю., Рохлов В.С., Котова О.А., Скворцов П.М.
	Готовимся к Всероссийской проверочной работе. Окружающий мир. Рабочая тетрадь. 4 класс Демидова М.Ю.
	Готовимся к Всероссийской проверочной работе. Окружающий мир. Рабочая тетрадь. 4 класс Демидова М.Ю.
	50 шагов к успеху. Окружающий мир. 4 класс. Готовимся к Всероссийским проверочным работам Иванова Н.А.
	Подготовка к Всероссийской проверочной работе по окружающему миру. 4 класс Мишакина Т.Л., Елина Е.М.
	Окружающий мир. Подготовка к Всероссийской проверочной работе. 4 класс Захарова О.А., Харазова Л.В.
	ВПР на «Отлично»! Окружающий мир. Обучающие проверочные работы. 4 класс Богданова В.В., Разагатова Н.А.
	Окружающий мир. Всероссийская проверочная работа. 4 класс Яценко И.Ф.
	Окружающий мир. Всероссийская проверочная работа. Типовые задания. 10 вариантов заданий. 4 класс Волкова Е. В., Цитович Г.И.
	Окружающий мир. Всероссийская проверочная работа. Типовые задания. 25 вариантов заданий. 4 класс Волкова Е.В., Цитович Г.И.
	ВПР. Окружающий мир. Тренинг, контроль, самооценка. 4 класс Глаголева Ю.И., Архипова Ю.И.
	Окружающий мир. Большой сборник тренировочных вариантов заданий для подготовки к ВПР. 15 вариантов. 4 класс Мошнина Р.Ш.
Наверх

Всероссийские проверочные работы: уроки, тесты, задания.

Математика 4 класс

1. Тренировочный вариант 1

2. Тренировочный вариант 2

3. Тренировочный вариант 3

4. Тренировочный вариант 4

5. Тренировочный вариант 5

6. Тренировочный вариант 6

7. Тренировочный вариант 7

8. Тренировочный вариант 8

9. Тренировочный вариант 9–16

Муниципальное бюджетное общеобразовательное учреждение — ВПР

Статистика Онлайн всего: 1 Гостей: 1 Пользователей: 0

Всероссийские проверочные работы (ВПР)       Всероссийские проверочные работы не являются государственной итоговой аттестацией. Они проводятся образовательной организацией самостоятельно, с использованием единых вариантов заданий для всей Российской Федерации, разрабатываемых на федеральном уровне в строгом соответствии с Федеральным государственным образовательным стандартом. Это диагностические работы для оценки индивидуальных достижений обучающихся.        Всероссийские проверочные работы можно сравнить с контрольными работами, традиционно проводившимися в прошлые десятилетия во многих регионах и отдельных образовательных организациях. Отличительными особенностями ВПР являются единство подходов к составлению вариантов, проведению самих работ и их оцениванию, а также использование современных технологий, позволяющих обеспечить практически одновременное выполнение работ обучающимися всех образовательных организаций Российской Федерации. Задания ВПР разрабатываются на федеральном уровне. Телефон «горячей линии» по вопросам организации и проведения всероссийских проверочных работ 8 (3532) 44-66-56 — Бойко Маргарита Юрьевна — методист МКУ «ИМЦ РУО» Адрес электронной почты: margarita6277@yandex. ru 8 (3532) 39-66-10 — Коломиец Дарья Викторовна — заместитель директора по УВР Министерство образования и науки РФ http://минобрнауки.рф/ Открытый банк заданий ОГЭ на сайте ФГБНУ «Федеральный институт педагогических измерений» (ФИПИ) www.fipi.ru Федеральный институт оценки качества образования http://fioco.ru/ Министерство образования Оренбургской области www.minobr.orb.ru Государственное бюджетное учреждение «Региональный центр развития образования Оренбургской области» www.orenedu.ru Управление образования МО Оренбургский район http://56ouo32.ucoz.ru/ Нормативно-правовые документы Приказ РУО от 26.02.2021 № 71 «О проведении всероссийских проверочных работ в 2021 году»  Приказ ОО за 2021 год  План-график ВПР-2022 Методические рекомендации по проведению Всероссийских проверочных работ     4 класс 5 класс 6 класс 7 класс   8 класс 11 класс

Директор школы Ермошкина Наталья Александровна График приема граждан по личным вопросам: Вторник, суббота с 10:00 до 12:00 ПРИЕМНАЯ Оренб. проселки НОКО Календарь «  Январь 2022  » Пн Вт Ср Чт Пт Сб Вс           1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 Архив записей МинОбрНауки ГосУслуги ПерсональныеДанные ФЦИОР ЦОР Для выпускников

Вероссийские проверочные работы — 2021

1 марта 2021 года начинается период проведения ВПР. Вероссийские проверочные работы (ВПР) – это комплексный проект в области оценки качества образования, направленный на развитие единого образовательного пространства в Российской Федерации, мониторинг введения Федеральных государственных образовательных стандартов (ФГОС), формирование единых ориентиров в оценке результатов обучения, единых стандартизированных подходов к оцениванию образовательных достижений обучающихся.

Указанные цели достигаются за счет проведения ВПР в единое время по единым комплектам заданий, а также за счет использования единых для всей страны критериев оценивания.

ПРИКАЗ №119 от 11.02.21 Приказ «О проведении Федеральной службой по надзору в сфере образования и науки мониторинга качества подготовки обучающихся общеобразовательных организаций в форме всероссийских проверочных работ в 2021 году»

Документы ВПР 2020

Образцы и описания проверочных работ для проведения ВПР в 2021 году

Описания и образцы вариантов для проведения в 11 классах Всероссийских проверочных работ (ВПР) 2020 года

Письмо МОН и МП КК от 19.

02.2021 года № 4701-13-2997/21 «Об организации ВПР-2021»

Приказ ДО АМО г. Краснодар от 25.02.2021 №162 «О проведении ВПР в 10 — 11 классах»

Приказ ДО АМО г. Краснодар от 4.03.2021 №203 «О проведении ВПР в 4 — 8 классах»

График сбора данных о координаторах, ОО и участниках ВПР; График проведения ВПР в 10–11 классах; График проведения ВПР в 4–8 классах (по обязательным предметам), График проведения ВПР в 6 и 8 классах

Приказ от 24.02.2021 №95 «О проведении Всероссийских проверочных работ обучающихся 11-х классов«

Приказ от 22.03.2021 №148 «О проведении Всероссийских проверочных работ у обучающихся 7-х классов«

Приказ от 22.03.2021 №146 «О проведении Всероссийских проверочных работ у обучающихся 5-х классов«

Приказ от 22.03.2021 №147 «О проведении Всероссийских проверочных работ у обучающихся 6-х классов

« 

Приказ от 22. 03.2021 №149 «О проведении Всероссийских проверочных работ у обучающихся 8-х классов« 

 

Расписание ВПР 2021

Согласно данному документу, ВПР пройдут для обучающихся 4-8 классов в штатном режиме, для обучающихся 11 классов – по решению школы. Конкретные даты проведения ВПР для каждого класса и предмета школы определят самостоятельно в рамках установленного расписанием периода.

Начнется проведение ВПР в 2021 году с проверочных работ для 11 классов. Они пройдут по истории, биологии, географии, физике, химии и иностранным языкам (английскому, немецкому или французскому) в период с 1 по 26 марта. ВПР по географии школы могут провести для обучающихся 11 или 10 классов в зависимости от своего учебного плана.

С 15 марта по 21 мая пройдут ВПР для 4 классов (по русскому языку, математике и окружающему миру), 5 классов (русский язык, математика, история, биология), 6 и 8 классов (русский язык и математика), 7 классов (русский язык, математика, история, биология, география, обществознание, физика). Эти проверочные работы пройдут для всех классов в параллели. Также в обязательном порядке все обучающиеся 7 классов напишут с 1 апреля по 21 мая ВПР по иностранному языку (английскому, немецкому или французскому).

Обучающиеся 6 и 8 классов с 15 марта по 21 мая напишут ВПР еще по двум предметам на основе случайного выбора. Шестиклассникам могут встретиться ВПР по истории, биологии, географии или обществознанию, восьмиклассникам – по истории, биологии, географии, обществознанию, химии или физике. Информация о распределении предметов по классам в каждой параллели будет направлена школам через их личные кабинеты в Федеральной информационной системе оценки качества образования.

ВПР рекомендуется проводить на 2-4 уроках. Время, отведенное на написание проверочной работы по разным предметам и классам, будет указано в инструкции по их выполнению.

 

Памятка по ВПР для родителей

 

 

 

 

Горячая линия по вопросам ВПР

 

ВПР 2020

ВПР: проверка по плану | Новости портала «Российское образование»

Федеральная служба по надзору в сфере образования и науки напоминает, что весной 2018 года пройдут Всероссийские проверочные работы для 4, 5, 6 и 11 классов.  

ВПР – это Всероссийская проверочная работа, самая массовая оценочная процедура в системе образования.

Ученики пишут ее в своих школах в течение 1–2 уроков, чаще всего – на 2–3 уроке в школьном расписании. Проверяют ВПР коллегиально педагоги этой же школы в день написания работы. После проверки результаты вносятся в единую информационную систему, с данными которой могут работать эксперты. 

Рособрнадзор обращает внимание на то, что оценки за ВПР не влияют на получение аттестата и на перевод учащихся в следующий класс, по результатам проверочных работ не принимаются никакие обязательные решения, важные для определения дальнейшей образовательной траектории школьников. 

Что, где, когда

Первыми писать ВПР по шести учебным предметам будут одиннадцатиклассники. Проверочные работы проводятся по решению школы для учащихся, которые не выбрали предметы из перечня для сдачи на итоговой аттестации. 

* ВПР по географии может проводиться как в 11, так и в 10 классах в зависимости от учебного плана школы.

Результаты ВПР могут использоваться для формирования программ развития образования на уровне муниципалитетов, регионов и в целом по стране, для совершенствования методики преподавания предметов в конкретных школах, а также для индивидуальной работы с учащимися по устранению имеющихся пробелов в знаниях.  

По результатам ВПР не принимаются никакие обязательные решения, важные для определения дальнейшей судьбы и образовательной траектории школьника. Оценки за ВПР не влияют на получение аттестата и на перевод в следующий класс. 

Демоверсии заданий размещены на информационном портале Всероссийской проверочной работы, а также в прикрепленных ниже файлах. 

Дополнительные материалы

Образец проверочной работы по окружающему миру 4 класс

( PDF, 1.81 Мб)

Образец проверочной работы по математике 4 класс

( PDF, 322. 67 Кб)

Образец проверочной работы по географии 6 класс

( PDF, 1.13 Мб)

Образец проверочной работы по русскому языку 4 класс

( PDF, 267.32 Кб)

Образец проверочной работы по математике 5 класс

( PDF, 271.70 Кб)

Образец проверочной работы по русскому языку 5 класс

( PDF, 271.25 Кб)

Образец проверочной работы по биологии 5 класс

( PDF, 2.28 Мб)

Образец проверочной работы по истории 5 класс

( PDF, 404.82 Кб)

Образец проверочной работы по математике 6 класс

( PDF, 299. 41 Кб)

Образец проверочной работы по русскому языку 6 класс

( PDF, 272.36 Кб)

Образец проверочной работы по биологии 6 класс

( PDF, 570.49 Кб)

Образец проверочной работы по истории 6 класс

( PDF, 814.29 Кб)

Образец проверочной работы по обществознанию 6 класс

( PDF, 397.18 Кб)

За отмену всероссийских проверочных работ выступают 50% педагогов

Половина российских учителей отменила бы Всероссийские проверочные работы (ВПР), а три четверти признались, что занимаются подготовкой учеников к ним специально, хотя она не подразумевается, свидетельствуют данные Maximum Education. Кроме того, почти 40% учителей ощущают на себе давление администраций школ из-за результатов их учеников. Эксперты также считают процедуру бесполезной, а в Госдуме сообщили, что Рособрнадзор анонсировал сокращение проверок.

Учителя – за отмену

В пятницу, 21 мая, заканчиваются последние Всероссийские проверочные работы.

Образовательная компания Maximum Education провела опрос среди учителей страны и выяснила, что половина из них (50%) на месте министра просвещения отменили бы ВПР, а еще 39% модернизировали бы. Лишь 7% опрошенных сохранили бы процедуру в текущем виде.

«Согласно результатам, 58% опрошенных учителей считают, что ВПР не нужно проводить в школах — эти проверочные работы не помогают учителю и ученикам. 35% респондентов заявили, что проводить их нужно — это помогает оценить уровень знаний школьников», — говорится в исследовании (есть в распоряжении редакции).

Абсолютное большинство (75%) респондентов-педагогов признались, что целенаправленно готовят подопечных к Всероссийским проверочным, хотя официально эти работы – срез знаний, и тренировка перед ними не подразумевается.

Опрос также показал, что 36% учителей заявили о давлении со стороны школьной администрации из-за результатов ВПР.

Первый зампред Комитета Госдумы по образованию и науке Олег Смолин в беседе с «Газетой.Ru» напомнил, что, согласно позиции Рособрнадзора, ВПР – информационное мероприятие и направлено на понимание уровня знаний учеников, оно не должно влиять на зарплаты или условия труда учителей.

«Это [административное давление] прямое нарушение и стимул к тому, чтобы учителя на проверочных помогали детям — то есть стимул к искажению реальности», — заявил депутат.

Непонимание рождает негатив

«Отрицательное отношение родителей и детей к ВПР, которое сейчас есть, в первую очередь, обусловлено тем, что ни те, ни другие не знают статус этой самой работы – это обыкновенная контрольная работа. Она не решает судьбу ребенка», — считает директор по развитию Национальной родительской ассоциации (НРА) Марианна Шевченко.

Негативное отношение к работам, по ее мнению, нагнетает атмосферу вокруг Всероссийских проверочных. Причем часто ситуацию накаляют сами педагоги.

«Если адекватно воспринимать цели и задачи работы – это полезный инструмент замера результата всех участников учебного процесса», — сказала Шевченко.

В Рособрнадзоре настаивают, что получают «очень много откликов от школ, свидетельствующих о том, что в настоящий момент — это составная часть школьной системы оценки качества образования».

«Есть и очень важные эффекты федерального уровня. Так по итогам ВПР удалось сформировать список школ с низкими результатами обучения, для которых сейчас организуется масштабная программа помощи (так называемый проект «500+» — «Газета.Ru»). Кроме того, постоянная аналитическая и разъяснительная работа Рособрнадзора по повышению объективности проведения ВПР приводит к положительным сдвигам и в этом направлении», — сказали «Газете.Ru» в ведомстве.

«Сильное административное давление»

Заслуженный профессор НИУ ВШЭ, эксперт в области образования Ирина Абанкина считает ВПР «сильным административным давлением на школу».

«Когда уровень образования заканчивается, действительно, нужна независимая итоговая аттестация, а вот в отношении промежуточной, годовой аттестации – это должно быть полномочиями самой школы. Каждый учитель в состоянии сформировать оценочные процедуры, которые показывали бы освоение его предмета. Совершенно необязательно это делать по единым стандартам ВПР, присылаемым из органов управления образованием. Это нагоняет стресс на школу», — заявила она.

По словам Абанкиной, Всероссийские проверочные работы «загоняют всех в cтандартизированные рамки и требуют подчинения учебного плана этому».

«Я воспринимаю это (ВПР) как одержимость чиновников проверить образование».

Есть два типа контрольных работ, пояснил академик РАО, бывший глава Рособрнадзора Виктор Болотов.

«Одни используются как инструмент формирующий оценки, то есть с их помощью можно понять, какие проблемы в знаниях есть у учеников, провести работу над ошибками и восполнить их. А есть контрольные итоговые – они показывают, как дети усвоили материал четверти, полугодия, года. Они носят характер квалифицирующий», — уточнил он.

В этом плане предназначение ВПР остается для академика неясным.

«Если это контрольная как итоговая оценка, то это обычное итоговое оценивание — зачем проводить его на всероссийском уровне? Если это для понимания, что дети знают, а что – нет, то проводить ее в конце года странно. Ну, выяснили, где пробелы, а что с эти делать дальше – впереди же каникулы. Если это делается для того, чтобы понять положение дел в России, то главная претензия к ВПР – проверочные работы проводятся в той школе, где ребенок изучает предмет, и объективность под большим вопросом», — сказал Болотов.

Отмена ВПР, на его взгляд, не принесет вреда, однако «хорошо бы оптимизировать опыт, полученный за время существования ВПР, в проведение школьных контрольных».

Кроме того, отметил эксперт, уровень подготовки школьников в разных регионах отличается – ученик из села вряд ли сможет конкурировать с выходцем из мегаполиса. При этом задания для ВПР стандартизированы.

Большой вопрос также, зачем проводить Всероссийские проверочные среди выпускников, которые и так сдают ЕГЭ. Для понимания, как они усвоили остальные предметы, школы могут самостоятельно проводить экзамены — по вопросам, сформированным на федеральном уровне, например, объяснил Болотов.

Солидарны с отменой ВПР и учителя. «Сегодня, в Москве по крайней мере, такая развитая система мониторинга знаний и различных форм диагностик, что дополнительные Всероссийские проверочные не дают никаких дополнительных фактов о знаниях детей. Они только детей и учителей больше нагружают», — сказала председатель Московской городской организации Профсоюза работников народного образования и науки Марина Алексеева.

Проверка останется

Думский Комитет по образованию и науке обсуждал ВПР с руководством Рособрнадзора, рассказал депутат Олег Смолин.

«Он (глава Рособрнадзора Анзор Музаев) признал, что соотношение между объяснением материала и проверками — оно ненормальное. Слишком много внимания уделяется проверкам. Он обещал сократить их число», — сказал парламентарий.

Однако в Рособранадзоре сообщили, что отмена Всероссийских проверочных работ не планируется, а в следующем году «школам будет предоставлена возможность выполнять ВПР по некоторым предметам на компьютере, если у школы есть соответствующие технические возможности».

В школах Кировской области проходят ВПР

В школах региона проходят  Всероссийские проверочные работы (ВПР).

В соответствии с утвержденным Федеральной службой по надзору в сфере образования и науки расписанием  все ВПР весной 2021 г. проходят в период с 1 марта по 21 мая.

Для  обучающихся 4-8 классов ВПР проходят в штатном режиме, для учащихся 11 классов – по решению общеобразовательной организации. Конкретные даты проведения работ  для каждого класса и предмета школы определяют самостоятельно в рамках установленного расписанием периода.

С 1 по 26 марта проводятся ВПР для 11 классов. Для одиннадцатиклассников школами  могут быть  выбраны работы по истории, биологии, географии, физике, химии и иностранным языкам (английскому, немецкому или французскому). ВПР по географии школы могут провести для обучающихся 11 или 10 классов в зависимости от своего учебного плана.

С 15 марта по 21 мая проходят ВПР:

4 класс – русский язык, математика и окружающий мир;

5 класс – русский язык, математика, история, биология;

6 и 8 класс – русский язык и математика и 2 предмета на основе случайного выбора;

7 класс –  русский язык, математика, история, биология, география, обществознание, физика. Эти проверочные работы пройдут для всех классов в параллели. Также в обязательном порядке все обучающиеся 7 классов напишут с 1 апреля по 21 мая ВПР по иностранному языку (английскому, немецкому или французскому).

Напомним, что особенностью проведения проверочных работ в этом году, является  то, что шестиклассникам могут встретиться ВПР по истории, биологии, географии или обществознанию, а восьмиклассникам – по истории, биологии, географии, обществознанию, химии или физике. Информация о распределении предметов по классам в каждой параллели направлена школам через их личные кабинеты в Федеральной информационной системе оценки качества образования. Распределение предметов по конкретным классам предоставляется школам на неделе, предшествующей проведению работы по этим предметам, в личном кабинете ФИС ОКО.

Семиколенных А.М., начальник отдела педагогических измерений регионального Центра оценки качества образования сообщила:

– ВПР начались организованно во всех  общеобразовательных организациях Кировской области, включая частные школы. Работы проводятся в штатном режиме, без технологических сбоев. Всего Всероссийские проверочные работы напишут в 419  школах  региона. Инструктивные  материалы по проведению ВПР в 2021 г. и демоверсии работ размещены на сайте Рособрнадзора http://obrnadzor.gov.ru/vpr/, а также на сайте ЦОКО в разделе «Оценочные процедуры», ознакомиться с ними можно по ссылке https://coko.43edu.ru/evaluation-procedure/federal/vpr/ .

Добавим, что в Кировской области  работает горячая телефонная линия на тему проведения Всероссийских проверочных работ. Свои вопросы родители, школьники и педагоги могут задать по телефонам: 8(8332)27-27-07 (Министерство образования Кировской области), 8(8332)71-44-45 (КОГАУ ЦОКО).

Вирус иммунодефицита человека типа 1 Vpr является положительным регулятором вирусной транскрипции и инфекционности в первичных макрофагах человека | Журнал экспериментальной медицины

Мы стремились понять, влияет ли ядерная локализация или G2-активность, связанная с Vpr, на способность белка нацеливать провирусную ДНК в ядерный компартмент. Чтобы формально решить эту проблему, мы использовали полуколичественный подход ПЦР для мониторинга общих уровней провирусной генерации ВИЧ-1 и уровней провируса, обнаруженного в ядерном компартменте, в различные моменты времени после добавления исходного вирусного инокулята, как описано ранее (26). .Для этой цели использовали одноэтапные условия репликации вируса, идентичные тем, которые использовались для мониторинга продуктивной инфекции р24. Общий синтез провируса был примерно одинаковым как в присутствии, так и в отсутствие Vpr, что указывает на то, что белок не оказывает радикального влияния ни на проникновение вируса, ни на обратную транскрипцию (данные не показаны), что согласуется с предыдущими сообщениями (11, 12). ). Однако отсутствие Vpr резко уменьшало нацеливание провирусной ДНК на ядерный компартмент, и этот эффект, что интересно, проявлялся только при низком введении вируса (рис.2, A и B , дорожки 1,85 и 0,619 нг). Также ясно, что резкое ухудшение нацеливания ядер не связано с временной задержкой транспорта, т.к. уровни провирусов в ядре остаются постоянными через 72 часа (Fig. 2, A ). Однако при высоком введении вируса данные ПЦР ясно демонстрируют, что функция провирусного импорта протекает эффективно, несмотря на отсутствие Vpr (ATG ^— ) или его неспособность локализоваться в ядре (R62P) (рис. 2, B). ).Это, вероятно, связано с дополнением функции ядерного импорта при высоких вирусных поступлениях вирусным белком интегразы (13) и продуктом p17 матрикса Gag (11, 12, 36). Обратите внимание, однако, что при более низких поступлениях вируса Vpr был необходим для эффективного ядерного нацеливания провируса независимо от присутствия этих комплементарных вирусных нуклеофильных факторов (рис. 2 B , сравните дорожки 1,85 нг). Также обратите внимание, что при более низком уровне проникновения вируса неспособность Vpr локализоваться в ядре снижает его способность нацеливать провирусную ДНК в ядерный компартмент (сравните 1.85 нг дорожек R62P по сравнению с диким типом).

Однако дополнительный вклад в усиленную репликацию вносит способность белка блокировать G2, поскольку сходные уровни провирусной ДНК в ядре, присутствующие при более высоком уровне проникновения вируса (рис. 2, сравните дорожки 50 нг), по-прежнему приводят к непродуктивному инфекции в культурах R80A и ATG ^— (рис. 1). Это ясно указывает на то, что доступ к ядру сам по себе недостаточен для обеспечения продуктивной инфекции, и что способность G2-останавливать необходима для индукции продуктивной инфекции после достижения эффективного провирусного ядерного нацеливания.Этот вывод подтверждается продуктивной инфекцией мутации R62P, как только достигается эффективное нацеливание на ее провирусную ДНК с использованием высоких титров вируса (рис. 1).

Vpr ВИЧ-1 устраняет эффект сверхэкспрессии TSG101 для поддержки высвобождения вируса

Abstract

Почкование ВИЧ-1 требует взаимодействия между Gag и клеточным TSG101, чтобы инициировать сборку и высвобождение вирусных частиц через эндосомальные сортирующие комплексы, необходимые для транспорта (ESCRT).Однако в некоторых сообщениях показано, что сверхэкспрессия TSG101 ингибирует высвобождение вируса за счет нарушения процесса нацеливания на Gag. Поскольку Vpr является вспомогательным белком ВИЧ-1, он связывается с доменом p6 Gag в положении, близком к сайту связывания TSG101, не было исследовано, влияет ли Vpr на эффект сверхэкспрессии TSG101. Здесь мы обнаружили, что Vpr устраняет эффект сверхэкспрессии TSG101, чтобы спасти продукцию вируса. Совместная трансфекция TSG101 и Gag с помощью Vpr предотвращала индуцированное TSG101 накопление Gag в эндосомах и лизосомах.Кроме того, Vpr восстанавливал продукцию вирусоподобных частиц (VLP) аналогично лизосомальному ингибитору, бафиломицину A1, что указывает на то, что Vpr ингибирует индуцированное TSG101 подавление Gag через лизосомальный путь. Взаимодействие Vpr и Gag необходимо для противодействия эффекту сверхэкспрессии TSG101, поскольку мутант Vpr A30F, который не способен взаимодействовать с Gag и встраиваться в вирионы, имеет сниженную способность предотвращать накопление Gag и восстанавливать продукцию VLP. Кроме того, анализ GST pull-down и анализ Biacore показали, что Vpr конкурирует с TSG101 за связывание Gag.Эти результаты показывают, что Vpr преодолевает эффекты сверхэкспрессии TSG101, чтобы поддерживать продукцию вируса, конкурируя с TSG101 за связывание Gag.

Образец цитирования: Chutiwitoonchai N, Siarot L, Takeda E, Shioda T, Ueda M, Aida Y (2016) Vpr ВИЧ-1 устраняет эффект сверхэкспрессии TSG101 для поддержки высвобождения вируса. ПЛОС ОДИН 11(9): е0163100. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0163100

Редактор: Джамиль С. Саад, Университет Алабамы в Бирмингеме, США

Поступила в редакцию: 15 декабря 2015 г. ; Принято: 2 сентября 2016 г.; Опубликовано: 20 сентября 2016 г.

Авторское право: © 2016 Chutiwitoonchai et al.Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные содержатся в документе и в его файлах вспомогательной информации.

Финансирование: Эта работа была частично поддержана грантом на исследования в области медицинских наук от Министерства здравоохранения, труда и социального обеспечения Японии (Исследования ВИЧ/СПИДа), http://www.mhlw.go.jp/index.shtml. Номера грантов: 10103951, 13801920, 15фк0410010х0002. Получатель: Я.А. Спонсоры не участвовали в разработке исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Белок Gag вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) первоначально транслируется как предшественник p55 Gag (Pr55 Gag), который затем расщепляется вирусной протеазой на матрицу p17 (MA), капсид p24 (CA) , нуклеокапсид p7 (NC) и белки p6 во время созревания вируса.MA, CA и NC являются структурными белками. Домен MA миристоилирован по N-концу для доставки Gag Pr55 на плазматическую мембрану, в то время как домен NC рекрутирует вирусную геномную РНК [1, 2]. Домен p6 играет две важные роли: сборка/почкование вируса и встраивание Vpr в вирионы. Сборка/отпочкование ВИЧ-1 происходит посредством клеточных эндосомальных сортирующих комплексов, необходимых для транспорта (ESCRT) [3-5]. Механизм ESCRT представляет собой мультибелковый комплекс, включающий субъединицы ESCRT-0, ESCRT-I, ESCRT-II, ESCRT-III и ESCRT; этот механизм функционирует во время биогенеза мультивезикулярных телец (МВТ), цитокинеза и макроаутофагии [6, 7]. ЭСКРТ, перехваченная ВИЧ-1, описана во многих сообщениях [8–13]. Процесс инициируется посредством взаимодействия между поздним (L)-доменом (мотив PTAP, расположенный в домене Gag p6) и доменом варианта убиквитина E2 (UEV) гена 101 предрасположенности к опухолям (TSG101), компонента ESCRT-I. Затем домен Gag p6 рекрутирует AIP1 (или ALIX; вспомогательный белок ESCRT) через свой альтернативный L-домен, LYPX _n L [14, 15]. Эти взаимодействия приводят к рекрутированию белков ESCRT-III, т. е. заряженных белков 1 MVB (CHMP1), CHMP2 и CHMP4, в место сборки с образованием отпочковавшейся шейки вирусной частицы на плазматической мембране.Заключительный этап почкования вируса опосредуется рекрутированием АТФазы, ассоциированной с сортировкой белков вакуолярных белков 4 (VPS4), которая необходима для стадии деления мембраны, которая позволяет высвобождению вириона из плазматической мембраны.

В некоторых сообщениях определена еще одна роль домена Gag p6: включение Vpr, вспомогательного белка ВИЧ-1, в вирион через его LXSLFG ⁴⁶ доменов [16–19]. Включенный вирион Vpr способствует вирусной инфекционности, репликации и прогрессированию СПИДа [20–22]. Vpr также выполняет другие важные функции, включая индукцию остановки клеточного цикла G ₂ [23, 24], модуляцию апоптоза [25], активацию транскрипции длинных концевых повторов (LTR) ВИЧ-1 [26] и регуляцию клеточного сплайсинг пре-мРНК [27].

Хотя TSG101 играет роль в процессе сборки/отпочкования ВИЧ-1, сверхэкспрессия полноразмерного TSG101 ингибирует высвобождение ВИЧ-1 [28, 29].Кроме того, сверхэкспрессия N-концевой последовательности TSG101 доминантно-негативным образом блокирует функцию вирусного Gag PTAP, тогда как C-концевая последовательность TSG101 нарушает путь клеточной эндосомальной сортировки [28-30]. Поскольку домен Gag p6 содержит оба сайта связывания для TSG101 и Vpr, не выяснено, влияет ли взаимодействие Gag/Vpr на связывание Gag/TSG101. Кроме того, корреляция между этими двумя взаимодействиями может дать дополнительную информацию, которая расширит наше понимание процесса сборки ВИЧ-1.

Здесь мы провели подробный анализ влияния Vpr на опосредованный гиперэкспрессией TSG101 дефект высвобождения вируса и обнаружили, что Vpr конкурирует с TSG101 за связывание Gag, чтобы предотвратить накопление Gag и деградацию Gag в эндосомальном/лизосомальном пути, тем самым спасая высвобождение вириона.

Материалы и методы

Культура клеток и трансфекция

Клетки

HEK293T и HeLa поддерживали в модифицированной Дульбекко среде Игла (Gibco Life Technologies) с добавлением 10% эмбриональной бычьей сыворотки (Gibco Life Technologies и HyClone Laboratories) в условиях 5% CO ₂ /37°C.FuGENE HD (Promega) и Lipofectamine 3000 (Invitrogen) использовали для плазмидной трансфекции на протяжении всего исследования.

Плазмидная конструкция

Конструкция всех плазмид описана в файле S1.

Иммунофлуоресцентное окрашивание

клетки HeLa (4 × 10 ⁴ ) высевали в течение ночи на покровное стекло в 12-луночные планшеты перед трансфекцией в течение 48 ч 0,8 мкг pCAGGS/Gag и 1,5 мкг pCAGGS/eCFP-TSG101 без/с 0,5 мкг pCAGGS /HA-Vpr, 0,5 мкг pCAGGS/HA-Vpr A30F или 0. 5 мкг плазмиды pCAGGS/Vif-HA. Через 48 часов после трансфекции клетки подвергали иммунофлуоресцентному окрашиванию, как описано ранее [31], со следующими антителами: кроличьи поликлональные антитела против Gag (pAb) (Bio Academia), мышиные моноклональные антитела против HA (mAb) (Medical and Biological Laboratories Co., LTD), mAb мыши против LAMP1 (Santa Cruz Biotechnology), mAb кролика против EEA1 (Cell Signaling), mAb кролика против Rab7 (Cell Signaling), pAb кролика против Rab11 (Invitrogen), Alexa Fluor 594 козий антикроличий IgG (Invitrogen) и Alexa Fluor 633 козий антимышиный IgG (Invitrogen).Получение изображения выполняли при следующих длинах волн возбуждения/испускания (Ex./Em.): Alexa Fluor 594 при 543/618 нм, Alexa Fluor 633 при 635/647 нм и eCFP при 405/476 нм под конфокальным лазерным лучом. сканирующий микроскоп (система IX81-FV1000-D/FLUOVIEW, Olympus). Совместная локализация Gag/TSG101 была проанализирована с помощью коэффициентов корреляции Пирсона (линейная регрессия графика интенсивности флуоресценции Gag и TSG101, где 1 представляет собой общую положительную корреляцию, 0 означает отсутствие корреляции и -1 представляет собой отрицательную корреляцию) с использованием FV10-ASW v. ПО 2.1 (Олимпус).

Анализ резонансного переноса энергии флуоресценции (FRET)

клетки HeLa (4 × 10 ⁴ ) трансфицировали 0,8 мкг pCAGGS/Gag-Venus (или только pCAGGS/Venus) или 1,5 мкг pCAGGS/eCFP-TSG101 (или только pCAGGS/eCFP) без/с 0,5 мкг плазмиды pCAGGS/mRFP-Vpr в течение 48 ч, фиксировали 4% параформальдегидом, а затем визуализировали с помощью системы IX81-FV1000-D/FLUOVIEW (Olympus). Флуоресцентный сигнал, генерируемый донором eCFP, был получен на Ex.405 нм (Ex.eCFP) и Em. 460–500 нм (Em.eCFP). Флуоресцентный сигнал, генерируемый акцептором Венеры, был получен в Ex. 515 нм (Ex.Venus) и Em. 515–615 нм (Эм. Венера). Неисправленный сигнал FRET был получен на Ex.eCFP и Em.Venus. Прецизионный сигнал FRET (PFRET) был сгенерирован с использованием метода сенсибилизированного излучения путем вычитания нескорректированного сигнала FRET из сигнала, генерируемого спектральным просачиванием в акцепторный канал (флуоресцентный сигнал от донора, испускаемый в акцепторный канал, и флуоресцентный сигнал, генерируемый путем возбуждения акцептора на длине волны возбуждения донора), который получен только из образцов eCFP-TSG101 и только образцов Gag-Venus [32]. Этот процесс автоматически рассчитывался программой FV10-ASW v.2.1 (Olympus). Отношение FRET рассчитывали путем деления сигнала PFRET на сигнал донора eCFP-TSG101.

Флуоресцентная микроскопия полного внутреннего отражения (TIRF)

клетки HeLa (5×10 ⁴ ) высевали на покровное стекло в 24-луночные планшеты и трансфицировали 0,3 мкг pNL43 Luc E ^— R ⁺ или pNL43 Luc E ^— R ^— , либо без/с 0,1 мкг pCAGGS/mRFP-TSG101 и 0.1 мкг плазмиды pcDNA/YFP-Vpr на 16 часов. Затем клетки фиксировали в 3,7% формальдегиде, пермеабилизировали 0,5% Triton X100 и окрашивали мышиными mAb против p24 AG3.0 [33] и овечьими антимышиными Fab’, конъюгированными с FITC (ICN Biomedicals). Изображения TIRF были получены с помощью инвертированного микроскопа Eclipse TE2000-E (Nikon).

Анализ продукции вирусоподобных частиц (ВПЧ) и вирусных частиц

VLP были получены путем трансфекции клеток HEK293T (8,3 × 10 ⁵ в 6-луночных планшетах) 0. 8 мкг pCAGGS/Gag и 1,5 мкг pCAGGS/FLAG-TSG101 без/с указанным количеством плазмид pCAGGS/Vpr или pCAGGS/Vpr A30F в течение 48 ч (см. рисунки). ВПЧ в культуральной среде очищали методом подушки из 20% сахарозы [34]. Вкратце, культуральную среду собирали и покрывали слоем 20% сахарозы перед ультрацентрифугированием при 40000 об/мин в течение 30 минут при 4°C. После удаления супернатанта к осадку VLP добавляли лизирующий буфер NET (10 мМ Tris-Cl, pH 7,4, 150 мМ NaCl, 1 мМ EDTA, 1% NP-40) и 4 × SDS-буфер для образцов для ресуспендирования перед кипячением и вестерн-анализом. блот анализ.Трансфицированные клетки собирали, промывали фосфатно-солевым буфером (PBS), лизировали буфером NET (поставляемым с полным коктейлем ингибиторов протеазы; Roche) на льду в течение 30 минут, осветляли центрифугированием при 15 000 об/мин и кипятили с образцом 4 × SDS. буфер.

Вирусные частицы были получены путем трансфекции клеток HEK293T 0,2 мкг pNL43 Luc E ^— R ⁺ или pNL43 Luc E ^— R ^— и 1 мкг pCAGGS/FLAG-TSG101 без или с указанным количество плазмид pCAGGS/Vpr, в течение 48 часов. Собирали культуральную среду, содержащую вирусные частицы, смешивали с 1/5 объема раствора для осаждения вируса PEG-it (System Biosciences) и хранили при 4°C в течение ночи перед центрифугированием при 1500×g в течение 30 мин при 4°C. Затем супернатант удаляли, а осадок вируса ресуспендировали в буфере для лизиса NET и буфере для образцов 4 × SDS перед кипячением для анализа вестерн-блоттингом. Цельноклеточные лизаты клеток-продуцентов готовили, как описано выше.

Для эксперимента с ингибиторами бафиломицина A1 (BFA1) (Sigma-Aldrich) и класто-лактацистина β-лактона (LC) (Cayman Chemical) клетки трансфицировали указанными плазмидами в течение 24 ч до добавления ингибитора и культивировали в течение далее 6 ч.

GST pull-down анализ

GST и GST-Gag были приготовлены путем трансформации B21 компетентным E . coli с плазмидой pGEX-6P-3 или pGEX-6P-3/Gag и ночной культурой с последующей индукцией бактериальной культуры (при оптической плотности 600 нм = 0,1) с 1 мМ изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозидом на 3 ч. Бактериальные клетки собирали, лизировали с помощью реагента для экстракции белка BugBuster (Novagen) при комнатной температуре в течение 20 минут, а белок GST иммобилизовали путем инкубации лизата с бусами Fast Flow с глутатион-сефарозой 4 (GE Healthcare Bio-Sciences AB) при комнатной температуре в течение 20 минут. 1 час.Затем гранулы промывали PBS и ресуспендировали в PBS с получением 50% взвеси.

Белки

FLAG-TSG101 и HA-Vpr получали из клеток HEK293T, трансфицированных плазмидой pCAGGS/FLAG-TSG101 или pCAGGS/HA-Vpr в течение 48 часов. Клетки собирали, лизировали буфером NET (поставляемым с ингибитором протеазы) и инкубировали с аффинным гелем против FLAG M2 (Sigma-Aldrich; для FLAG-TSG101) или против HA-агарозы (Sigma-Aldrich; для HA-Vpr ) при 4°С в течение 3 ч. Затем белок HA-Vpr или FLAG-TSG101 элюировали из агарозных шариков путем совместной инкубации со 100 мкг/мл пептида FLAG (Sigma-Aldrich; для FLAG-TSG101) или пептида HA (Sigma-Aldrich; для HA-Vpr ) при 4°С в течение 3 ч.

Анализ GST pull-down проводили путем совместной инкубации 10 мкл гранул GST или GST-Gag с 1 мкг белка FLAG-TSG101 либо без короткого пептида PTAP, либо с ним (аминокислотная последовательность; PEPTAPPEE, Scrum) [35], Белок BSA или HA-Vpr в 500 мкл буфера EBC (50 мМ Tris-Cl, pH 8,0, 140 мМ NaCl, 0,5% NP-40, снабженный ингибитором протеазы) в течение ночи при 4°C. Затем гранулы вытягивали, промывали буфером EBC ​​и кипятили с 4 × буфером для образцов SDS перед анализом вестерн-блоттинга. Предварительную инкубацию проводили путем инкубации гранул GST-Gag с коротким пептидом PTAP или белком HA-Vpr в течение 3 ч при 4°C перед добавлением белка FLAG-TSG101 и инкубацией в течение ночи.

Вестерн-блот анализ

Образцы белка

разделяли с помощью электрофореза в SDS-полиакриламидном геле и переносили на мембрану PVDF, как описано в другом месте [31]. Использовали следующие антитела: pAb кролика против Gag (Bio Academia), mAb мыши против Vpr (Cosmo Bio Co., LTD), mAb мыши против FLAG M2 (Sigma-Aldrich), pAb кролика против GST (Medical and Biological Laboratories Co. , LTD), pAb козы против GST (GE Healthcare), mAb мыши против β-актина (Sigma-Aldrich), конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) козьи антимышиные IgG (Amersham Biosciences), HRP — конъюгированный козий антикроличий IgG (Amersham Biosciences) и HRP-конъюгированный ослиный IgG против козьего IgG (Santa Cruz Biotechnology).Интенсивность белковых полос измеряли с использованием программного обеспечения ImageJ v.1.50.

Анализ Биакор

Белок

GST-Gag был приготовлен, как описано выше, и иммобилизован (инъекция 100 мкг/мл) на сенсорном чипе Biacore CM5 (GE Healthcare) при 6000–7000 единиц ответа (RU) с использованием набора для связывания амина (GE Healthcare) и 10 мМ ацетата натрия. , pH 4,5 по прибору Biacore T100 (GE Healthcare). Эталонную поверхность также активировали и дезактивировали реакцией сочетания амина без добавления белка.Белки FLAG-TSG101 и FLAG-Vpr были приготовлены, как описано ранее [31], и очищены с помощью обессоливающей колонки PD-10 (GE Healthcare) с последующим использованием центробежного фильтра Amicon Ultra с отсечением по молекулярной массе 10 000 (Milipore). Серийные разведения белка FLAG-TSG101 или FLAG-Vpr в концентрациях 0, 15,6, 31,3, 65,5, 125,0, 250,0 и 500,0 нМ в 1 × буфере HBS-EP+ (GE Healthcare) инъецировали на иммобилизованную и эталонную поверхности GST-Gag. при времени контакта = 180 с, расход = 10 мкл/мин, 25°С. Константу равновесной диссоциации (KD) Gag/TSG101 и кинетику и аффинность связывания Gag/Vpr анализировали с помощью Biacore T100 Evaluation v.2.0.4 (GE Healthcare) с использованием подходящих моделей: 1:1 Binding kinetic и Steady Stage Affinity. Перед анализом была исключена недостоверная точка.

Результаты

Vpr устраняет эффекты гиперэкспрессии TSG101, чтобы восстановить продукцию VLP путем предотвращения накопления и деградации Gag в лизосомах

TSG101 играет роль в сборке и почковании ВИЧ-1, взаимодействуя с L-доменом PTAP Gag p6. Однако сверхэкспрессия полноразмерного TSG101 вызывает высвобождение дефектного вируса за счет нарушения эндосомального сортировочного аппарата [29].Кроме того, сверхэкспрессия полноразмерного TSG101 снижает накопление предшественника Gag во фракции, обогащенной плазматической мембраной, в то время как увеличивает опосредованный расщеплением и созревший Gag во фракции, обогащенной ранней эндосомой [28]. Домен Gag p6 также необходим для взаимодействия Vpr с целью включения Vpr в вирусные частицы [16–19]. На рис. 1А показан сайт близкого связывания Vpr ( ¹⁵ FRFG ¹⁸ ) и TSG101 ( ⁷ PTAP ¹⁰ ). ) на домене Gag p6. Поэтому мы предположили, что взаимодействие Vpr/Gag может мешать связыванию TSG101/Gag, тем самым подавляя эффект сверхэкспрессии TSG101.Сначала мы исследовали совместную локализацию TSG101 и Gag в клетках HeLa, трансфицированных Vpr, и обнаружили, что Vpr предотвращает совместное накопление Gag, индуцированное TSG101, путем анализа коэффициентов корреляции Пирсона (рис. 1B и 1C). Этот ингибирующий эффект не проявлялся в присутствии Vif (в качестве отрицательного контроля), который не взаимодействует с Gag (фиг. 1B и 1C). Кроме того, совместная трансфекция мутантного домена Gag PTAP (от PTAP к LIRL, которые не взаимодействуют с TSG101) и TSG101 не приводила к накоплению Gag (фиг. S1A).Это указывает на участие ингибирующего эффекта Vpr и взаимодействия Gag/TSG101. Затем мы проверили ингибирующее действие Vpr с помощью анализа FRET с использованием плазмид pCAGGS/Gag-Venus, pCAGGS/eCFP-TSG101 и pCAGGS/mRFP-Vpr. Трансфекция только pCAGGS/eCFP-TSG101 (донор) или pCAGGS/Gag-Venus (акцептор) отдельно с последующим получением изображения сигналов eCFP, Venus и FRET использовалась в качестве контроля для анализа PFRET методом сенсибилизированной эмиссии [32]. ] (рис. 1D). Сигналы PFRET подтвердили совместную локализацию Gag/TSG101, и эта совместная локализация ингибировалась Vpr (рис. 1E).Кроме того, сравнение отношения FRET (сигнал PFRET, деленный на сигнал eCFP, генерируемый донором eCFP-TSG101) подтвердило, что совместная локализация Gag и TSG101 уменьшалась в присутствии Vpr (рис. 1F). Плазмида только mRFP (pCAGGS/mRFP) в качестве отрицательного контроля не ингибировала коаккумуляцию Gag/TSG101 (фиг. S1B). Эти результаты показывают, что Vpr предотвращает накопление Gag, вызванное сверхэкспрессией TSG101.

Рис. 1. Vpr предотвращает индуцированное TSG101 накопление Gag в околоядерной области.

(A) Схема, показывающая мотивы связывания TSG101 (PTAP; зеленый) и Vpr (FRFG, ELY и LXSLFG; красный) в домене Gag p6. (B) Клетки HeLa котрансфицировали 0,8 мкг pCAGGS/Gag и 1,5 мкг pCAGGS/eCFP-TSG101 без/с 0,5 мкг pCAGGS/HA-Vpr или 0,5 мкг pCAGGS/Vif-HA за 48 ч до к иммунофлуоресцентному окрашиванию антителами против Gag и против HA, с последующим окрашиванием козьими антителами Alexa Fluor 594 против кроличьих и козьими антителами Alexa Fluor 633 против мыши. Получение изображения проводили под конфокальным лазерным сканирующим микроскопом.(C) Совместная локализация Gag/TSG101 была проанализирована с помощью коэффициентов корреляции Пирсона. Данные представляют собой среднее ± стандартное отклонение результата двух независимых экспериментов. *, P <0,05 (непарный t-критерий). (DE) Клетки HeLa котрансфицировали 1,5 мкг pCAGGS/eCFP-TSG101 или 0,8 мкг pCAGGS/Gag-Venus (D) или 1,5 мкг pCAGGS/eCFP-TSG101 и 0,8 мкг pCAGGS/Gag-Venus без /с 0,5 мкг pCAGGS/mRFP-Vpr (E) в течение 48 ч до фиксации и получения изображения. Прецизионный сигнал FRET (PFRET) анализировали методом сенсибилизированной эмиссии.Цвета изображения FRET (Ex.eCFP/Em.Venus) и PFRET были преобразованы с помощью функции Hi/Lo программного обеспечения FV10-ASW v.2.1 (Olympus) для облегчения визуализации совместной локализации Gag/TSG101. (F) Отношение FRET (сигнал PFRET, деленный на сигнал донора eCFP-TSG101) совместной локализации Gag/TSG101 в отсутствие или в присутствии Vpr. Данные представляют собой среднее ± стандартное отклонение результата одного репрезентативного эксперимента из двух независимых экспериментов. *, P <0,05 (непарный t-критерий).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0163100.g001

Мы также ожидали, что если Vpr ингибирует коаккумуляцию Gag/TSG101, то он должен восстанавливать продукцию VLP в клетках, трансфицированных TSG101. Котрансфекция клеток HEK293T pCAGGS/Vpr вместе с pCAGGS/FLAG-TSG101 и pCAGGS/Gag восстанавливала продукцию VLP в культуральной среде (фиг. 2A). Кроме того, Vpr также предотвращал подавление внутриклеточного Gag из-за эффекта сверхэкспрессии TSG101. Это подавление Gag также наблюдалось ранее при использовании большого количества плазмиды TSG101 [30].Чтобы изучить механизм, с помощью которого TSG101 подавляет Gag, мы обрабатывали клетки двумя ингибиторами путей деградации клеточных белков, BFA1 (ингибитор лизосомной деградации) [36] или LC (ингибитор протеасомной деградации) [37]. Ингибиторы добавляли к клеткам HEK293T через 24 часа после трансфекции плазмидами pCAGGS/Gag и pCAGGS/TSG101 с последующим культивированием в течение еще 6 часов. Вестерн-блоттинг показал, что BFA1 восстанавливал подавление Gag и продукцию VLP в клетках, трансфицированных TSG101, в то время как LC этого не делал (рис. 2B и 2C).Отсутствовал эффект BFA1 или LC на экспрессию Gag в клетках, трансфицированных только Gag (фиг. 2B и 2C). Ингибирующее действие BFA1 и LC было подтверждено ингибированием внутриклеточной лизосомной деградации FITC-конъюгированного декстрана (для BFA1), ингибированием протеасомной деградации IκBα и циклина B, а также индукцией каспазы-3 (для LC) (S2A и S2B). Инжир). Этот результат указывает на то, что сверхэкспрессия TSG101 также подавляет Gag посредством пути лизосомной деградации. Кроме того, ранее сообщалось о совместной локализации сверхэкспрессированного TSG101 с Lysotracker и накоплении Gag в эндосомальной/лизосомально-обогащенной фракции за счет сверхэкспрессии TSG101 [28, 29].Таким образом, мы дополнительно подтвердили локализацию Gag и TSG101 с помощью лизосомального маркера (LAMP1) и эндосомальных маркеров (ранние эндосомы, EEA1; поздние эндосомы, Rab7; и рециклирующие эндосомы, Rab11). Клетки HeLa, трансфицированные pCAGGS/Gag и pCAGGS/TSG101, показали усиление совместной локализации Gag в лизосомах и эндосомах (рис. 2D и S3).

Рис. 2. Vpr восстанавливает продукцию VLP путем ингибирования TSG101-индуцированной деградации Gag через лизосомальный путь.

(A) Клетки HEK293T трансфицировали 0.8 мкг pCAGGS/Gag или с 0,8 мкг pCAGGS/Gag плюс 1,5 мкг pCAGGS/FLAG-TSG101 без/с различными количествами pCAGGS/Vpr в течение 48 часов. ВПЧ в культуральной среде собирали подушкой из 20% сахарозы. Были приготовлены лизаты цельных клеток, и образцы были подвергнуты вестерн-блоттингу с антителами против Gag, против Vpr, против FLAG и против β-актина. Нижняя панель представляет интенсивность VLP Gag из анализа вестерн-блоттинга. Данные представляют собой результат одного репрезентативного эксперимента из трех независимых экспериментов.(BC) Клетки HEK293T трансфицировали 0,8 мкг pCAGGS/Gag или 0,8 мкг pCAGGS/Gag и 1,5 мкг pCAGGS/FLAG-TSG101 в течение 24 ч перед добавлением бафиломицина A1 (B) или класто-лактацистина β -лактон (С) с последующим культивированием в течение 16 часов. Готовили VLP и лизаты цельных клеток и подвергали вестерн-блоттингу с антителами против Gag, против Vpr, против FLAG и против β-актина. Данные представляют собой результат одного репрезентативного эксперимента из двух независимых экспериментов. (D) клетки HeLa трансфицировали 0.8 мкг pCAGGS/Gag-Venus или 0,8 мкг pCAGGS/Gag-Venus плюс 1,5 мкг pCAGGS/eCFP-TSG101 в течение 48 ч с последующим иммунофлуоресцентным окрашиванием анти-LAMP1, анти-EEA1, анти-Rab7 или антитело анти-Rab11 со вторичным антителом, козьим антикроличьим антителом Alexa Fluor 594. Совместную локализацию Gag/LAMP1, Gag/EEA1, Gag/Rab7 или Gag/Rab11 анализировали с помощью коэффициентов корреляции Пирсона. Данные представляют собой средние значения ± стандартное отклонение результата одного репрезентативного эксперимента. *, P <0,05 (непарный t-критерий).

https://дои.org/10.1371/journal.pone.0163100.g002

В совокупности эти результаты позволяют предположить, что Vpr устраняет эффект сверхэкспрессии TSG101, предотвращая накопление и деградацию Gag через эндосомальный/лизосомальный путь, тем самым спасая продукцию VLP.

Взаимодействие Vpr/Gag необходимо для восстановления продукции VLP, затронутой сверхэкспрессией TSG101

Для проверки того, связано ли взаимодействие Vpr/Gag непосредственно со спасательным эффектом Vpr на продукцию VLP, был использован мутант Vpr A30F, который не способен связывать Gag и встраиваться в вирусные частицы [16, 38].Совместная трансфекция pCAGGS/Gag и pCAGGS/eCFP-TSG101 с помощью pCAGGS/HA-Vpr A30F не ингибировала коаккумуляцию Gag/TSG101 по сравнению с Vpr дикого типа (фиг. 3A и 3B). Этот результат коррелирует с вестерн-блот-анализом продукции VLP, показывающим частичный спасительный эффект мутанта Vpr A30F против сверхэкспрессии TSG101 (фиг. 3C). Не было обнаружено включения Vpr в VLP в присутствии мутанта Vpr A30F (рис. 3C), что подтверждает, что этот мутант дефектен в Gag-опосредованном включении Vpr в вирион [16, 38].Все вместе указывает на то, что взаимодействие Vpr/Gag необходимо для отмены эффектов сверхэкспрессии TSG101.

Рис. 3. Взаимодействие Vpr и Gag необходимо для отмены эффекта сверхэкспрессии TSG101.

(A) Клетки HeLa котрансфицировали 0,8 мкг pCAGGS/Gag и 1,5 мкг pCAGGS/eCFP-TSG101 без/с 0,5 мкг pCAGGS/HA-Vpr или pCAGGS/HA-Vpr A30F за 48 ч до к иммунофлуоресцентному окрашиванию антителами против Gag и против HA, с последующим окрашиванием козьими антителами Alexa Fluor 594 против кроличьих и козьими антителами Alexa Fluor 633 против мыши.Совместную локализацию Gag/TSG101 анализировали с помощью коэффициентов корреляции Пирсона (B). Данные представляют собой среднее ± стандартное отклонение результата двух независимых экспериментов. *, P <0,05 (непарный t-критерий). (C) Клетки HEK293T трансфицировали 0,8 мкг pCAGGS/Gag или 0,8 мкг pCAGGS/Gag плюс 1,5 мкг pCAGGS/FLAG-TSG101 без/с различными количествами pCAGGS/Vpr A30F или 0,08 мкг pCAGGS/Vpr (положительный контроль). Через 48 ч ВПЧ в культуральной среде собирали подушкой из 20% сахарозы.Были приготовлены лизаты цельных клеток, и образцы были подвергнуты вестерн-блоттингу с антителами против Gag, против Vpr, против FLAG и против β-актина. Нижняя панель представляет интенсивность VLP Gag из анализа вестерн-блоттинга. Данные представляют собой результат одного репрезентативного эксперимента из двух независимых экспериментов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0163100.g003

Vpr спасает высвобождение вируса от гиперэкспрессии TSG101

Мы также подтвердили способность Vpr ингибировать коаккумуляцию Gag/TSG101 с помощью репортерной плазмиды ВИЧ-1, которая экспрессирует или не экспрессирует интактный белок Vpr (pNL43 Luc E ^— R ⁺ или pNL43 Luc E ^— R ^— соответственно) в присутствии/отсутствии экспрессионных плазмид TSG101 и Vpr. TIRF-микроскопию использовали, чтобы показать совместную локализацию Gag/TSG101 на клеточной поверхности и во внутриклеточной области вблизи плазматической мембраны. В дополнение к перинуклеарной локализации сверхэкспрессированного TSG101 (рис. 1 и 3), TIRF-визуализация показала, что TSG101 локализован в точечной структуре близко к плазматической мембране (рис. 4A–4C). Вирусный белок Gag также локализован в точечном паттерне (рис. 4A-a и 4A-b), что является типичным паттерном, связанным с сайтами сборки и почкования вируса [39]. Совместная трансфекция pNL43 Luc E ^— R ⁺ (Vpr ⁺ ) и pCAGGS/mRFP-TSG101 не приводила к совместной локализации Gag/TSG101 (фиг. 4A-a).Однако коаккумуляция Gag/TSG101 наблюдалась в клетках, трансфицированных pNL43 Luc E ^— R ^— (Vpr ^—) и pCAGGS/mRFP-TSG101 (фиг. 4A-b). Кроме того, совместная трансфекция pcDNA/YFP-Vpr вместе с pNL43 Luc E ^— R ^— (Vpr ^—) и pCAGGS/mRFP-TSG101 устраняла эффект сверхэкспрессии TSG101 на накопление Gag (рис. 4A-b). ). Кроме того, более низкий флуоресцентный сигнал Gag, наблюдаемый на плазматической мембране или вблизи нее в этом образце, может указывать на эффективное высвобождение вириона, индуцированное Vpr, в условиях сверхэкспрессии TSG101 (рис. 4A-b).

Рис. 4. Vpr устраняет опосредованное TSG101 ингибирование высвобождения вирусных частиц.

(А) Клетки HeLa трансфицировали 0,3 мкг pNL43 Luc E ^— R ⁺ (Vpr ⁺ ) или pNL43 Luc E ^— R ^— без — (Vpr0) или без —0 (Vpr0) 0,1 мкг pCAGGS/mRFP-TSG101 и 0,1 мкг pcDNA/YFP-Vpr в течение 16 ч до иммунофлуоресцентного окрашивания антителом против Gag AG3.0 с последующим введением овечьего антимышиного антитела, конъюгированного с FITC. Белые стрелки указывают на то, что Gag/TSG101 совместно локализованы на плазматической мембране или рядом с ней, наблюдаемой с помощью флуоресцентной микроскопии полного внутреннего отражения (TIRF).Данные представляют собой результат одного репрезентативного эксперимента из двух независимых экспериментов. (BC) Клетки HEK293T трансфицировали 0,2 мкг pNL43 Luc E ^— R ⁺ (Vpr ⁺ ) (B) или pNL43 Luc E ^— R ^— (Vpr ^{— 900) (C) вместе с 1 мкг pCAGGS/FLAG-TSG101 и различными количествами pCAGGS/Vpr в течение 48 часов. Вирусные частицы в культуральной среде собирали осаждением ПЭГ. Были приготовлены лизаты цельных клеток, и образцы были подвергнуты вестерн-блоттингу с антителами против Gag, против Vpr, против FLAG и против β-актина.Данные представляют собой результат одного репрезентативного эксперимента из двух независимых экспериментов.}

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0163100.g004

В соответствии с результатами экспериментов по продукции VLP, Vpr также противодействовал эффектам сверхэкспрессии TSG101 на продукцию вирусных частиц. Сверхэкспрессия TSG101 снижала внутриклеточную экспрессию p55 Gag и уровни вирионных p55 и p24 Gag в культуральной среде как pNL43 Luc E ^— R ⁺ (Vpr ⁺ ), так и pNL43 Luc E ^— R ^— (Впр ^— ) (Фиг. 4Б и 4С).Однако эффект сверхэкспрессии TSG101 был более очевиден в присутствии плазмиды pNL43 Luc E ^— R ^— (Vpr ^—) (фиг. 4C). Эффект TSG101 на pNL43 Luc E ^— R ⁺ (Vpr ⁺ ) может быть обусловлен высокой экспрессией плазмиды TSG101, тем самым преодолевая эффект Vpr, экспрессируемого плазмидой pNL43 Luc E ^— R ⁺ . (рис. 4В). Как и ожидалось, котрансфекция pCAGGS/Vpr восстанавливала внутриклеточную экспрессию Gag p55 и продукцию вириона, и этот эффект зависел от количества плазмиды pCAGGS/Vpr (фиг. 4B и 4C).Способность Vpr восстанавливать продукцию вируса была ниже для pNL43 Luc E ^— R ^— , чем для pNL43 Luc E ^— R ⁺ , поскольку последний экспрессирует интактный Vpr (фиг. 4B и 4C).

В совокупности эти результаты подтверждают роль Vpr в преодолении эффектов сверхэкспрессии TSG101 в отношении накопления Gag, деградации Gag и дефекта продукции VLP/вириона.

Vpr конкурирует с TSG101 за связывание Gag

Чтобы исследовать механизм, лежащий в основе Vpr-опосредованного ингибирования эффектов сверхэкспрессии TSG101, мы провели конкурентный нисходящий анализ с использованием Gag, TSG101 и Vpr.GST или GST-Gag иммобилизовали на гранулах глутатион-сефарозы и совместно инкубировали с белком FLAG-TSG101 в отсутствие или в присутствии белка HA-Vpr. Короткий пептидный ингибитор PTAP, нацеленный на домен UEV TSG101 [35], использовали в качестве положительного контроля для ингибирования связывания Gag/TSG101, тогда как BSA использовали в качестве отрицательного контроля. Результаты показали, что связывание Gag/TSG101 снижалось в присутствии PTAP или Vpr, что указывает на то, что Vpr конкурирует с TSG101 за Gag (фиг. 5A). Кроме того, предоставление возможности Vpr связывать Gag в течение 3 ч перед добавлением белка TSG101 еще больше снижало связывание Gag/TSG101 (фиг. 5B).Не было никакой разницы в эффекте PTAP в условиях до инкубации, поскольку короткий пептид PTAP нацелен на белок TSG101. Кинетику связывания и аффинность Gag/TSG101 и Gag/Vpr затем сравнивали с помощью анализа Biacore с использованием поверхности сенсорного чипа с иммобилизованным Gag. На поверхность вводили различные концентрации очищенного белка FLAG-TSG101 или FLAG-Vpr для измерения ответа. Затем данные об ответе из двух независимых экспериментов индивидуально подгоняли к модели связывания 1:1 для кинетического анализа или к модели стабильной стадии сродства для анализа сродства.Сенсограммы кинетики связывания Gag/TSG101 и Gag/Vpr предполагают быструю ассоциацию и диссоциацию обоих взаимодействий (рис. 5C). TSG101 быстрее связывается и диссоциирует с Gag при константе скорости ассоциации (k _a ) 9,24 × 10 ⁵ M ^-1 с ^-1 и константе скорости диссоциации (k _d ) 2,23 × 090 10 10 . −2 с ^-1 при сравнении с Vпр (k _a = 3,73 × 10 ⁵ M ^-1 с ^-1 и k _d = 7.19 × 10 ^-3 с ^-1 ). Кроме того, аффинность связывания Gag/TSG101 (KD = 55,18 нМ) была только в 6,2 раза выше, чем у Gag/Vpr (KD = 342,58 нМ) (рис. 5D). Эти результаты могут подтверждать возможность Vpr конкурировать с TSG101 за взаимодействие с Gag.

Рис. 5. Vpr конкурирует с TSG101 за связывание с Gag.

(A) Белок GST или GST-Gag иммобилизовали на гранулах глутатион-сефарозы перед инкубацией в течение ночи с очищенным белком FLAG-TSG101 в отсутствие/присутствии 48.3 мкг/мл короткого пептида PTAP (положительный контроль, нацеленный на домен UEV TSG101), 48,3 мкг/мл BSA (отрицательный контроль) или 2,0 или 4,0 мкг/мл очищенного белка HA-Vpr. Гранулы собирали, промывали и подвергали вестерн-блоттингу с антителами против FLAG и против GST. На нижней панели представлены средние значения интенсивности ± SD для Gag-связанного TSG101 из анализа вестерн-блоттинга четырех независимых образцов. *, P <0,05 (непарный t-критерий). (B) GST-Gag совместно инкубировали с очищенными FLAG-TSG101 и 48.3 мкг/мл короткого пептида PTAP или 2 мкг/мл белка HA-Vpr (конкурентная инкубация, КИ) или связывание с коротким пептидом PTAP или белком HA-Vpr в течение 3 ч перед совместной инкубацией с белком FLAG-TSG101 (преинкубация, пи). После инкубации в течение ночи гранулы удаляли, промывали и подвергали вестерн-блоттингу с антителами против FLAG и против GST. Нижняя панель представляет интенсивность Gag-связанного TSG101 из анализа вестерн-блоттинга двух независимых образцов. (C-D) Белок GST-Gag был иммобилизован на сенсорном чипе Biacore CM5, и на поверхность был введен очищенный белок FLAG-TSG101 или FLAG-Vpr в различных концентрациях с помощью прибора Biacore T100.Кинетические сенсограммы связанного с Gag TSG101 при 0, 15,6, 31,3, 62,5 и 500,0 нМ (C, левая панель) и связанного с Gag Vpr при 0, 15,6, 31,3, 62,5, 125,0 и 250,0 нМ (C, правая панель) показаны. (D) Кривые подгонки сродства к устойчивой стадии Gag/TSG101 (левая панель) и Gag/Vpr (правая панель) связывания в равновесии (4 с до остановки инъекции). Черные и красные вертикальные линии представляют равновесную константу диссоциации (KD) Gag/TSG101 и аффинность связывания Gag/Vpr, репрезентативно. Данные представляют собой результат одного репрезентативного эксперимента из двух независимых экспериментов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0163100.g005

Все вместе эти данные свидетельствуют о том, что Vpr конкурирует с TSG101 за связывание Gag, тем самым ингибируя коаккумуляцию Gag/TSG101 и деградацию Gag, а также спасая дефектные VLP. /продукция вириона.

Обсуждение

Здесь мы идентифицировали молекулярный механизм, с помощью которого Vpr преодолевает эффект сверхэкспрессии TSG101 для восстановления продукции вируса. Коэкспрессия Vpr предотвращает накопление Gag в эндосомальных компартментах, ингибирует деградацию Gag в лизосомах и восстанавливает продукцию вируса в условиях сверхэкспрессии TSG101.Хотя Vpr в основном локализуется в ядре [40], некоторые молекулы присутствуют в перинуклеарной области [41] и цитоплазме, где они могут противодействовать эффектам сверхэкспрессии TSG101. Этот ингибирующий эффект Vpr может быть связан с интерференцией связывания Gag/TSG101, поскольку сайт связывания Gag/Vpr ( ¹⁵ FRFG ¹⁸ ) [19] и сайт связывания Gag/TSG101 ( ⁷ PTAP ¹⁰ ) находятся близко друг к другу; действительно, наши анализы вытягивания GST выявили конкуренцию между Vpr и TSG101 за связывание Gag. Кроме того, анализ Biacore показывает в 6,2 раза более низкую аффинность связывания и в 3,1 раза более медленную кинетику диссоциации Gag/Vpr по сравнению с Gag/TSG101, что указывает на возможность Vpr конкурировать с TSG101 за Gag. Эффект конкурентного связывания Vpr in vitro (GST pull-down) ниже, чем у in vivo (иммунофлуоресценция и продукция VLP/вируса), что может быть результатом разницы условий связывания между in vitro и в виво . Vpr может блокировать опосредованное TSG101 накопление Gag в перинуклеарной области.Затем кляп попадает на плазматическую мембрану, и происходит сборка/почкование вируса. Этот противодействующий TSG101 эффект Vpr не проявлялся столь же эффективно при использовании мутанта Vpr A30F, который дефектен в связывании Gag и Gag-опосредованном включении вириона Vpr [16, 38]. Кроме того, сверхэкспрессия TSG101 не вызывала накопления Gag LIRL, мутантного домена PTAP, который не взаимодействует с TSG101. Это говорит о том, что взаимодействие Gag/Vpr необходимо для устранения эффектов сверхэкспрессии TSG101.

Внутриклеточный Pr55 Gag посттрансляционно модифицирован добавлением миристоильной группы на N-конце; это направляет Gag на плазматическую мембрану, где происходит сборка/отпочкование вируса [1].Gag должен взаимодействовать с TSG101, чтобы инициировать сборку/почкование вириона через путь ESCRT. Представленные здесь результаты и предыдущие публикации [28, 29] показывают, что сверхэкспрессия TSG101 вызывает локализацию белка в ранних/поздних эндосомах и лизосомах. Функции TSG101 в биогенезе MVB [6, 7] могут объяснить этот паттерн локализации; однако для подтверждения этого требуются дополнительные эксперименты. Совместная экспрессия TSG101 и Gag сдвигает локализацию Gag с плазматической мембраны/цитоплазмы на эндосомы и лизосомы.Первоначально это может происходить за счет рекрутирования Gag, локализованного в плазматической мембране/цитоплазме, с помощью ранней локализации в эндосомах TSG101; Затем Gag может быть интернализован в MVB в просвете ранних эндосом с помощью TSG101 с последующей транспортировкой в ​​поздние эндосомы. Таким образом, MVB-Gag в основном накапливается в эндосомальном компартменте, который впоследствии сливается с лизосомами, что приводит к деградации Gag. Этот путь может быть подобен тому, который используется при взаимодействии TSG101/Hrs для регуляции экспрессии молекул рецептора эпидермального фактора роста клеточной поверхности (EGFR) [42].Hrs является эндосомальным белком, который взаимодействует с TSG101 через его мотив PSAP способом, сходным с взаимодействием Gag-PTAP/TSG101 [43]. Это взаимодействие TSG101/Hrs последовательно индуцирует образование EGFR-MVB в эндосомальном просвете, которые затем направляются в лизосомы для деградации [42]. Кроме того, экспрессия Gag модулирует опосредованное TSG101 подавление EGFR, тогда как экспрессия C-концевого Hrs препятствует опосредованному TSG101 высвобождению частиц Gag ВИЧ-1 [44, 45]. Эти два исследования показывают, что TSG101 регулирует внутриклеточное и внеклеточное образование мембранных частиц.Однако неясно, участвует ли Hrs в накоплении Gag в эндосомах в условиях сверхэкспрессии TSG101.

Харила и др. . [46] показали, что Vpu регулирует нацеливание Pr55 Gag на плазматическую мембрану для отпочкования внеклеточных вирусных частиц или на внутреннюю мембрану для отпочкования внутриклеточных вирусных частиц. Вновь синтезированный Gag Pr55 первоначально нацеливается на плазматическую мембрану, где он остается в присутствии вирусных Vpu для отпочкования вируса на клеточной поверхности. Без Vpu Pr55 Gag перемещается с плазматической мембраны во внутренние мембранные компартменты (эндосомы и лизосомы) по пути эндоцитоза для внутриклеточного почкования вируса [46].Кроме того, повторная локализация Gag Pr55 зависит от присутствия TSG101 или домена Gag p6 [46]. Эти данные подтверждают наши результаты, показывающие, что сверхэкспрессия TSG101 индуцирует повторную локализацию Gag в эндосомальных компартментах. Однако мы обнаружили, что дальнейшая деградация Gag происходит по эндосомальному/лизосомальному пути. Будет интересно выяснить, способствует ли сверхэкспрессия TSG101 почкованию вируса во внутренних компартментах. Кроме того, сравнение способности Vpr и Vpu восстанавливать эффекты сверхэкспрессии TSG101 может предоставить полезную информацию, которая улучшит наше понимание роли, которую играют вспомогательные вирусные белки в процессе сборки/отпочкования.

Благодарности

Мы благодарим доктора Кензо Токунага за предоставление pNL43 Luc E ^— R ⁺ (Vpr ⁺ ) и pNL43 Luc E ^— R ^— (Vpr ^{— 2 Adashi), предоставление pNF — для доктора Акио , д-р Ацуси Мияваки за предоставление pCS2/Venus и pCS2/eCFP, д-р Хиротака Сато за конструирование pCAGGS/Venus и pCAGGS/eCFP и д-р Кен Коно за конструирование pcDNA/YFP-Vpr. Мы благодарны Центру исследовательских ресурсов RIKEN BSI за помощь в анализе секвенирования ДНК.Эта работа была частично поддержана грантом на исследования в области медицинских наук от Министерства здравоохранения, труда и социального обеспечения Японии (исследования ВИЧ/СПИДа).}

Авторские вклады

1. Концептуализация: Я. А. НЦ.
2. Контроль данных: Я.А.
3. Формальный анализ: NC.
4. Финансирование приобретения: YA.
5. Расследование: NC ET MU.
6. Методология: YA NC.
7. Администрация проекта: Я.А.
8. Ресурсы: Я ТС.
9. Валидация: NC LS.
10. Письмо – первоначальный вариант: NC.
11. Написание – рецензирование и редактирование: YA NC.

Каталожные номера

1. 1. Белл Н.М., Рычаг А.М. Полипротеин Gag ВИЧ: процессинг и ранняя сборка вирусных частиц. Тенденции микробиол. 2013;21(3):136–44. Эпб 2012/12/26. пмид: 23266279.
2. 2. Освобожденный ЭО. Белки gag ВИЧ-1: разнообразные функции в жизненном цикле вируса.Вирусология. 1998;251(1):1–15. Эпублик 14 ноября 1998 г. пмид:9813197.
3. 3. Garrus JE, von Schwedler UK, Pornillos OW, Morham SG, Zavitz KH, Wang HE, et al. Tsg101 и путь сортировки вакуолярных белков необходимы для почкования ВИЧ-1. Клетка. 2001;107(1):55–65. Эпублик 12.10.2001. пмид:11595185.
4. 4. Мартин-Серрано Дж., Занг Т., Беняш П.Д. ВИЧ-1 и вирус Эбола кодируют небольшие пептидные мотивы, которые привлекают Tsg101 к местам сборки частиц для облегчения выхода. Нат Мед.2001;7(12):1313–9. Эпублик 2001/12/01. пмид:11726971.
5. 5. VerPlank L, Bouamr F, LaGrassa TJ, Agresta B, Kikonyogo A, Leis J и др. Tsg101, гомолог убиквитин-конъюгирующих (E2) ферментов, связывает L-домен в Pr55(Gag) ВИЧ 1 типа. Proc Natl Acad Sci U S A. 2001;98(14):7724–9. Эпублик 2001/06/28. пмид:11427703; Центральный PMCID в PubMed: PMC35409.
6. 6. Макдональд Б., Мартин-Серрано Дж. Никаких условий: механизм ESCRT в почковании вируса и цитокинезе.Дж. Клеточные науки. 2009; 122 (часть 13): 2167–77. Эпб 2009/06/19. пмид: 19535732; Центральный PMCID в PubMed: PMC2723143.
7. 7. Raiborg C, Stenmark H. Механизм ESCRT для эндосомальной сортировки убиквитилированных мембранных белков. Природа. 2009;458(7237):445–52. Эпб 2009/03/28. пмид: 19325624.
8. 8. Баумгартель В., Иванченко С., Дюпон А., Сергеев М., Уайзман П.В., Крауслих Х.Г. и др. Визуализация живых клеток динамики взаимодействия сайта почкования ВИЧ с компонентом ESCRT.Nat Cell Biol. 2011;13(4):469–74. Эпублик 12.03.2011. пмид: 21394086.
9. 9. Блек М., Итано М.С., Джонсон Д.С., Томас В.К., Норт А.Дж., Беняш П.Д. и соавт. Временная и пространственная организация рекрутирования белка ESCRT во время почкования ВИЧ-1. Proc Natl Acad Sci U S A. 2014;111(33):12211–6. Эпб 2014/08/08. пмид: 25099357; Центральный PMCID в PubMed: PMC4142993.
10. 10. Prescher J, Baumgartel V, Ivanchenko S, Torrano AA, Brauchle C, Muller B, et al. Визуализация белков ESCRT со сверхвысоким разрешением в местах сборки ВИЧ-1. PLoS Патог. 2015;11(2):e1004677. Эпб 2015/02/25. пмид: 25710462; Центральный PMCID в PubMed: PMC4339578.
11. 11. Скарлата С., Картер С. Роль доменов Gag ВИЧ-1 в сборке вируса. Биохим Биофиз Акта. 2003;1614(1):62–72. Эпб 2003/07/23. пмид: 12873766.
12. 12. Сандквист В.И., Крауслих Х.Г. Сборка, почкование и созревание ВИЧ-1. Колд Спринг Харб Перспект Мед. 2012;2(7):a006924. Эпб 2012/07/05. пмид: 22762019; Центральный PMCID в PubMed: PMC3385941.
13. 13.Weiss ER, Gottlinger H. Роль клеточных факторов в развитии ВИЧ. Дж Мол Биол. 2011;410(4):525–33. Эпб 2011/07/19. пмид: 21762798; Центральный PMCID в PubMed: PMC3139153.
14. 14. Страк Б., Калистри А., Крейг С., Попова Е., Готтлингер Х.Г. AIP1/ALIX является партнером по связыванию p6 ВИЧ-1 и p9 EIAV, функционирующих при почковании вируса. Клетка. 2003;114(6):689–99. Эпб 2003/09/25. пмид: 14505569.
15. 15. Чжай К., Фишер Р.Д., Чанг Х.И., Мышка Д.Г., Сандквист В.И. , Хилл К.П.Структурно-функциональные исследования взаимодействий ALIX с поздними доменами YPX(n)L ВИЧ-1 и EIAV. Nat Struct Mol Biol. 2008;15(1):43–9. Эпублик 11.12.2007. пмид: 18066081.
16. 16. Бачанд Ф., Яо XJ, Хримеч М., Ружо Н., Коэн Э.А. Включение Vpr в вирус иммунодефицита человека типа 1 требует прямого взаимодействия с доменом p6 предшественника gag p55. Дж. Биол. Хим. 1999;274(13):9083–91. Эпб 1999/03/20. пмид:10085158.
17. 17. Кондо Э., Готтлингер Х.Г.Консервативная последовательность LXXLF является основной детерминантой p6gag, необходимой для включения Vpr вируса иммунодефицита человека типа 1. Дж Вирол. 1996;70(1):159–64. Эпб 1996/01/01. пмид:8523520; Центральный PMCID в PubMed: PMC189800.
18. 18. Сальгадо Г.Ф., Маркант Р., Фогель А., Алвес И.Д., Феллер С.Е., Морелле Н. и соавт. Структурные исследования Gag p6ct ВИЧ-1 и его взаимодействия с Vpr, определенные методом ядерного магнитного резонанса в растворе. Биохимия. 2009;48(11):2355–67. Эпублик 2009/03/04. пмид: 19254034.
19. 19. Чжу Х., Цзянь Х., Чжао Л.Дж. Идентификация домена 15FRFG в Gag p6 ВИЧ-1, необходимого для упаковки Vpr в вирион. Ретровирусология. 2004; 1:26. Эпб 2004/09/15. пмид: 15363109; Центральный PMCID в PubMed: PMC521086.
20. 20. Кали Л., Саксена Н.К., Пиллер С.К., Янс Д.А. Нарушение ядерного импорта и вирусная инкорпорация Vpr, полученного от долговременно непрогрессирующего ВИЧ. Ретровирусология. 2008; 5:67. Эпублик 22.07.2008. пмид: 18638397; Центральный PMCID в PubMed: PMC2515335.
21. 21. Гиббс Дж. С., Лакнер А. А., Ланг С. М., Саймон М. А., Сегал П. К., Даниэль М. Д. и соавт. Прогрессирование до СПИДа при отсутствии гена vpr или vpx. Дж Вирол. 1995;69(4):2378–83. Эпб 1995/04/01. пмид:7884883; Центральный PMCID в PubMed: PMC188910.
22. 22. Ланг С.М., Вигер М., Шталь-Хенниг С., Кулибали С., Хунсманн Г., Мюллер Дж. и др. Значение vpr для заражения макак-резус вирусом иммунодефицита обезьян. Дж Вирол. 1993;67(2):902–12. Эпб 1993/02/01. пмид:8380472; Центральный PMCID в PubMed: PMC237444.
23. 23. Лагетт Н., Брегнар С., Хью П., Басбус Дж., Ятим А., Ларрок М. и др. Преждевременная активация комплекса SLX4 с помощью Vpr способствует аресту G2/M и ускользанию от врожденного иммунного восприятия. Клетка. 2014;156(1–2):134–45. Эпб 2014/01/15. пмид: 24412650.
24. 24. Мураками Т., Аида Ю. Визуализация индуцированной Vpr остановки G2 и апоптоза. ПЛОС Один. 2014;9(1):e86840. Эпб 2014/01/28. пмид: 24466265; Центральный PMCID в PubMed: PMC3899331.
25. 25. Нисидзава М., Камата М., Моджин Т., Накаи Ю., Аида Ю.Индукция апоптоза белком Vpr вируса иммунодефицита человека типа 1 происходит независимо от G(2) остановки клеточного цикла. Вирусология. 2000;276(1):16–26. Эпублик 2000/10/07. пмид:11021990.
26. 26. Савайя Б.Е., Халили К., Раппапорт Дж., Серио Д., Чен В., Шринивасан А. и др. Подавление транскрипции и репликации ВИЧ-1 мутантом Vpr. Джин Тер. 1999;6(5):947–50. Эпб 1999/10/03. пмид:10505122.
27. 27. Хасидзуме С., Курамицу М., Чжан Х., Куросава Т., Камата М., Аида Ю.Вирус иммунодефицита человека типа 1 Vpr взаимодействует со сплайсосомным белком SAP145, опосредуя ингибирование сплайсинга клеточной пре-мРНК. микробы заражают. 2007;9(4):490–7. Эпублик 10 марта 2007 г. пмид: 17347016.
28. 28. Гофф А., Эрлих Л.С., Коэн С.Н., Картер К.А. Tsg101 контролирует транспортировку и высвобождение Gag вируса иммунодефицита человека типа 1. Дж Вирол. 2003;77(17):9173–82. Эпб 2003/08/14. пмид:12915533; Центральный PMCID в PubMed: PMC187429.
29. 29. Гойла-Гаур Р., Демиров Д.Г., Оренштейн Дж.М., Оно А., Фрид Э.О.Дефекты почкования и эндосомальной сортировки вируса иммунодефицита человека, вызванные сверхэкспрессией TSG101. Дж Вирол. 2003;77(11):6507–19. Эпублик 14 мая 2003 г. пмид:12743307; Центральный PMCID в PubMed: PMC155030.
30. 30. Демиров Д.Г., Оно А., Оренштейн Ю. М., Фрид Е.О. Сверхэкспрессия N-концевого домена TSG101 ингибирует почкование ВИЧ-1, блокируя функцию позднего домена. Proc Natl Acad Sci U S A. 2002;99(2):955–60. Эпб 2002/01/24. пмид:11805336; Центральный PMCID в PubMed: PMC117412.
31. 31.Chutiwitoonchai N, Kakisaka M, Yamada K, Aida Y. Сравнительный анализ семи сигналов вирусного ядерного экспорта (NES) показывает решающую роль ядерного экспорта, опосредованного третьей согласованной последовательностью NES нуклеопротеина (NP) в репликации вируса гриппа А. ПЛОС Один. 2014;9(8):e105081. Эпб 2014/08/15. пмид: 25119991; Центральный PMCID в PubMed: PMC4132019.
32. 32. Qian J, Yao B, Wu C. Методы обнаружения переноса энергии флуоресцентного резонанса: сенсибилизированное излучение и обесцвечивание акцептора.Эксперт Тер Мед. 2014;8(5):1375–80. Эпб 2014/10/08. пмид: 25289026; Центральный PMCID в PubMed: PMC4186368.
33. 33. Коно К., Такэда Э., Цуцуи Х., Куроиси А., Халме А.Е., Хоуп Т.Дж. и др. Более медленное обнажение связано с нарушением репликативной способности обезьянотропного ВИЧ-1. ПЛОС Один. 2013;8(8):e72531. Эпб 2013/08/24. пмид: 23967315; Центральный PMCID в PubMed: PMC3742594.
34. 34. Кока Л.Дж., Бейтс П. Идентификация альтернативно транслируемых изоформ тетерина с различной противовирусной и сигнальной активностью.PLoS Патог. 2012;8(9):e1002931. Эпублик 2012/10/03. пмид: 23028328; Центральный PMCID в PubMed: PMC3460627.
35. 35. Im YJ, Kuo L, Ren X, Burgos PV, Zhao XZ, Liu F и др. Кристаллографический и функциональный анализ взаимодействия ESCRT-I/HIV-1 Gag PTAP. Структура. 2010;18(11):1536–47. Эпублик 13.11.2010. пмид: 21070952; Центральный PMCID в PubMed: PMC3124085.
36. 36. Yoshimori T, Yamamoto A, Moriyama Y, Futai M, Tashiro Y. Бафиломицин A1, специфический ингибитор H(+)-АТФазы вакуолярного типа, ингибирует подкисление и деградацию белка в лизосомах культивируемых клеток.Дж. Биол. Хим. 1991;266(26):17707–12. Эпб 1991/09/15. пмид: 1832676.
37. 37. Craiu A, Gaczynska M, Akopian T, Gramm CF, Fenteany G, Goldberg AL, et al. Лактацистин и класто-лактацистин бета-лактон модифицируют множественные бета-субъединицы протеасомы и ингибируют внутриклеточную деградацию белка и презентацию антигена класса I главного комплекса гистосовместимости. Дж. Биол. Хим. 1997;272(20):13437–45. Эпб 1997/05/16. пмид:9148969.
38. 38. Яо С.Дж., Суббраманиан Р.А., Ружо Н., Буаверт Ф., Бержерон Д., Коэн Э.А.Мутагенный анализ Vpr вируса иммунодефицита человека типа 1: роль предсказанной N-концевой альфа-спиральной структуры в ядерной локализации Vpr и включении вириона. Дж Вирол. 1995;69(11):7032–44. EP 01.11.1995. пмид:7474123; Центральный PMCID в PubMed: PMC189623.
39. 39. Иванченко С., Годинес В.Дж., Лампе М., Крауслих Х.Г., Эйлс Р., Рор К. и соавт. Динамика сборки и высвобождения ВИЧ-1. PLoS Патог. 2009;5(11):e1000652. Эпублик 2009/11/07. пмид: 19893629; Центральный PMCID в PubMed: PMC2766258.
40. 40. Ди Марцио П., Чоу С., Эбрайт М., Кноблаух Р., Ландау Н.Р. Мутационный анализ остановки клеточного цикла, ядерной локализации и упаковки вирионов вируса иммунодефицита человека типа 1 Vpr. Дж Вирол. 1995;69(12):7909–16. Эпб 1995/12/01. пмид:7494303; Центральный PMCID в PubMed: PMC189735.
41. 41. Lu YL, Spearman P, Ratner L. Локализация вирусного белка R вируса иммунодефицита человека типа 1 в инфицированных клетках и вирионах. Дж Вирол. 1993;67(11):6542–50. Эпб 1993/11/01.пмид:8411357; Центральный PMCID в PubMed: PMC238091.
42. 42. Лу К., Хоуп Л.В., Браш М., Рейнхард С., Коэн С.Н. Взаимодействие TSG101 с HRS опосредует эндосомальный перенос и подавление рецепторов. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003;100(13):7626–31. Эпб 2003/06/13. пмид:12802020; Центральный PMCID в PubMed: PMC164637.
43. 43. Порниллос О., Хиггинсон Д.С., Бродячий К.М., Фишер Р.Д., Гаррус Дж.Е., Пейн М. и др. HIV Gag имитирует Tsg101-рекрутирующую активность белка Hrs человека.Джей Селл Биол. 2003;162(3):425–34. Эпб 06.08.2003. пмид:124; Центральный PMCID в PubMed: PMC2172688.
44. 44. Буамр Ф., Хоук-Лумис Б.Р., Де Лос Сантос М. , Касадей Р.Дж., Джонсон М.С., Гофф С.П. С-концевая часть белка Hrs взаимодействует с Tsg101 и препятствует продукции частиц Gag вируса иммунодефицита человека типа 1. Дж Вирол. 2007;81(6):2909–22. Эпублик 22 декабря 2006 г. пмид: 17182674; Центральный PMCID в PubMed: PMC1865988.
45. 45. Валиатан Р.Р., Реш М.Д.Экспрессия gag вируса иммунодефицита человека типа 1 модулирует индуцированное лигандом подавление рецептора EGF. Дж Вирол. 2004;78(22):12386–94. Эпб 2004/10/28. пмид: 15507625; Центральный PMCID в PubMed: PMC525099.
46. 46. Harila K, Prior I, Sjoberg M, Salminen A, Hinkula J, Suomalainen M. Vpu и Tsg101 регулируют внутриклеточное нацеливание на предшественник основного белка вируса иммунодефицита человека типа 1 Pr55gag. Дж Вирол. 2006;80(8):3765–72. Эпублик 31 марта 2006 г. пмид: 16571793; Центральный PMCID в PubMed: PMC1440481.

Лучший вейп сок калгари. Бак и мод свинчиваются вместе, чтобы придать устройству тонкий, но длинный профиль. БЕСПЛАТНЫЙ НОМЕР: 1-888-600-8715. com лучшее место для заказа медицинской марихуаны в Калгари? Как потребитель каннабиса, вы, естественно, захотите купить травку онлайн у… Хотя мы здесь, в MIST, любим оборудование, именно сок для вейпов действительно делает вейпинг великолепным. 6 раз, когда мои приступы обморока вызывали веселый хаос. Нажмите клавишу пробела, а затем клавиши со стрелками, чтобы сделать выбор.Наш солевой сок CBD для вейпа заставит вас пыхтеть облаками и наслаждаться преимуществами. Он является соучредителем литературного журнала Sheriff Nottingham и называет самые красивые места Reddit лучшим полным Cbd Vape Juice в мире своим офисом. Кофейная картошка ок. Специальная цена $37. Лечение Cbd Vape Juice Calgary часто назначают на основании симптомов, в дополнение к поведенческой и когнитивной терапии, в зависимости от человека… КУПИТЬ VAPES ОНЛАЙН. Мы предоставляем нашу продукцию по всей стране с быстрой ускоренной доставкой.Лучший вейп для сока Cbd Мысли Sun Wen vita cbd gummies уже были там. Лучшие цены в Калгари на E-Liquid, Nic Salts и Vape Hardware. Добавить в корзину. Сменная капсула SMOK Novo 2 предназначена для элегантного и тонкого комплекта многоразовых капсул Smok Novo 2⁠. Динавап. Суббота и воскресенье с 10:30 до … 7-го этажа. (Кол-во 23. 114-2323 32nd Ave NE. Продает Young Living Cbd Oil Free Cbd Oil Vape. Воскресенье с 10:00 до 20:00, 7-й этаж, вейп-сок. Bomb Sauce E-Liquid — Cereal Cake. Электронные сигареты и eJuice, мы испаряем только лабораторные производил канадские жидкости, многие из которых были отмечены наградами производителей.Вы можете попросить друзей и семью порекомендовать один из лучших брендов сока для электронных сигарет. Juice Коктейли на 7-м этаже 99. В Bargain E-Juice мы гордимся тем, что обеспечиваем канадцев в каждой провинции высококачественными жидкостями для электронных сигарет, изготовленными в лаборатории ISO 7, по доступной цене. Лучший табачный и ментоловый сок для вейпов плюс высококачественные вейп-устройства. С 2013 года справочник лучших электронных сигарет. КБД масло. Большинство одноразовых вейп-ручек на самом деле довольно мощные и содержат 100-500 мг КБД на мл. — Дэрил, 34 года.Полли В. Калгари, AB. «Если вы хотите попробовать что-то новое и ищете другие жидкости для электронных сигарет, которые претендуют на звание лучшего сока для вейпов Naked 100, мы настоятельно рекомендуем взглянуть на новую линейку продуктов компании On Ice. 6 мг — 11 долларов США. . 00 Корзина 0. ВК также является домом для Canada e-Juice, … Cbd Vape Juice Calgary для 21-го века должен решаться более Cbd Vape Juice Calgary, чем просто вдохновленные политики Вот что вы получаете: * 1x — Бутылка хали Vapors Devils Alt Vape, лучший магазин электронных сигарет в Альберте!Однако мы назвали Vaprzon нашим эксклюзивным интернет-магазином. Стартовые комплекты Vape Pen состоят из небольшого резервуара и мода в форме ручки со встроенным аккумулятором. 45 отзывов о Sangria Vape Juice (120 мл) 7th floor vape Juice. Все соки бывают с никотином или без него, различной крепости. Высококачественное оборудование для электронных сигарет и вейпов, созданное специально для вас. Заказать каннабис и продукты CBD Vaping в Британской Колумбии SALT DEVICE CBD VAPE JUICE. Juul Labs удаляет ароматизированные электронные сигареты из списка Gas and Convenience S Kbak.8 лучших одноразовых вейпов и электронных сигарет, которые стоит попробовать в 2021 году. Можете ли вы использовать масло Cbd с маслом Rimadyl Cbd в Easley Sc. Наслаждайтесь освежающим взрывом аромата зеленого яблока на каждом вдохе и бархатистым каскадом пара на каждом выдохе. В настоящее время проводятся исследования по созданию новой линии антидепрессантов (которые влияют на эндоканнабиноидную систему и помогают регулировать ее) с использованием каннабиноидов, таких как КБД, в качестве более естественного варианта лечения. Этот вейп-картридж с 510 резьбой оснащен технологией Twd. Процесс THC Vape Pen включает в себя нагревание концентратов марихуаны или марихуаны до температуры, достаточно высокой, чтобы активные соединения выделялись только в пар. доставка вейп сока калгари. Быстрый просмотр. Наш E-Juice производится свежим в Канаде. С жидкостями, содержащими свободный никотин, солевой никотин (соль никотина) и полностью настраиваемые вкусы (фрукты, кремы, заварной крем, десерты). А если вы предпочитаете жидкости премиум-класса, такие как Suicide Bunny, Cosmic Frog или Cuttwood, вы можете получить значительное количество , что приводит к дыре в вашем бюджете Beard Vape Co. В конце концов, вейп-устройство — это просто средство передвижения, но это пункт назначения сотни из них, чтобы найти лучший сок для вейпов 50/50 на рынке… Сок для вейпов 50/50 предназначен для использования в баках MTL — например, в таких баках, как Kayfun Mini — и вейп-капсулах, таких как UWELL Caliburn G.Он может производить около 3000 затяжек на ручку, а также имеет регулируемый поток воздуха. Большинство картриджей для вейпов с высоким содержанием ТГК, однако на рынок выходит все больше и больше вейп-картриджей с преобладанием КБД, а также продуктов с соотношением 1:1 ТГК:КБД. Реальная цена 59$. Уровень 1 – Онлайн-теория. Однако, если у вас есть кредитная карта или карта, используйте интернет-магазин Vapeciga: Vape Mods & Liquid, Atomizers, E-Cig Sale Online… они не идентифицируют … 25-04-21 Arrosa Dc Hemp Oil, Cbd Vape Juice Calgary Купить масло Cbd рядом со мной Cbd Vape Juice Calgary Best Of The 510 Thread Vape Pen.Наш любимый вейп-шоп в Банфе — Goro Canyon Smoke & Gift. 99 От 21 доллара. Комплект модулей Aspire BP80 мощностью 80 Вт. Ручка Shatter проста в использовании, портативна и удобна в переноске. Одноразовый вейп Flum Float обеспечивает пользователям около 3000 затяжек и изготовлен из электронного сока с 5% солевым никотином. … Самое новое поступление продуктов Vape в Канаду по самым низким ценам и с лучшими предложениями. Здесь вы найдете продукты для вейпинга, такие как электронные сигареты, жидкости для электронных сигарет, сок для вейпов, моды для вейпов, дымовые вейпы, комплекты и аксессуары Лучшие испарители. Соки Vape представлены в бесконечном разнообразии вкусов, чтобы удовлетворить любой вкус. Несмотря на то, что предстоит провести дополнительные исследования, тот факт, что КБД может облегчить жизнь тем, у кого диагностирован рассеянный склероз, является многообещающим. 7 роскошных и элегантных вкусов, обеспечивающих настоящий вкус коктейля без алкоголя! Cbd Vape Juice Calgary, кто делает лучший cbd, cbd предотвращает бронхит, время действия масла cbd, чтобы вступить в силу Cbd Vape Juice Calgary, рецепты масляных напитков cbd, от озер Паттерсон до Мельбурна, cbd coffee potland. $ 0. Мы полностью привержены тому, чтобы предлагать вам только лучшие травяные испарители на рынке, потому что мы считаем, что это плохой бизнес — продавать продукты, за которые мы не можем полностью поручиться.Nasty Juice — всемирно известный бренд из Малайзии, предлагающий широкий ассортимент жидкостей для электронных сигарет премиум-класса. Моя учетная запись У нас есть оптовая продажа жидкости для электронных сигарет в Канаде, поэтому мы являемся лучшим оптовым поставщиком жидкости для электронных сигарет для вашего магазина! Как оптовый дистрибьютор жидкостей для электронных сигарет, мы стремимся предоставить вам новейший картридж CBD Oil Vape — Viridesco Labs. Нажмите «Ввод», только если вам исполнилось 19 лет. 0 5 0 1. Купить сейчас. Нет никаких сомнений в том, что КБД — самый популярный продукт для здоровья на данный момент.Fog, Twelve Monkey, Coil Oil и т. д. Вейп-картридж представляет собой стеклянный картридж, предварительно заполненный граммом или половиной грамма масла каннабиса. Вот почему мы отправляем через Xpresspost, что занимает всего 1-2 дня для большинства крупных городов. Когда я стал старше, я страдал от болей в суставах, пока сын моего друга не порекомендовал капсулы CBD. Все жидкости для электронных сигарет, которые мы предлагаем, имеют разную концентрацию никотина, что позволяет клиентам найти именно то, что им нужно для удовлетворения их потребностей в вейпинге. На … Mystic Vapor — ваш источник лучшего в мире сока для вейпов по самым низким ценам в Канаде.18 мг/мл и выше: подходит для бывших заядлых курильщиков. Мы являемся официальными дилерами всех основных брендов испарителей, что позволяет нам получать скидки на оптовые заказы, которые мы затем передаем … Ноу-хау вейпинга быстро развивается, и мы удовлетворены тем, что у нас есть новейший окончательный список лучших ментоловых жидкостей для 2017 и самый большой товар. 403-457-1415. Выполните поиск выше или перейдите по ссылкам ниже, чтобы сузить его и найти свой лучший сок для вейпа. Наша миссия состоит в том, чтобы предоставить вам оригинальную жидкость для электронных сигарет высшего качества, интернет-магазин электронных сигарет в Дубае.Наш мозг имеет специальные рецепторы, созданные для приема CBD Oil Calgary — THC Vape Juice Cannabis Oil Concentrates. Попробуйте наши различные вкусы от лучших канадских брендов соков для вейпинга. eCigarettes Canada обеспечивает онлайн-покупки наборов для электронных сигарет, сока для электронных сигарет (E-Juice или E-Liquid) и аксессуаров в режиме 24/7. Исследования, проведенные по всей стране, показывают, что где-то от трети до половины всех курильщиков, по крайней мере, пробовали вейпинг, используя испарители среднего размера или вейп-ручки. магазин с широким выбором вкусов электронных сигарет и электронных соков.$ 60. Все смеси соков Vitality CBD e на 100% органические и основаны на чистом натуральном растительном глицерине (VG), идеально подходящем для парения в течение всего дня. Массовый магазин конопли. Мы предлагаем их жидкости для электронных сигарет 100% VG. Главная Vape Pens & Concentrates — Калгари — Первая Альберта. Вы найдете все, что вам нужно, прямо здесь, в нашем интернет-магазине вейпов. Мы тщательно отобрали и предлагаем ТОЛЬКО лучшие жидкости для вейпинга на планете. Купите соки для электронных сигарет онлайн в Канаде в Just Cannabis и найдите выбор высококачественных соков для электронных сигарет.109 долларов. Теперь вы можете купить Wax Liquidizer в Канаде. Оставить комментарий / Без категории / Без категории #503 12445 Lake Fraser Dr SE, Калгари, AB T2J7A4 Телефон: 403-454-2828 #103 305 10 St NW Calgary, AB T2N 1V5 Телефон: 403-452-2066 6536 4th St NE, Калгари , AB T2K 6H9 ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Наши продукты могут содержать никотин, ядовитое вещество, вызывающее привыкание. Покупайте соки для вейпов оптом и наш огромный выбор других соков для вейпов в VapeRanger Wholesale. Если на бутылке написано 1. В вечном путешествии к идее дома, он использует слова, чтобы Best Full Cbd Vape Juice Reddit обучать, вдохновлять, поднимать настроение и развиваться. Мы отправляем в Канаду, США и многие страны мира. В этих устройствах обычно используется капсула или резервуар, предназначенный для работы с соками, которые на 50% состоят из VG и на 50% из PG. Потребление каннабиса с годами стало более социально приемлемым. В Калгари также находится Evolution Vape как одно из лучших устройств для вейпинга. 99. Вот 14 лучших и самых красивых испарителей для марихуаны, которые вы можете приобрести прямо сейчас. Если вы обнаружите, что это недостаточно сильно, и вам нужно сделать слишком много затяжек, чтобы что-то почувствовать, вы можете купить более мощную ручку для вейпа или сок для вейпа в следующий раз.Bad Blood — жидкость для электронных сигарет Nasty Juice — 60 мл. 7 роскошных и элегантных вкусов, обеспечивающих настоящий вкус коктейля без алкоголя! Для лучшего вкуса мы рекомендуем дать нашему соку подышать без верха в течение дня (крутой). 95 канадских долларов 27 долларов. Мы заботимся о том, чтобы вы нашли для себя лучший комплект вапорайзера. Наш сок для вейпов изготовлен на 100% натуральным способом, не содержит диацетила и протестирован в лаборатории. Эта статья основана на научных данных, написанных экспертами и проверенных нашей квалифицированной редакцией.Картриджи CBD Vape — концентраты Будды. Калгари является домом для 3 магазинов CBD, и многие люди часто покупают продукты CBD, вейп-картриджи CBD, а также масла и настойки CBD. https Купить Vape Juice онлайн в Канаде с уверенностью. Найдите лучшие вейп-шопы на Yelp: найдите обзоры 47 предприятий Калгари по цене, типу или местоположению. ×. Владельцы VaporStorm Джейсон и Кристи Алксне расширились, чтобы открыть компанию E Juice в Калгари, с опытом работы в индустрии электронных сигарет с 2009 года.Короче говоря, встряхивание бутылок перед парением — отличный способ убедиться, что все в вашей бутылке жидкости для электронных сигарет идеально перемешано. . Albert, Spruce Grove, Redwood Meadows, Okotoks, Leduc и повсюду в Альберте! Вейп-ручка CBD Эдмонтон. № 1 Бестселлер. Vapebox — это служба ежемесячной подписки, которая отправляет кураторский сок и / или оборудование для вейпинга, персонализированное в соответствии с вашими вкусовыми предпочтениями. Некоторые установки, например субомные, могут легко сжигать до 12 мл сока вейпа в день. Бесплатная доставка по Калгари при заказе на сумму более 50 долларов.) являются интерактивными ссылками на медицинские исследования, прошедшие экспертную оценку. Электронная жидкость и мод. Valumarlet Cbd Масло Cbd. Канадский вейп-магазин. Побочные эффекты Капли масла Cbd Имеет ли запах масла Cbd при вейпинге. Открытия трех основных лучших идей КБД в этом столетии — это квантовая теория Планка в 19, теория относительности Эйнштейна в 1995 году и г-н Популярные бренды. Испаритель для травки, марихуаны, каннабиса, масла, концентратов, испаритель восковых трав, вейп-ручка. Вы можете отрегулировать напряжение от 2 до 8 вольт или настроить мощность от 5 до 30 Вт.Высококачественные ингредиенты обеспечивают превосходную производительность. 99 От 17 долларов. 100% канадец. 46 долларов США. Соотношение VG и PG: * 60/40. Rocky Shore Cannabis предлагает высококачественную и высокопроизводительную ручку Shatter в Канаде от ведущих брендов. О нас Новые поступления Бестселлеры Оформить заказ Доверенный магазин CBD. 1. 60 $82. Для тех, кто плохо знаком с этой формой каннабиса Электронная сигарета без PMTA Vape Juice G6 Triton I Reactor. Калгари с 2009 года. Чем выше концентрация никотина, тем дольше я буду трясти бутылку. — специализированный розничный продавец вейп-шопа/электронных сигарет в Калгари, Альберта, открытый 7 дней в неделю.2 × 2 × 4 дюйма. Чтобы создать серию On Ice, Naked 100 взяли некоторые из своих самых популярных ароматов и добавили охлаждающий взрыв ледяного ментола. Все магазины Vape pod или магазины дыма рядом со мной, основанные в 2017 году в Соединенных Штатах, были лучшим магазином вейпов, экспортирующим вейп-продукты онлайн в большинство магазинов вейпов в США и любителям вейпов по всему миру. У нас представлены лучшие бренды и самый большой выбор продуктов для вейпинга: E-Liquid, Nic Salt, Disposable Vape, Closed Pod System, Open Pod System, Vape Kit и многих других.Медицинский обзор Уильяма Моррисона, доктора медицины. На этом форуме электронной сигареты в Калгари представлен широкий спектр вкусов электронных соков, таких как Dr. Unicorn Frappe, никотиновые соли, ZonK, Cherry Lime Cola, Taffy Man, Juice Man, Juice Head Wholesale и Ejuice Distribution. С 2009 года Halo предлагает покупателям премиальную альтернативу традиционным табачным изделиям. Мы специализируемся на инструментах и ​​устройствах для вейпинга, поскольку они являются одним из лучших способов насладиться экстрактами каннабиса. Они разрешили тревогу, которую она испытывает после жизни на улице.Oranje Pharma Cannabis Concentrates здесь, чтобы принести людям в Калгари наши вкусные масляные концентраты CBD и сок THC Vape для энтузиастов вейпинга. Молочник взял теплый поджаренный фруктовый пирог, бросил его в блендер с ложкой вкуснейшего ванильного мороженого и каплей свежего молока, придав поистине сенсационный вкус прямо на ваш вкус… От сока для вейпов 50/50 до брендов которые работают по цене 1 фунт стерлингов за 10 мл жидкости, например, VPR. Габаритные размеры. Dashvapes — еще один отличный поставщик вейп-продуктов.Вейпинг — это, по сути, любая практика, которая включает использование тепла для активации соединений каннабиса без их фактического сжигания. Отзывы 45 для Sangria Vape Juice (120 мл) Cbd Vape Juice Calgary, cbd код скидки в магазине конопли, может cbd лечить психоз, cbd vape sleep Лучшие пробиотики для женщин каннабиноидов, терпенов и флавоноидов, которые были извлечены из свежих цветков марихуаны. Читать далее.Alt Vape, лучший магазин электронных сигарет в Альберте! Места по всему Калгари, в Westhills, Northland, Sage Hill, Heritage и TransCanada. 12 мг — 11 долларов. И после парения CBD я чувствую себя намного спокойнее. Выберите любой из вкусных вкусов Flum Vapor и узнайте, какой вам больше всего нравится. Haze Vape Co. по той цене, которую я буду продолжать покупать, потому что это лучший сок, который я когда-либо использовал. Виды Smok известны тем, что при использовании производят массивные ароматы и плотные облака. 1% чистый плохой сок пузырьковый эликсир.С каждым вдохом и выдохом ощущается сладкий клубничный вкус, искусно созданный из густого и гладкого молока. Как одна из крупнейших компаний по продаже электронных сигарет и товаров для вейпинга, а также интернет-магазин, E-cigar Wholesale UK в настоящее время поставляет широкий ассортимент товаров для вейпинга. В настоящее время исследователи ищут лучший способ Cbd Vape Juice Calgary. Будь то вейп-ручка, настойки, дистилляты или капсулы с маслом семян конопли, вы называете это, у нас есть это. Медицинские работники; Профессионалы фитнеса и AHA; Уровень 2 – Практические занятия.У нас будут продукты с вашим именем, так что… Самый большой выбор стартовых наборов для вейпов в Канаде. Предложение 65 штата Калифорния – ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Этот продукт может подвергнуть вас воздействию химических веществ, включая никотин, который, как известно в штате Калифорния, вызывает врожденные дефекты или другой вред репродуктивной системе. Стартовый стиль | Рот в легкие | жидкости МТЛ; High VG Eliquid для более густых облаков Мы продаем продукты практически как вейп-шоп в Калгари. 0 мг — 11 долларов. Магазин расположен в Бернаби и предлагает более трехсот вкусов электронных жидкостей.Адрес места: 330 10th Street Nw Calgary, AB T2N 1V8. БОЛЬШОЙ ВЫБОР КАЛЬЯНОВ В COWBOYS SMOKE SHOP. ВейпВайн. Любите ли вы Candy, Fruit, Dessert, Menthol или любые другие вкусы вейпов, у нас есть … Dragon Vape — лучший онлайн-магазин вейпов в Канаде, который предлагает Ejuice, E Liquid, Juul, STLTH, стартовые наборы, моды, баки и катушки, аккумулятор, Перестраиваемые атомайзеры, Vuse/Vype ePods и Nic Salt Disposables онлайн. нет Паровые магазины в Калгари. 6%. Банф является домом для 1 магазина вейпов, и многие люди часто покупают вейпы, жидкости для электронных сигарет и испарители для электронных сигарет.Cbd Vape Juice Калгари. 9 мест, где можно поиграть в поке в Калгари. Наши продукты предназначены только для совершеннолетних лиц, достигших возраста, с которого разрешено курение, а не для детей, беременных женщин или женщин, которые могут забеременеть, или любых лиц с повышенным риском или ранее существовавшим состоянием любого заболевания, которое включает, помимо прочего, сердечные заболевания, диабет, высокие… 114-2323 32-я авеню СВ. (13 августа 2021 г.) Cbd Vape Juice Calgary Hemp Oil At Target, Cbd Vape Juice Calgary <= Rural Marketing ×. 34 канадских доллара. ЛУЧШИЕ ПРОДАЖИ.Устранение любых несущественных элементов из жидкости для электронных сигарет на самом деле сделает ее более безопасной. Торопитесь, осталось всего 1 товар(а)! Для лучшего вкуса мы рекомендуем дать нашему соку подышать без верха в течение дня (крутой). Пар горячих выстрелов. Каждый сорт каннабиса производит каннабиноиды, включая коноплю. Mix & Match: 2 пакета за 21 доллар. Вы можете выбрать жидкость для парения табака из нашего ассортимента. 00 Выберите параметры. Бесплатная доставка при заказе на сумму более 99 долларов. Если вы остаетесь в штате, где это в настоящее время является законным, вам может показаться, что CBD на самом деле превратился из обычного в одновременный.Для заядлых пользователей вейпов лучше всего подойдут перезаряжаемые вейп-ручки. Vape Juice для сильного удара по горлу. органические жидкости для электронных сигарет, сертифицированные USDA, при покупке Vape Organics. Eleaf iStick 30 Вт Бокс Мод. Где Качество, Цена и Сервис не имеют себе равных. 57 Ищите одноразовую ручку CBD или ручку многоразового использования и отделяйте сок от вейпа с этим уровнем эффективности CBD. Привет, меня зовут Филиэнн! Добро пожаловать в Vape Life Mag, дружелюбное место для обзоров вейпов, руководств, новостей, потрясающих предложений вейпов и множества развлечений! Стань участником.Если вы новичок в вейпинге, вы должны начать с местного вейп-шопа, чтобы собрать информацию о продукте. В то время как съедобные продукты являются более здоровым выбором потребления каннабиса, дистиллятные ручки действуют как незаметный способ потребления… TheraVape Online Vape Shop. Бархатистая смесь 13 долларов. Cube — отличная безникотиновая вейп-ручка, которая содержит 11 мл предварительно заполненного сока. Обзор вейп-ручки THC. Из-за сложностей с доставкой, требуемых PACT ACT, мы больше не можем продавать напрямую потребителю через Интернет.Благодаря выходной мощности 230 Вт, питаемой от двух аккумуляторов 18650, вы получите наилучшие впечатления от парения. 2%, вы получите 12 миллиграммов никотина. Canadian Vaporizers — ведущий онлайн-магазин канадских вейпов, который продает широкий ассортимент восковых испарителей и ломких ручек, чтобы удовлетворить все ваши потребности в вейпинге. У нас есть лучшие отраслевые бренды, такие как вейп-сок Dr. Vitality CBD, доступный в течение трех месяцев. SITKA — тропическое совершенство, напоминающее прохладную карибскую атмосферу манго, банана, киви, маракуйи и папайи.ASAP Grape (Low Mint) — жидкость для электронных сигарет Nasty Juice — 60 мл. 00. Если у нас нет в наличии продукта для вейпинга, а вы хотите его, то мы доставим его для вас и позвоним вам, когда он будет у нас на складе. КУПИ СЕЙЧАС. Расположен в Калгари и Эдмонтоне, Канада. Картридж Delta 8 Relief Vape — Delush. CBD Vape мне очень помогает. Используйте фильтры ниже, чтобы найти вдохновение для электронных сигарет. Предлагаемые здесь резервуары для испарителей имеют лучшее качество, и вы можете быть … Добро пожаловать в 123 Vape Shop, ваш универсальный онлайн-магазин вейпинга, место, где мы стремимся предоставить нашим потребителям одну из лучших электронных жидкостей, наборы для вейпов. , замена катушек и многое другое.Восхитительно приятный и ароматный микс с теплым бархатистым послевкусием. Электронный сок Sour Power Apple Citrus сочетает в себе сладость и терпкость хрустящих сочных яблок. Мы предлагаем высококачественную жидкость для электронных сигарет американского производства. Dabber, Puffco, Pulsar и Xvape. Электронные сигареты и аксессуары Заправочная станция сигарет Vape Groupon. Легко превратите свой концентрат или масло в жидкость для электронных сигарет с продуктами Wax Liquidizer! Wax Liquidizer предназначен для улучшения вкуса и консистенции ваших концентратов и позволяет вам парить их прямо из электронной сигареты.ca (@ca_vape). Вход в магазин вейпов находится за зданием, но на территории есть бесплатная парковка. Есть два варианта на выбор; во-первых … ТГК Vape Juice по сравнению с другими Vape продуктами Наступает время, когда всем нам нужно немного сока, чтобы двигаться вперед, вот 5 мест в Калгари, где вы можете выбрать очищающий сок. Независимо от того, наслаждаетесь ли вы вкусом и технологией, находитесь ли вы на завершающей стадии отказа от курения или достигли последнего этапа метода понижения и решили полностью отказаться от никотина, безникотиновый сок для электронных сигарет — идеальное решение. Понимание уровня никотина в паровом соке желания имеет большое значение для обеспечения того, чтобы вы просто получили удовлетворение от последнего слова. Почему бестпотдоставка. Эти сменные капсулы имеют емкость 2 мл для жидкости для электронных сигарет и магнитное основание для простого использования по принципу «подключи и работай». Наиболее подозрительные аспекты сока вейпа связаны с вдыханием ароматизаторов вейпа. баки, капсулы, RDA, RTA, RDTA), катушки Ajax Vape Shop, магазин электронных сигарет и электронных соков Durham Vape Shop, магазин электронных сигарет и электронных соков ТОЛЬКО 25 баксов за 120-мл бутылку электронного сока — 905-231 -4455 — Место № 1 в Канаде для всех ваших электронных сигарет и расходных материалов для вейпинга Это, вероятно, главная причина успеха этого магазина вейпов.Содержимое Axe проверяется с медицинской точки зрения или проверяется факт Cbd Vape Juice Calgary для обеспечения достоверности информации. Заказать cannabis vape Oil с доставкой в ​​любой город Канады за 5 минут. Электронная жидкость. Наш любимый магазин CBD в Калгари — это Smoker’s Corner CBD E Juice $ 25 THC / CBD DIY E-Juice Delta 8 продуктов со всего Калгари, в магазине CBD Vape Juice Shop найдите масло CBD в средней крепости 120 мг CBD Aspire катушки, Smok и — Deluxe в течение тела и улучшает ваш CBD масло, от всех ваших любимых брендов AB, на восток идеально подходит для смешивания с электронным соком Monkeys, призванным удовлетворить ваши # 503 12445 Lake Fraser Dr SE, Calgary, AB T2J7A4 Телефон: 403- 454-2828 #103 305 10 St NW Calgary, AB T2N 1V5 Телефон: 403-452-2066 6536 4th St NE, Калгари, AB T2K 6H9 Выберите 5 пакетов по вашему выбору и сэкономьте 23%.СМЕЛЫЙ БЛОГ; Запросите спикера! Саммит ИНСАЙТ 2020; Курсы. 7-й этаж вейп сок. Сок для вейпа One Hit Wonder The Man (ранее известный как The Milkman) представляет собой восхитительную смесь клубничных фруктов и сливок с нотками уникально освежающих молочных сливок. «Лучший полный спектр Cbd Vape Juice» Planet People Cbd Oil Cbd Oil Focus Reddit Что, если я просто хочу масло Cbd Нужна ли мне карта марихуаны. Доступные цены на сок; они варьируются от 15 до 25 долларов за бутылки объемом 30 мл. Vape Pens & Concentrates — Калгари — First Alberta Filters.Когда вы используете вейп-ручку, вы получаете больше отдачи от затраченных средств. Сортировать по Сортировать по Показать 24 36 48 Посмотреть как TWD — Sativa Vape — Картридж 510 TWD от 26 долларов. Испарение марихуаны позволяет получить опасно сладкий пунш Devil’s Punchbowl, представляющий собой пунш из тропической гуавы с оттенком персика и ментоловым оттенком. Digital Imports Inc. Мы обслуживаем Канаду с 2008 года и в настоящее время отправляем в Онтарио, Британскую Колумбию, Альберту, Квебек, Саскачеван, Манитобу, остров Принца Эдуарда, Ньюфаундленд и более тяжелые формы: Cbd Vape Juice Calgary, часто определяемые Cbd Vape Juice Calgary в детстве , в то время как другие Cbd Vape Juice Calgary часто маскируются или ошибочно идентифицируются как другие состояния, такие как тревога или обсессивно-компульсивное расстройство.Что касается электронных сигарет, то трудно ошибиться с серией Mangum от ePuffer. Green Roads Cbd Oil Где купить в Мичигане Cbd Oil For Veterans Alabama Cbd Oil Law. 7 роскошных и элегантных вкусов, обеспечивающих настоящий вкус коктейля без алкоголя! Мы поставляем вам самые популярные бренды электронных соков в наши вейп-магазины. Связанный. 10 марта 2016 г. Интересная инфографика — Путеводитель по марихуане 101 Calgary AB Canada T2A 7Y8. Ну Соковыжималка. Самое лучшее в ассортименте одноразовой посуды Cube Zero — это выбор фантастических вкусов.Стартовые наборы вейп-ручек для начинающих очень удобны и просты в использовании, но также не очень настраиваются. Они поставляются с довольно большой емкостью сока (около 6 мл) с 1500 великолепными затяжками, каждая из которых обеспечивает выдающийся вкус, который 114-2323 32nd Ave NE. Naked 100 Strawberry Pom (ранее Brain Freeze) Vape Juice — Клубника | Киви | Гранат | Ментол (60 мл) Naked 100 Vape Juice. В то время как CBD и THC являются наиболее широко известными каннабиноидами, существует множество различных типов, и только недавно в их исследования были вложены значительные ресурсы. 97. Если у вас есть вопросы по конкретному вкусу, мы можем помочь; мы даже предложим попробовать новые вкусы в зависимости от ваших предпочтений. 180 Smoke предлагает широкий выбор канадских брендов сока для электронных сигарет, а также вкусы со всего мира. Выберите параметры Быстрый просмотр. В процессе экстракции используется углекислый газ или спирт, и конечным результатом является сильнодействующий жидкий продукт, который затем можно присоединить к испарителю, специально изготовленному для сока и оборудования Best vape, доставляемому ежемесячно. 9 На самом деле, «марихуана | Лучше всего нет Лучше всего то, что вы можете использовать их в любое время и не беспокоиться о том, что вы пахнете травкой! Не путать с электронной жидкостью для вейпинга: все продукты, продаваемые в нашем диспансере каннабиса в Калгари, одобрены Министерством здравоохранения Канады и не содержат никотина, табака или наполнителей.Vape Juice Оптовая продажа и более 1500 брендов электронных соков и жидкостей для электронных сигарет. Все наши жидкости для электронных сигарет не содержат PG и абсолютно не содержат ГМО, искусственных подсластителей, синтетических химикатов и пестицидов. Новый Velvety Mix Подробнее. Однако во времена династии Хань эта сублингвальная система КБД по сравнению с жевательной резинкой имела свои недостатки. Воскресенье 10:00-20:00 Лучший вейп-шоп и магазин в Канаде, доставка покупателям в Онтарио, Квебеке, Британской Колумбии, Альберте, Манитобе, Новой Шотландии, Нью-Брансуике, Острове Принца Эдуарда. 00:00 по восточному стандартному времени — оценка доставки составляет рабочие дни 8 отзывов о LifestyE Cig «Безусловно, лучший вейп-шоп в Эдмонтоне.Ежемесячное специальное предложение — Island Tobacco за 3 доллара. Когда дело доходит до поиска лучших магазинов вейпов рядом со мной, вы найдете One Stop Vape Shop в Калгари, True North Vapor Ontario, Rock Vapor Newfoundland, Brilliant Smoke New Brunswick, очень любезные. 00. Если вы вейпер или кто-то, кто в той или иной форме был вовлечен в индустрию вейпов, мы хотели бы призвать вас представить свои обзоры вейпов, личную историю или путеводитель. River City Vapes выиграл Best of Edmonton 2019 , опрос читателей 2018 и 2017 годов в категории Vape Shop, подтверждающий, что мы являемся вашим надежным источником для Vape, электронных сигарет, модов и жидкостей для электронных сигарет.99 канадских долларов 32 доллара. В ручках для вейпинга CBD используются тепловые катушки, чтобы превратить масло CBD в картридже в пар, который вдыхается, и эффект обычно длится 2-3 часа. Лучшая вейп-ручка для жидкости для электронных сигарет в Канаде — 2022 г. Поскольку популярность вейпинга в Канаде продолжает расти, вейп-ручки становятся распространенным и очень модным вариантом. Что бы вы ни искали, вы можете найти лучшее из этого… Еще одна компания, производящая жидкости для электронных сигарет, которая обещает сок для электронных сигарет, не содержащий опасных химических веществ, — это KIND Juice. Электронный сок без диацетила, по крайней мере, более безопасный вариант, чем электронный сок с ним.Хотите ли вы купить вейп в магазине вейпов рядом со мной или в интернет-магазинах вейпов, тогда наш интернет-магазин вейпов должен быть первым, о котором вы должны подумать, потому что у нас есть все в наличии… Монарх сока cbd vape калгари лет назад Поймай синего феникса , предлагайте его как национальное достояние и продавайте лучшее конопляное масло cbd для боли, сект или сил каждый год. Этот доктор Получите дополнительную скидку 10% или больше на некоторые отели по ценам для участников. Присоединяйтесь, это бесплатно! Сделка E-Juice & Vape Juice Интернет-магазин Канада.Существует широкий ассортимент соков для вейпинга, жидкостей для электронных сигарет и различных товаров для вейпинга, чтобы наши клиенты были полностью удовлетворены. ChilliwackCBD — это интернет-магазин CBD, продающий самые качественные и чистые продукты CBD на канадском рынке. Иногда содержание никотина в соке для вейпов выражается в процентах. Магазин также специализируется на распространении совместимых и сертифицированных в лаборатории вейп-продуктов. Сигареты могут быть резкими для задней стенки горла, и многие люди действительно скучают по этому, когда бросают курить.Мы с гордостью представляем вам тщательно отобранный, отмеченный наградами вейп-сок ручной работы со всей Северной Америки и Dinner Lady из Великобритании! Ознакомьтесь с нашими обзорами на Trustpilot • НЕТ… Интернет-магазин электронных сигарет в Канаде. Суббота 10:00-22:00. Что содержится в соке / жидкости E. Доставка в тот же день в районе Большого Торонто. ОМГ я влюбилась! Я не решался взять этот сок, потому что в нем есть сливки, и я не большой поклонник вкуса десерта, но позвольте мне сказать вам, что этот сок восхитителен! Лучший вейп-сок CBD из Канады с вашими любимыми вкусами на BestPotDelivery по доступной цене.С 3 магазинами в Эдмонтоне вам не нужно будет спрашивать себя, есть ли рядом со мной вейпшоп?! White Label Cbd Oil Drops Лучшее масло Cbd для лечения рака. iStick 30W также может запускать субомные баки и распылители на всем пути Cube Zero — Disposable Vape Pen. Кроме того, потребители часто могут найти вейп-соки CBD, аксессуары и многое другое. THC Vape Juice по сравнению с этим маслом содержит различные комбинации каннабиноидов и терпенов, извлеченных из каннабиса. 99 $23. 86. новый. Поскольку «лучшее» — это сугубо индивидуальный идеал, это будет полностью зависеть от… Человека.Количество Популярные Crazy Juice New Montreal Original New Fruitbae Vango Koil Killaz Popular Fluff New Lemon Killaz New Lemon Drop Популярные Berry Drop Популярные Просмотреть все. Вы также можете парить концентраты каннабиса, используя различные методы, такие как мазок. Жидкости для электронных сигарет — это лучший способ насладиться вашим вейп-устройством, а DirectVapor является домом для крупнейших онлайн-брендов соков для вейпинга. Эти продукты также известны как … CBD e Juice. Богатство органических продуктов для здоровья. Для получения дополнительной информации о силе никотина, пожалуйста, ознакомьтесь с нашей статьей о 180 … Shop Premium E-Juice, Calgary Vape Shop Vape Juice E.Теперь мне не нужно бороться со своей привычкой, только с зависимостью. REFRESH Vape Juice от SYMBIOSIS — OCEAN: Пина Колада с легкой настойкой манго. Мы также предлагаем бесплатный самовывоз при заказе на сумму более 45 долларов США. Полностью настраиваемые подписки на вейпы. Работает на Shopify vape pen Мельбурн vape магазин vape сока лучший vape сока электронные сигареты vape магазин онлайн Выбор выбора приводит к полному обновлению страницы. • Цены указаны в канадских долларах — Доставка из Калгари, Альберта • ДОСТАВКА В ЖЕ ДЕНЬ при заказе, размещенном до 17:00 EST • Mystic Vapor — это интернет-магазин вейп-соков с очень высокими стандартами. 7 роскошных и элегантных вкусов, обеспечивающих настоящий вкус коктейля без алкоголя! Vapetasia Молоко мака 100мл Vape Juice. Он сказал, что это не запутает мою голову, поэтому я покрутил его. Понедельник-четверг с 10:00 до 23:00 Пятница с 10:00 до 23:00. Станьте участником Flavours To Go, зарегистрировавшись, и получайте эксклюзивные промо-коды и уведомления о новых продуктах! Cbd Vape Juice Calgary, польза масла cbd от СДВГ у детей, лучшее масло cbd от беспокойства и депрессии, несут ли walgreens продукты cbd Купите лучшую табачную жидкость для электронных сигарет, которая на самом деле имеет вкус табака.Devil’s Punchbowl поднимает вкус напитка на новый уровень и делает его еще более освежающим благодаря ментолу! Характеристики этого продукта: * Бутылки 60 или 30 мл. Все жидкости для электронных сигарет содержат никотин без табака. Мы обслуживаем клиентов один на один, поэтому вы здесь не просто номер. Просмотрите бренды с самым высоким рейтингом, такие как Naked 100 Vape Pens в Калгари. от $16. Сатива конопли. Электронные сигареты DashVapes Burnaby и Vape Juice в Британской Колумбии. 20.02 от администратора Без рубрики. Только для взрослых (19+) На этом веб-сайте продаются товары, предназначенные только для лиц старше 19 лет.Обратите внимание, что Cbd Vape Juice Calgary — это цифры в скобках (1, 2 и т. д.). Мы с удовлетворением представляем вам широчайший ассортимент премиальных наборов для электронных сигарет, модов для вейпов, баков для вейпов, катушек для вейпов, никотина и дефицитной жидкости для электронных сигарет в вашем финальном Моменты. Выбор лучшего портативного вапорайзера. S. Главная / Бестселлеры. Просмотр корзины. Воскресенье, 10:00–20:00. Лучшие соки и жидкости для электронных сигарет на июнь 2020 года Plete.com был посвящен потребностям вейперов в возрасте 21 года и старше. В МАГАЗИНЕ КАЛЬЯНА Вы получаете только премиальное качество, Ю.980 9th Street, 16th Vape Express McKnight NE Калгари ТЕПЕРЬ ОТКРЫТО! Vape Express открыл второе заведение на McKnight Blvd NE Calgary, угол Edmonton Trail. Теперь все мои друзья Cbd Vape Juice Calgary берут их. Благодаря сравнимой дневной доставке и бесплатному течению при заказе на сумму более 20 фунтов стерлингов мы каждый раз обеспечиваем простое и приятное обслуживание покупателей. 95 канадских долларов 32 доллара. Бестселлеры Канада Калгари никотин е сок электронная жидкость eJuice eLiquid — CoolVape. Вы бы не хотели использовать сок 50/50 для вейпа в баке с сопротивлением ниже Ома, это было бы слишком… Жидкость для вейпа Опубликовано simbapuppyeyes 11 июня 2020 г.Купите полные наборы для вейпинга онлайн у SMOK, JUUL, STLTH, Vaporesso, Uwell, Aspire, Suorin, iJoy, Innokin, SnowWolf, VooPoo, Eleaf, Kanger и других. 47. Лучшие наборы Vape Pen. Инвестиции в дальнейшие исследования каннабиноидов и отказ от статуса каннабидиола как сомнительной пищевой добавки, продаваемой через Интернет, — это только первый шаг. 19 июня 2015 г. — этот пин был обнаружен пользователем Focus Vapor. Бесплатная доставка при заказе от 150 долларов. Получите лучший электронный сок в Калгари от таких брендов, как Milkman, Lemon Twist и Kilo. В дополнение к полному ассортименту наших продуктов для электронных сигарет, мы также предлагаем широкий ассортимент испарителей для электронных сигарет (также известных как моды), распылителей (например, DynaVap THE BB3: Full Unit. 4 Топ-15 с высоким содержанием калия … Не для продажи для несовершеннолетних — Продукты, продаваемые на этом сайте, могут содержать никотин, который вызывает сильное привыкание.Подпишитесь, чтобы первыми узнавать о наших эксклюзивных предложениях и последних поступлениях.Где вы можете купить масло Cbd в Joplin Mo Koi Cbd Oil 250mg Review ★ Cbd Oil Vape Juice Что он делает.Черная нота. Вы ищете продукт, которого у нас еще нет? вред для репродуктивной системы и… Магазин марихуаны Buy My Weed предлагает широкий выбор канадских масел ТГК и КБД (каннабидиол) и концентратов, включая масла полного спектра ТГК и КБД, которые были извлечены из растений каннабиса. в соках для вейпов со вкусом чизкейка и соках для электронных сигарет. Наши ароматы сока для вейпов отправят вас в путешествие с самого первого вдоха. … Покупайте качественные вейпы по неизменно низким ценам, включая самые продаваемые продукты SMOK.У них есть полки с соками, и они позволят вам попробовать столько, сколько вы хотите. ПОЛУЧИТЕ СЕГОДНЯ! ЛУЧШАЯ ЦЕНА В КАНАДЕ. Бесплатная доставка по Канаде при заказе на сумму более 35 долларов. Halo специализируется на производстве вейп-соков высочайшего качества со вкусом табака и ментола. Обычная цена $59. Одноразовые предметы — это новая тенденция, без зарядки аккумулятора и заполнения резервуаров, и если вы цените удобство простого в использовании, готового к парению устройства прямо из коробки, GCORE — это ЛУЧШЕЕ главное меню.27 долларов. Розничная цена: 49 долларов. Naked 100 Vape Juice. Рейтинги на Cbd Oil For Dogs 750 Mg Full Spectrum Cbd Capsules Cbd Oil Restless Legs. Наша команда предлагает экспертные обзоры продуктов для вейпинга, учебные пособия и ответы на ваши вопросы о безопасности электронных сигарет и жидкостей для электронных сигарет. Качество аккумуляторов ePuffer не имеет себе равных, поэтому вы можете рассчитывать на то, что ваш аккумулятор выдержит 400 циклов зарядки, прежде чем вам потребуется покупать новый. Все бутылки поставляются в фирменных алюминиевых жестяных бутылках и банках. Поставка и улучшает ваше чувство сегодня, чтобы узнать больше.Ответ (1 из 12): 😭😭Есть несколько способов, самый безопасный из которых — попросить кого-то, кому вы доверяете, старшего возраста, купить его для вас. была основана Джейсоном и Кристи Олксне в Калгари, AB, Канада. Разбивающаяся ручка разработана для обеспечения простоты использования, а также высококачественного дыма. Он состоит из видов SMOK TC Mod и SMOK TFV8 Baby V2 Tank (Baby V2 A1 0. Ежемесячный альтернативный вейп, лучший вейп-шоп в Альберте! особенно для курильщиков, желающих перейти от сжигания табака к вейпингу, поиск лучшего вкуса табачного сока для электронных сигарет является большим приоритетом.Почтовая навигация. 120 90 60 30 18 12. ca none Предлагаемое Канадское руководство по продуктам питания исключит целую группу продуктов питания. Хорошие настоящие соки, от солидного собственного бренда до лучших линеек соков премиум-класса. Есть ряд причин, по которым люди предпочитают вейпинг без никотина. True Vape Inc. с понедельника по пятницу с 10:00 до 20:00. Vapor Vape находится по адресу 204 1440 52 St NE, Канада, посмотреть местоположение Vapor Vape, фотографии или телефон 4036306664. Предлагая стартовые комплекты для вейпов и системы устройств pod от SMOK, JUUL, STLTH, VUSE, Uwell, Breeze, Vaporesso, STIG, VooPoo, Aspire, Innokin, Suorin, Joyetech, iJoy, Vandy Vape, Eleaf, … Хотя любой электронный сок будет работать для создания пара и обеспечения пользователя никотином, вкус и качество сока для вейпа — это то, что действительно имеет значение! На этой странице представлены самые качественные и вкусные жидкости для электронных сигарет во всех популярных категориях.ca — ваш канадский источник №1 для всех лучших жидкостей, стручков, совместимых с juul стручков, одноразовых вейпов и солевого сока по самым низким ценам. Картридж CBD Vape — полный спектр — концентраты Будды. Устройства Vape king и Электронные устройства vape интернет-магазин vape в Шардже и аксессуары для курения vape по самым выгодным ценам Доставка в тот же день для Дубая и Шарджи, наложенным платежом Лучший вейп для сока Cbd Sun Wen vita мысли о жевательных резинках cbd уже были там. Магазин Канна Кабана.Наш дистрибьютор E-flavors находится в Канаде. New Look Exotic Mix Ранее премиальный поставщик электронных сигарет, аксессуаров и премиальной жидкости для электронных сигарет американского производства в Калгари, Канада, компании Aromatic Canada. Alt vape калгари с лучшей доставкой в ​​тот же день, обед в кафе с шестигранной доской, калгари, эдмонтон, закусочная, люкс, лучший вейп-сок большинства категорий пор, июнь 2020. Только для взрослых (19+). Этот веб-сайт содержит материалы для взрослых и подходит только для тех, кому 19 лет и старше. Если вы заинтересованы в ручках Weed Vape в Калгари, читайте дальше, чтобы узнать, какие из них могут быть лучшими для вас.Лучшая жидкость для электронных сигарет (собираем жидкость для вейпинга) Здесь мы фактически убьем двух зайцев одним выстрелом и обсудим, как найти лучшую жидкость для электронных сигарет в целом и какая жидкость лучше всего подходит для начинающих. Кроме того, потребители часто могут найти вейп-соки CBD, моды и аккумуляторы и многое другое. 95. Авторизованный интернет-магазин. Foggy Gorilla — главный поставщик самого ароматного сока для электронных сигарет в Калгари. 99 канадских долларов. СИМБИОЗ. Уровень никотина. Мы с гордостью предлагаем ряд вариантов от CBD Isolate, Broad-Spectrum CBD, Full-Spectrum CBD и продуктов CBD с добавлением терпенов.Канадский поставщик качественных электронных сигарет и премиального никотинового сока. Проблема большинства только что перешедших курильщиков и вейперов, которые все еще ищут аутентичный вкус табака, заключается в том, что многие табачные жидкости для электронных сигарет с треском терпят неудачу, когда дело доходит до воспроизведения вкуса. Есть много видов ТГК Vape Juice, которые можно использовать в масляной вейп-ручке. Молочник 60 мл: Молочник уже здесь! Гении, создавшие линейку премиальных жидкостей для электронных сигарет Vaping Rabbit, вместе с The Milkman отправляют нас всех в путешествие на новый уровень вейпинга.Planet of the Vapes, основанный в 2014 году как магазин электронных сигарет, является лучшим интернет-магазином электронных сигарет в Эдмонтоне с широким выбором вкусов электронных сигарет и соков. 7 унций 112 10 Street NW Калгари, AB T2N1V3. Преимущества эффективности ручек CBD Vape. У нас есть большой выбор типов и вкусов жидкости для электронных сигарет для всех ваших потребностей вейпинга. 00 Добавить в корзину. На … Купите товары для вейпинга в Альберте. Получите продукты для вейпинга с каннабисом и КБД в Калгари, Эдмонтоне, Ред-Дире, Летбридже, Гранд-Прери, Шервуд-парке, Форт-Мак-Мюррей, Медисин-Хат, Эйрдри, Сент-Луисе.info@cowboyssmoke. Vape Juice Holiday S. Но если вам нужен абсолютно безопасный электронный сок, вам лучше использовать неароматизированный. Как найти лучшие соки для вейпов. Чтобы купить снаряжение для вейпинга и жидкости для вейпинга, посетите наш дочерний сайт по адресу … vape wholesale calgary. и т. д.), мы являемся любимым поставщиком электронных соков DIY в Канаде. Согласно последним данным Статистического управления Канады, около 14% молодых людей в возрасте от 15 до 19 лет заявили, что курили вейпы за последние 30 дней Vape Express McKnight NE Calgary ТЕПЕРЬ ОТКРЫТО! Vape Express открыл второе заведение на McKnight Blvd NE Calgary, угол Edmonton Trail. Более густому соку будет труднее смешивать ингредиенты по сравнению с более жидким соком. Калгари, Юг: № 18 7400 Macleod Trail SE. 5. Идеально подходит для меня. Вот как новости о заправочных станциях Vape Juice появляются в мире. Все наши соки для вейпинга поставляются проверенными в лаборатории производителями, чтобы помочь вам успокоиться, когда речь идет о вредных химических веществах, таких как диацетил! Расположение в центре города: 10104 — 105 ST Edmonton, AB — West Edmonton Mall Расположение: 8882-170 St. Если вы хотите повторить этот удар по горлу, вам понадобится жидкость для электронных сигарет с большим количеством пропиленгликоля.скидка в 20. Специальное ежемесячное предложение — Island Tobacco. Фаза 1 # 1995 Эдмонтон, AB … Лучший диспансер в Банфе. С застрахованной доставкой от побережья до побережья, высококачественной продукцией и быстрой доставкой мы в Cannaffex делаем весь процесс очень простым! Лучший вейп для сока Cbd Мысли Sun Wen vita cbd gummies уже были там. магазин Мы отправляем электронные жидкости и жидкость для электронных сигарет из США во все 50 штатов США. Выйдя на поле с впечатляющим временем автономной работы и культовым дизайном соединения, 510-нитевые вейпы делают себе имя в качестве попутчика для игроков на всех уровнях игры вейпинга.баки, капсулы, RDA, RTA, RDTA), катушки Хаген отметил, что в конце 2019 года у Alt Vape был изъят продукт в трех магазинах Калгари за использование ненадлежащих отзывов и одобрения, а также в двух местах за предложение запрещенных вкусов. Наш недавно разработанный сок CBD для солевых устройств — идеальная среда для парения из небольших, новых и более портативных устройств. 0мг, 3мг, 6мг. CBD для фибромиалгии. У нас представлены все ведущие бренды, включая Naked 100, Lemon Twist и другие. 25 . Потенциальный запрет ароматизаторов сока для вейпов вызывает споры.От различных видов сладостей, таких как конфеты, заварной крем, йогурты и фрукты, до более традиционных вкусов, таких как табак, соли никотина и ментол. Наш инвентарь включает eJuice и E-Liquid от Juice Head, Country Clouds, Innevape, Anarchist, Jam Monster и многих других. Нет товаров в корзине. Если вы испытываете какие-либо побочные эффекты или возможное курение. Мы производим соки для электронных сигарет, соки для электронных сигарет и жидкости для электронных сигарет в бутылках, а также закрытые капсулы для популярных систем вейпинга в Канаде. Предлагая стартовые наборы для вейпов и системы устройств pod от SMOK, JUUL, STLTH, VUSE, Uwell, Breeze, Vaporesso, STIG, VooPoo, Aspire, Innokin, Suorin, Joyetech, iJoy, Vandy Vape, Eleaf, … Найдите лучшие магазины Vape на Yelp. : поиск отзывов о 47 предприятиях Калгари по цене, типу или местоположению.магазин. Мы находимся по адресу 5339 Macleod Trail SW, расположенном на восточной стороне между Stampede Boot and Clothing Company и Porsche Center Calgary. Для начинающих и опытных пользователей это лучшие испарители на рынке. Planet of the Vapes — это местный бизнес в Эдмонтоне, расположенный на Калгари-Трейл недалеко от центра Саутгейт в… Bobilicious Vapes — это профессиональное ключевое слово, расположенное в Калгари, штат Альберта, и специализирующееся на вейпах, электронных сигаретах, испарителях с травами и многом другом! Для получения дополнительной информации звоните по телефону +1 (403) 333-2727. Обратите внимание, что числа в скобках (1, 2 и т. д. Vape Juice Vs Cbd Oil, Jacob Hooy Cbd Oil Full Spectrum, Power Health Cbd Oil Review, How To Use Cbd Oil In Vape Pen, Best Cbd Oil To Prevention Susses, Cbd Oil Использование и обзоры Какой тип масла Cbd мне нужен для припадков Быстрая доставка У нас есть более 250 самых популярных ароматов DIY от ведущих брендов, инструменты для сборки катушек, товары для дома и упаковочные материалы Плюсы многоразовых вейп-ручек в том, что они ( 1) более рентабельны в долгосрочной перспективе, (2) поставляются с большим количеством картриджей для вейпов / электронных соков с КБД и (3) обычно имеют более плавное ощущение во время вдыхания.Мы очень увлечены вейпингом и очень серьезно относимся к тому, что делаем. Если вы ищете настоящий вкус табака, то вы находитесь в правильном месте. 812 Edmonton Trail NE Калгари, Альберта T2E 3J6 Телефон (403) 460-6081 Электронная почта: sales@truevape. Со строгими редакционными правилами поиска источников мы Cbd Vape Juice Calgary связываемся только с академическими исследовательскими институтами, авторитетными сайтами СМИ и, когда исследования доступны, с медицинскими рецензируемыми исследованиями. Домой; Электронная жидкость; Электронная жидкость. Высочайшее качество и обслуживание клиентов, мне не придется идти в какой-либо другой магазин, в этом магазине конкурентоспособные цены и самые современные вейп-продукты.Лучшие одноразовые ручки для вейпов на рынке, а также фруктовые ароматы для вейпов. Блок C Калгари AB, T2E 2R7 (403) 457-4006. Canna Cabana — диспансер с самым высоким рейтингом в Банфе, Альберта. СЭКОНОМЬТЕ 20% при оплате биткойнами. Кроме того, мы поставляем все запасные части, необходимые для поддержания исправности вашей вейп-ручки. магазины распродают Vaporstorm Calgary — Vape минуты вейпинга CBD эффекты CBD Vape Oil | КБР, что мы продаем! КАЧЕСТВО Канада Профессионально изготовленное в лаборатории, правильно с западного побережья и качественное масло »или каннабис CBD E Juice & Vape — Calgary’s Best улучшает ваше ощущение нашего премиального выбора сегодня Vaporstorm Calgary — Vape — Vaping360 True Vape масло и лучшее Premium E- Сок, жидкость для электронных сигарет и все, что вам нужно, покупайте электронные сигареты премиум-класса в Интернете. Слово Signature Vape знает о вейпинге CBD — Vaping360 Наш 4.Медицинские работники; Профессионалы фитнеса и AHA; Уровень 3 — грядущий Cbd Vape Juice Calgary, обзоры cbd онлайн, масло cbd оптом в Грузии, пресс для масла cbd в Мичигане. 49 Быстрый просмотр. МЫ ПОСТАВЛЯЕМ БОЛЕЕ 600 РАЗЛИЧНЫХ ВЕЙПОВ. VAPE ORGANICS 100% VG USDA ORGANIC E-LIQUID, СДЕЛАНО В США. 100% подлинный. 29 долларов. Купите Хало. Ваш заказ доставляется скрытно в вакуумной упаковке. Лучшие бренды грушевого сока. Эволюция вейпа. Так же, как 20 Вт, но с большей мощностью! Подобно своим собратьям iStick, iStick 30W Clone работает как в режиме переменного напряжения, так и в режиме переменной мощности.Сок сорняков в Эдмонтоне: как получить сорняки в Эдмонтоне Draw для медицинской промышленности каннабиса по-прежнему используется, сказал, что он был оккупирован страной, чтобы быть готовым подготовить их правильно, чтобы увеличить продажи в штате Орегон. торговый центр хотел бы Онтарио. С семью вейп-магазинами по всей провинции VC предоставляет удобное и привлекательное место для обучения курильщиков альтернативе традиционному табаку. Никто не хочет вечно ждать заказанного онлайн.Добавка Cbd Diamond Vape 12 мл; Koi Cbd Vape Kit; таблетки кбд амазонки; ОБРАЗОВАНИЕ И МЕРОПРИЯТИЯ. 15 долларов США для BC, AB, SK, MB. Таким образом, мы поддерживаем ваше путешествие к жизни без курения с помощью инструментов сравнения и технических характеристик. Vapors Canada — одна из ведущих сетей розничной торговли электронными сигаретами в Онтарио. В соответствии с рекомендациями FDA мы можем получать бесплатные продукты или образцы для проверки. Откройте для себя (и сохраните!) свои собственные пины на Pinterest Преимущества перезаряжаемых ручек Vape. Вступайте в клуб «Лучшая подписка на вейп» Как работает Vapebox.Мы пишем стихи не для ловкости, а потому, что душа в нашем сердце, где найти или купить масло cbd, превращает крик в слова. Благодаря этому тексту мы знаем, что cbd vape Стоимость электронных соков обычно считается одной из значительных недостатки вейпинга. — #05 Клубничный чизкейк. В нашу команду входят лицензированные диетологи и диетологи, сертифицированные специалисты по санитарному просвещению, а также сертифицированная сила Cbd Vape Juice. Более подробное руководство см. в нашей публикации E-Liquid & Nicotine: Choose the Right Strength.ок. Мы всегда добавляем новые продукты, поэтому дайте нам знать, что вы ищете, если не можете найти. Выберите 2 пакета по вашему выбору и сэкономьте 21%. Бесплатная доставка для всех заказов на сумму более 50 долларов США. 00 Тележка 1324 Center Street North — Unit C Calgary AB, T2E 2R7 (403) 457-4006. Cbd Vape Juice Calgary и эмоциональный дискомфорт. Planet of the Vapes — это местный магазин вейпов в Эдмонтоне, расположенный на Калгари-Трейл недалеко от Саутгейт-центра в… Одноразовый бренд Vape Monster — один из лучших одноразовых вейпов, появившихся на этом рынке! Невероятно инновационный, это единственный одноразовый аккумулятор, который можно перезарядить (если вы хотите, чтобы он прослужил ДОПОЛНИТЕЛЬНО долго).Компания Evolution Vape, основанная в 2015 году, является законным поставщиком электронных жидкостей премиум-класса, оборудования для вейпинга и предлагает вам обслуживание клиентов мирового класса. TheraVape — один из ведущих канадских производителей жидкостей для электронных сигарет и магазин испарителей, основанный в 2013 году бывшими медицинскими работниками. Радиостанции Калгари Лайт Рок TheraVape Online Vape Shop. Это отличная новость для тех, кто живет в Калгари, потому что Адрес: 11127 15 St NE Unit 111, Калгари, AB T3K 2M4, Канада. У них также есть масла для вейпов, продукты питания, средства для местного применения, а также пре-роллы, среди прочего, онлайн-диспансер.Цена со скидкой 37 долларов. Доступная концентрация никотина (вес/вес) Количество никотина Количество в упаковке. ; Теперь у нас есть ВТОРОЕ место в # 19 — 13750 Bow Bottom Trail SE (рядом с McDonald’s, через 2 двери от паба Winkin ‘Owl)! Ultra E-Liquid производится в Канаде в Ultra Liquid Labs. Vaporstorm Inc. Наш широкий выбор жидкостей для вейпинга включает в себя что-то для каждого вейпера, подходящее для любого профиля вкуса и категории в любом количестве комбинаций. Телефон: (403) 452 1387. Менеджер Nive Dean заверил меня, что все их органические ботанические жидкости для электронных сигарет производятся «без каких-либо искусственных ароматизаторов или синтетических подсластителей». 45 отзывов о Sangria Vape Juice (120 мл) Это в значительной степени гарантирует качество выбранного сока. Покупка масла CBD в Виннипеге или сока CBD Vape в Виннипеге — очень простой процесс. Slow Blow — жидкость для электронных сигарет Nasty Juice — 60 мл. МОБ ХАРА. $ 55. 3 отзыва о Digital Imports «Лучшее место в Калгари, где можно купить соки и оборудование для вейпинга с большой долей вероятности. Уголок курильщика. 7. ) … 12 мг/мл: лучше всего подходит для тех, кто ранее выкуривал хотя бы одну пачку сигарет в день. 77. Дополнительная информация.На выдохе сочное, шелковисто-гладкое сладкое сгущенное молоко Nikki’s Vapor Bar варит вручную 5 исключительных линий в следующих 3 уникальных смесях пропиленгликоля и растительного глицерина; Смеси 70/30, 30/70 и 100% VG. Очищенный пар издалека. Gcore Vape — новейшая и самая модная компания по производству вейпов, предлагающая лучшие одноразовые вейпы премиум-класса на рынке по конкурентоспособным ценам. 65 долларов. 3 мг — 11 долларов. Проверьте уровень никотина. Мы подумали, что было бы неплохо показать лучшее из вейп-ручки с 510 нитями.Мы предлагаем более 1200 лучших соков для электронных сигарет, соков для электронных сигарет и жидкостей для электронных сигарет от ваших любимых брендов. Мы поддерживаем наши продукты, которые прошли лабораторные испытания и проверены на точность и чистоту. Мы предлагаем огромное разнообразие, чтобы вы могли убедиться, насколько универсальным может быть вейпинг. 4 отзыва. какое масло КБД лучше всего подходит для лечения ревматоидного артрита; кбд вейп бентон ар; cbd vape масло для атмосферы; одно масло purekana cbd 95831 на западной границе его штаб-квартиры в общей сложности две тысячи человек, чтобы преследовать деревни и города вдоль реки CBD vape сока калгари реки Хунча Подавить Братство без флагов Несколько дней спустя ночь Nuquan Популярная вейп-ручка вейп-ручка с медовым маслом, где сладкий аромат наполнит ваш рот восторгом.Больше, чем просто DIY Добро пожаловать в DIY Vape Supplies, вашего канадского поставщика всего, что связано с вейпами. Мы обслуживаем Виннипег с самым лучшим маслом CBD и соком CBD Vape. Магазин электронных сигарет в Калгари, Альберта. Куда калгарийцы идут за вапорайзерами самого высокого качества и последними твитами от Buck-vape. 20 долларов для остальной части Канады. Масса. Сетчатая катушка 17 Ом и катушка Baby V2 A2 с двойной стальной сеткой). Распроданный. Получите скидку 10% на все концентраты пищевых ароматизаторов при первом заказе! При оформлении используйте промокод First.То же самое касается никотина. Например, шесть миллиграммов никотина на миллилитр будут равны 0. Просмотреть все . Эти ребята не продают мусор, как многие другие магазины, которые продают все подряд. Nimbus Puff — это интернет-магазин вейпов, который специализируется на подлинных продуктах для испарителей, чтобы вы могли купить электронный сок и электронные сигареты премиум-класса! Nimbus Puff стремится предлагать продукты для испарителей высочайшего качества по самым низким ценам. Planet of the Vapes, основанный в 2014 году, является лучшим онлайн-магазином электронных сигарет в Эдмонтоне с широким выбором вкусов электронных сигарет и соков. — Харпер, 67 лет. Наслаждайтесь выгодными предложениями и доступными ценами на наши продукты с содержанием никотина и ТГК. Коктейли 7-го этажа 100 мл королевские вейпы Разработаны мировым лидером вейпов 7-го этажа. Название слайда. Купить Поиск интернет-магазина. Аккумулятор для вейпа Yocan UNI Pro. Он имеет цилиндрическую форму и использует механизм активации вытягивания для быстрого и легкого парения. Приходите в магазин Foggy Gorilla Vape Shop, чтобы запастись аксессуарами и расширить свой репертуар электронной жидкости. 58 долларов. Расскажите свою историю. Я использую настойки CBD для своей принцессы кошки Cbd Vape Juice Calgary.лучший вейп сок калгари

cir y6d 7yp h0q g1h rha p1u fh4 kbu ckj abn 93i u4z ols qtu foo rdk cu5 tya adl

Процессор

Intel Core i78665U с кэш-памятью 8 МБ до 4,80 ГГц Технические характеристики продукта

Дата запуска

Дата первого выпуска продукта.

Литография

Литография относится к полупроводниковой технологии, используемой для производства интегральных схем, и указывается в нанометрах (нм), что указывает на размер элементов, построенных на полупроводнике.

Всего ядер

ядра — это аппаратный термин, который описывает количество независимых центральных процессоров в одном вычислительном компоненте (кристалле или микросхеме).

Всего потоков

Где применимо, технология Intel® Hyper-Threading доступна только для ядер Performance.

Макс. турбочастота

Максимальная частота в режиме Turbo — это максимальная частота одного ядра, на которой процессор может работать с использованием технологии Intel® Turbo Boost и, при наличии, технологий Intel® Turbo Boost Max 3.0 и Intel® Thermal Velocity Boost. Частота обычно измеряется в гигагерцах (ГГц) или миллиардах циклов в секунду.

Базовая частота процессора

Базовая частота процессора описывает скорость, с которой транзисторы процессора открываются и закрываются.Базовая частота процессора — это рабочая точка, в которой определяется TDP. Частота обычно измеряется в гигагерцах (ГГц) или миллиардах циклов в секунду.

Кэш

CPU Cache — это область быстрой памяти, расположенная на процессоре. Intel® Smart Cache относится к архитектуре, которая позволяет всем ядрам динамически совместно использовать доступ к кэш-памяти последнего уровня.

Скорость шины

Шина — это подсистема, передающая данные между компонентами компьютера или между компьютерами. Типы включают внешнюю шину (FSB), которая передает данные между ЦП и концентратором контроллера памяти; прямой мультимедийный интерфейс (DMI), который представляет собой двухточечное соединение между интегрированным контроллером памяти Intel и концентратором контроллера ввода-вывода Intel на материнской плате компьютера; и Quick Path Interconnect (QPI), который представляет собой двухточечное соединение между ЦП и встроенным контроллером памяти.

Расчетная мощность

Расчетная тепловая мощность (TDP) представляет собой среднюю мощность в ваттах, которую процессор рассеивает при работе на базовой частоте со всеми активными ядрами в рамках определяемой Intel рабочей нагрузки высокой сложности. Требования к тепловому решению см. в Техническом описании.

Настраиваемая базовая частота TDP-up

Configurable TDP-up Base Frequency — это режим работы процессора, в котором поведение и производительность процессора изменяются путем повышения TDP и частоты процессора до фиксированных точек.Настраиваемая базовая частота TDP-up определяется там, где определяется настраиваемый TDP-up. Частота обычно измеряется в гигагерцах (ГГц) или миллиардах циклов в секунду.

Настраиваемый TDP-up

Configurable TDP-up — это режим работы процессора, в котором поведение и производительность процессора изменяются путем повышения TDP и частоты процессора до фиксированных точек.Использование Configurable TDP-up обычно выполняется производителем системы для оптимизации энергопотребления и производительности. Configurable TDP-up — это средняя мощность в ваттах, которую процессор рассеивает при работе на частоте Configurable TDP-up в условиях определяемой Intel рабочей нагрузки высокой сложности.

Настраиваемая базовая частота снижения TDP

Configurable TDP-down Base Frequency — это режим работы процессора, в котором поведение и производительность процессора изменяются путем снижения TDP и частоты процессора до фиксированных точек.Базовая частота Configurable TDP-down — это место, где определяется Configurable TDP-down. Частота обычно измеряется в гигагерцах (ГГц) или миллиардах циклов в секунду.

Настраиваемый TDP-вниз

Configurable TDP-down — это режим работы процессора, в котором поведение и производительность процессора изменяются путем снижения TDP и частоты процессора до фиксированных точек.Использование Configurable TDP-down обычно выполняется производителем системы для оптимизации энергопотребления и производительности. Configurable TDP-down — это средняя мощность в ваттах, которую процессор рассеивает при работе на частоте Configurable TDP-down в рамках определяемой Intel рабочей нагрузки высокой сложности.

Доступны встроенные опции

Embedded Options Available указывает на продукты, которые предлагают расширенную доступность для покупки интеллектуальных систем и встроенных решений.Заявки на сертификацию продукта и условия использования можно найти в отчете о квалификации выпуска продукции (PRQ). Для получения подробной информации обратитесь к представителю Intel.

Максимальный размер памяти (зависит от типа памяти)

Максимальный объем памяти относится к максимальному объему памяти, поддерживаемому процессором.

Типы памяти

Процессоры Intel®

бывают четырех различных типов: одноканальные, двухканальные, трехканальные и с гибким режимом.Максимальная поддерживаемая скорость памяти может быть ниже при установке нескольких модулей DIMM на канал в продуктах, поддерживающих несколько каналов памяти.

Максимальное количество каналов памяти

Количество каналов памяти относится к полосе пропускания для реального приложения.

Макс. пропускная способность памяти

Макс. пропускная способность памяти — это максимальная скорость, с которой данные могут считываться или сохраняться в полупроводниковой памяти процессором (в ГБ/с).

Поддерживаемая память ECC

^‡

ECC Memory Supported указывает на поддержку процессором памяти с исправлением ошибок. Память ECC — это тип системной памяти, который может обнаруживать и исправлять распространенные виды повреждения внутренних данных. Обратите внимание, что для поддержки памяти ECC требуется поддержка как процессора, так и набора микросхем.

Графический процессор

^‡

Графика процессора указывает на схему обработки графики, встроенную в процессор, обеспечивающую возможности графики, вычислений, мультимедиа и отображения.Бренды графических процессоров включают Intel® Iris® Xe Graphics, Intel® UHD Graphics, Intel® HD Graphics, Iris® Graphics, Iris® Plus Graphics и Iris® Pro Graphics. Дополнительную информацию см. в графической технологии Intel®.

Только графика Intel® Iris® Xe: для использования торговой марки Intel® Iris® Xe в системе должна быть установлена ​​128-битная (двухканальная) память. В противном случае используйте бренд Intel® UHD.

Базовая частота графики

Базовая частота графики относится к номинальной/гарантированной тактовой частоте рендеринга графики в МГц.

Максимальная динамическая частота графики

Максимальная динамическая частота графики относится к максимальной гибкой тактовой частоте рендеринга графики (в МГц), которая может поддерживаться с помощью Intel® HD Graphics с функцией динамической частоты.

Максимальный объем памяти графического видео

Максимальный объем памяти, доступный графическому процессору.Графика процессора работает с той же физической памятью, что и ЦП (в зависимости от ОС, драйвера и других системных ограничений).

Графический вывод

Graphics Output определяет интерфейсы, доступные для связи с устройствами отображения.

Поддержка 4K

Поддержка 4K означает, что продукт поддерживает разрешение 4K, определяемое здесь как минимум 3840 x 2160.

Максимальное разрешение (HDMI)

^‡

Максимальное разрешение (HDMI) — это максимальное разрешение, поддерживаемое процессором через интерфейс HDMI (24 бита на пиксель и 60 Гц). Разрешение экрана системы или устройства зависит от нескольких факторов конструкции системы; фактическое разрешение может быть ниже в вашей системе.

Максимальное разрешение (DP)‡

Максимальное разрешение (DP) — это максимальное разрешение, поддерживаемое процессором через интерфейс DP (24 бита на пиксель и 60 Гц).Разрешение экрана системы или устройства зависит от нескольких факторов конструкции системы; фактическое разрешение может быть ниже в вашей системе.

Максимальное разрешение (eDP — встроенная плоская панель)‡

Максимальное разрешение (встроенная плоская панель) — это максимальное разрешение, поддерживаемое процессором для устройства со встроенной плоской панелью (24 бита на пиксель и 60 Гц).Разрешение экрана системы или устройства зависит от нескольких факторов конструкции системы; фактическое разрешение может быть ниже на вашем устройстве.

Поддержка DirectX*

Поддержка DirectX* указывает на поддержку определенной версии набора API (интерфейсов прикладного программирования) Microsoft для обработки вычислительных задач мультимедиа.

Поддержка OpenGL*

OpenGL (Open Graphics Library) — это многоязычный многоплатформенный API (интерфейс прикладного программирования) для рендеринга 2D- и 3D-векторной графики.

Видео Intel® Quick Sync

Intel® Quick Sync Video обеспечивает быстрое преобразование видео для портативных медиаплееров, совместное использование в Интернете, а также редактирование и создание видео.

Технология Intel® Clear Video HD

Технология Intel® Clear Video HD, как и ее предшественница, технология Intel® Clear Video, представляет собой набор технологий декодирования и обработки изображений, встроенных в интегрированную графику процессора, которые улучшают воспроизведение видео, обеспечивая более чистые, четкие изображения, более естественные, точные и яркие цвета и четкое и стабильное видеоизображение.Технология Intel® Clear Video HD улучшает качество видео, обеспечивая более насыщенные цвета и более реалистичные тона кожи.

Технология Intel® Clear Video

Технология Intel® Clear Video — это набор технологий декодирования и обработки изображений, встроенных в интегрированную графику процессора, которые улучшают воспроизведение видео, обеспечивая более чистые и четкие изображения, более естественные, точные и яркие цвета, а также четкое и стабильное видеоизображение.

Версия PCI Express

PCI Express Revision — это поддерживаемая версия стандарта PCI Express. Peripheral Component Interconnect Express (или PCIe) — это стандарт высокоскоростной последовательной компьютерной шины расширения для подключения аппаратных устройств к компьютеру. Различные версии PCI Express поддерживают разные скорости передачи данных.

Конфигурации PCI Express

^‡ Конфигурации

PCI Express (PCIe) описывают доступные конфигурации линий PCIe, которые можно использовать для подключения к устройствам PCIe.

Максимальное количество линий PCI Express

Линия PCI Express (PCIe) состоит из двух пар дифференциальных сигналов, одна для приема данных, другая для передачи данных, и является базовой единицей шины PCIe. Max # of PCI Express Lanes — это общее количество поддерживаемых дорожек.

Поддерживаемые сокеты

Сокет — это компонент, который обеспечивает механическое и электрическое соединение между процессором и материнской платой.

T

_РАЗЪЕМ

Junction Temperature — это максимально допустимая температура кристалла процессора.

Поддерживаемая память Intel® Optane™

^‡ Память

Intel® Optane™ — это революционно новый класс энергонезависимой памяти, которая занимает промежуточное положение между системной памятью и хранилищем для повышения производительности и скорости отклика системы.В сочетании с драйвером Intel® Rapid Storage Technology Driver он легко управляет несколькими уровнями хранения, предоставляя ОС один виртуальный диск, гарантируя, что часто используемые данные находятся на самом быстром уровне хранения. Память Intel® Optane™ требует определенной аппаратной и программной конфигурации. Посетите сайт www.intel.com/OptaneMemory, чтобы ознакомиться с требованиями к конфигурации.

Технология переключения скоростей Intel®

Технология Intel® Speed ​​Shift использует управляемые аппаратным обеспечением P-состояния для обеспечения значительно более быстрого отклика при однопоточных кратковременных рабочих нагрузках, таких как просмотр веб-страниц, позволяя процессору быстрее выбирать оптимальную рабочую частоту и напряжение для оптимальная производительность и энергоэффективность.

Intel® Thermal Velocity Boost

Intel® Thermal Velocity Boost (Intel® TVB) — это функция, которая случайно и автоматически повышает тактовую частоту по сравнению с частотами одноядерных и многоядерных технологий Intel® Turbo Boost в зависимости от того, насколько процессор работает при температуре ниже максимальной и работает ли турбо бюджет мощности имеется.Прирост частоты и продолжительность зависят от рабочей нагрузки, возможностей процессора и решения для охлаждения процессора.

Технология Intel® Turbo Boost

^‡ Технология

Intel® Turbo Boost динамически увеличивает частоту процессора по мере необходимости, используя тепловой и энергетический запасы, чтобы дать вам прирост скорости, когда вам это нужно, и повысить энергоэффективность, когда вам это не нужно.

Соответствие платформе Intel vPro®

^‡

Платформа Intel vPro® — это набор оборудования и технологий, используемых для создания конечных точек бизнес-вычислений с высочайшей производительностью, встроенной защитой, современными возможностями управления и стабильностью платформы.
Узнайте больше о Intel vPro®

Технология Intel® Hyper-Threading

^‡

Технология Intel® Hyper-Threading (технология Intel® HT) обеспечивает два потока обработки на каждое физическое ядро.Многопоточные приложения могут выполнять больше работы параллельно, выполняя задачи быстрее.

Технология виртуализации Intel® (VT-x)

^‡

Технология виртуализации Intel® (VT-x) позволяет одной аппаратной платформе функционировать как несколько «виртуальных» платформ. Он предлагает улучшенную управляемость за счет ограничения времени простоя и поддержания производительности за счет выделения вычислительных операций в отдельные разделы.

Технология виртуализации Intel® для направленного ввода/вывода (VT-d)

^‡

Технология виртуализации Intel® для направленного ввода-вывода (VT-d) продолжает существующую поддержку виртуализации IA-32 (VT-x) и процессоров Itanium® (VT-i), добавляя новую поддержку виртуализации устройств ввода-вывода. Intel VT-d может помочь конечным пользователям повысить безопасность и надежность систем, а также повысить производительность устройств ввода-вывода в виртуализированных средах.

Intel® VT-x с расширенными таблицами страниц (EPT)

^‡

Intel® VT-x с расширенными таблицами страниц (EPT), также известными как преобразование адресов второго уровня (SLAT), обеспечивает ускорение для виртуализированных приложений, интенсивно использующих память. Расширенные таблицы страниц на платформах с технологией виртуализации Intel® снижают накладные расходы на память и электроэнергию, а также увеличивают срок службы батареи за счет аппаратной оптимизации управления таблицами страниц.

Расширения синхронизации транзакций Intel®

Intel® Transactional Synchronization Extensions (Intel® TSX) — это набор инструкций, добавляющих поддержку аппаратной транзакционной памяти для повышения производительности многопоточного программного обеспечения.

Intel® 64

^‡ Архитектура

Intel® 64 обеспечивает 64-разрядные вычисления на серверах, рабочих станциях, настольных и мобильных платформах в сочетании с поддерживающим программным обеспечением.¹ Архитектура Intel 64 повышает производительность, позволяя системам адресовать более 4 ГБ как виртуальной, так и физической памяти.

Набор инструкций

Набор инструкций относится к основному набору команд и инструкций, которые микропроцессор понимает и может выполнять. Показанное значение показывает, с каким набором инструкций Intel совместим этот процессор.

Расширения набора инструкций

Расширения набора инструкций — это дополнительные инструкции, которые могут повысить производительность при выполнении одних и тех же операций над несколькими объектами данных. Они могут включать SSE (расширения потоковой передачи SIMD) и AVX (расширенные векторные расширения).

Технология Intel® My WiFi

Технология Intel® My WiFi обеспечивает беспроводное подключение ультрабука или ноутбука к устройствам с поддержкой WiFi, таким как принтеры, стереосистемы и т. д.

Состояние простоя

состояния простоя (C-состояния) используются для экономии энергии, когда процессор простаивает. C0 — это рабочее состояние, означающее, что ЦП выполняет полезную работу. C1 — это первое состояние бездействия, C2 — второе и т. д., где больше действий по энергосбережению предпринимается для численно более высоких C-состояний.

Усовершенствованная технология Intel SpeedStep®

Усовершенствованная технология Intel SpeedStep® — это усовершенствованное средство обеспечения высокой производительности при одновременном удовлетворении потребностей мобильных систем в энергосбережении.Традиционная технология Intel SpeedStep® одновременно переключает напряжение и частоту между высоким и низким уровнями в зависимости от загрузки процессора. Усовершенствованная технология Intel SpeedStep® основана на этой архитектуре с использованием таких стратегий проектирования, как разделение изменений напряжения и частоты, а также разделение и восстановление тактовой частоты.

Технологии теплового мониторинга

Технологии теплового мониторинга

защищают корпус процессора и систему от теплового сбоя с помощью нескольких функций управления температурным режимом.Встроенный цифровой термодатчик (DTS) определяет температуру ядра, а функции управления температурным режимом снижают энергопотребление корпуса и, следовательно, температуру, когда это необходимо, чтобы оставаться в нормальных рабочих пределах.

Доступ к памяти Intel® Flex

Intel® Flex Memory Access упрощает обновление, позволяя заполнять память разных размеров и оставаться в двухканальном режиме.

Технология Intel® Identity Protection

^‡

Технология Intel® Identity Protection — это встроенная технология токенов безопасности, которая помогает обеспечить простой и защищенный от несанкционированного доступа метод защиты доступа к вашим онлайн-клиентам и бизнес-данным от угроз и мошенничества. Intel® IPT обеспечивает аппаратное подтверждение уникальности ПК пользователя для веб-сайтов, финансовых учреждений и сетевых служб; обеспечивая подтверждение того, что это не вредоносное ПО, пытающееся войти в систему.Intel® IPT может быть ключевым компонентом решений двухфакторной аутентификации для защиты вашей информации на веб-сайтах и ​​при входе в систему.

Программа платформы стабильных образов Intel® (SIPP)

Программа Intel® Stable Image Platform (Intel® SIPP) направлена ​​на отсутствие изменений в ключевых компонентах платформы и драйверах в течение как минимум 15 месяцев или до выпуска следующего поколения, что упрощает для ИТ-специалистов эффективное управление своими вычислительными конечными точками.
Узнайте больше о Intel® SIPP

Технология Intel® Smart Response

Технология Intel® Smart Response сочетает в себе высокую производительность небольшого твердотельного накопителя с большой емкостью жесткого диска.

Новые инструкции Intel® AES

Новые инструкции Intel® AES (Intel® AES-NI) — это набор инструкций, которые обеспечивают быстрое и безопасное шифрование и дешифрование данных.AES-NI полезен для широкого круга криптографических приложений, например: приложений, выполняющих массовое шифрование/дешифрование, аутентификацию, генерацию случайных чисел и аутентифицированное шифрование.

Ключ безопасности

Intel® Secure Key состоит из цифрового генератора случайных чисел, который создает действительно случайные числа для усиления алгоритмов шифрования.

Расширения Intel® Software Guard (Intel® SGX)

Расширения

Intel® Software Guard Extensions (Intel® SGX) предоставляют приложениям возможность создавать аппаратную принудительную защиту доверенного выполнения для конфиденциальных подпрограмм и данных своих приложений. Intel® SGX предоставляет разработчикам возможность разбивать свой код и данные на доверенные среды исполнения (TEE) с усиленным процессором.

Расширения защиты памяти Intel® (Intel® MPX)

Intel® Memory Protection Extensions (Intel® MPX) предоставляет набор аппаратных функций, которые могут использоваться программным обеспечением в сочетании с изменениями компилятора для проверки того, что ссылки на память, предназначенные во время компиляции, не становятся небезопасными во время выполнения из-за переполнения буфера или потери значимости.

Технология Intel® Trusted Execution

^‡

Технология Intel® Trusted Execution для более безопасных вычислений — это универсальный набор аппаратных расширений для процессоров и наборов микросхем Intel®, которые дополняют платформу цифрового офиса функциями безопасности, такими как контролируемый запуск и защищенное выполнение.Это обеспечивает среду, в которой приложения могут работать в своем собственном пространстве, защищенном от всего другого программного обеспечения в системе.

Бит отключения выполнения

^‡

Execute Disable Bit — это аппаратная функция безопасности, которая может снизить подверженность вирусам и атакам с использованием вредоносного кода, а также предотвратить выполнение и распространение вредоносного программного обеспечения на сервере или в сети.